冠突曲霉 veA基因缺失型与野生型的差异代谢物研究

为了鉴定冠突曲霉 veA基因缺失型与野生型的差异代谢物,寻找与 veA 基因产孢相关的代谢物,采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）的代谢组学技术,分别收集2个菌株培养48h的菌丝体,经液氮研磨、超声萃取、三甲基氯硅烷衍生化后上机检测,将GC-MS检测的数据进行前处理和代谢物注释,并用统计学相关软件进行差异物筛选和相关性分析。结果显示,共鉴定99种代谢物,其中差异代谢物41种,野生型菌株中表达上调的显著差异代谢物有20种, veA缺失型菌株中表达上调的显著差异代谢物有21种,并预测差异代谢物的相关性,发现与623种代谢物产生相关性,其中313种呈正相关,310种呈负相关。筛选出来的差异代谢物涉及有机酸、氨基酸、碳水化合物、醇类、脂肪酸类等多种代谢物质,其中有机酸和氨基酸类代谢物占主导地位。本研究结果为进一步研究冠突曲霉代谢物与产孢的关联提供了一定的理论基础。     

冬虫夏草子囊孢子的发育

经光学显微镜观察,冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]子囊孢子的发育可分为三个阶段:(1)原子囊孢子期:孢子近球形,椭圆形,卵圆形或长圆形,4.8—10×3.6—6μm。(2)孢子伸长期:从孢子一端突出,伸长生长,出现分隔,隔细胞较长,30—37.5μm。(3)子囊孢子形成期:孢子继续伸长并不断出现分隔,隔间长6—12μm。一般仅有两个孢子成熟,其余多数原子囊孢子败育,不萌发或形成极纤细的丝状物。基于子囊孢子发育的过程,讨论了冬虫夏草及其近缘种的分类地位。     

独蒜兰种子共生萌发研究

采用从独蒜兰分离的菌根真菌与其种子在燕麦培养基上共生萌发.结果表明GN21、GN23和GN24的作用效果较好,其中GN21萌发率84.6%,高于对照7个百分点,达到显著性.同时也表明,从同一兰科植物分离到的属于同一属的不同菌根真菌种,有的能明显促进种子萌发,有的却不能促进萌发,甚至产生病斑,引起原球茎死亡.     

采集自贵州的两个稀有虫草

1994年6月采集自贵州梵净山和荔波茂兰保护区的虫草属真菌,中国新记录种──螳螂虫草（CordycepsmantidaecolaKob.etShim.）和属于蛇形虫草亚属头状组的一新种──贵州虫草（CordycepsguizhouensisLiu,LiangetLiusp.nov）。贵州虫草寄生于刺蛾茧上,茧表面褐色,椭圆形,大小为4～6×5～9mm,在一个茧上可长1～2根子座,子座单生,不分枝,圆柱形,高1．5～5cm;柄和可孕部分界线不明,粗细相当,直径1～2mm,均为淡黄色,可孕部分皮层为丝状细胞的伪柔组织,有的柄部为白色;子囊壳散埋生,梨形,黄色,230～250×160～180μm;子囊为棍棒状或纺锤形,60～140×5～8μm,头部3～4μm;每个子囊中有8个子囊孢子,子囊孢子梭形,具3～4个隔膜,40～60×0．8～1．7μm,不断裂成次生子囊孢子。     

马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定

RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略.马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失.本文以PW的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300 bp和354 bp两个片段,正向和反向分别插入植物表达载体pROKⅡ的35S启动子下游,从而构建了以PVY的CP基因为靶标的RNAi植物表达载体pROKY300,转入农杆菌EHA105中,以农杆菌渗入法在本氏烟中瞬时表达与PVY CP同源的hairpin RNA.结果表明,瞬时表达的hairpinRNA有效干涉了PVY侵染.     

古尼拟青霉最佳镇痛活性培养基的筛选

以1株有镇痛活性的古尼拟青霉为试验材料,从5种培养基中筛选出使该株产生最佳镇痛活性成分的培养基。结果表明:产生镇痛活性成分的最佳发酵时间为6 d,最佳培养基为改良沙氏培养基Ⅰ,其成分为葡萄糖20 g,甘油5 g,可溶性淀粉5 g,KCl 0.5 g,MgSO4.7H2O 0.5 g,KH2PO4.3H2O 1 g,FeSO4.7H2O 0.5 g,pH 7～8。     

利用抑制性差减杂交技术鉴定谢瓦氏曲霉间型变种产孢相关的基因

谢瓦氏曲霉间型变种Aspergillus chevalieri var.intermedius俗称"金花菌",是茯砖茶发酵中的优势菌种,该菌在不同的渗透压胁迫下产生不同类型的孢子。采用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),以低渗条件下产生的子囊孢子和高渗条件下产生的分生孢子为材料分别与营养菌丝体构建两个正反向文库。每个库随机挑选400个阳性克隆进行测序。然后将所得到的基因片段在GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比对,筛选出的差异表达的基因涉及蛋白质代谢、细胞代谢、转录调控等多个方面,其中可能参与有性产孢调控的基因有13条,可能参与无性产孢调控的基因有10条。     

冠突曲霉Fig基因敲除菌株的构建及表型分析

为了研究冠突曲霉(Aspergillus cristatus) Fig基因的功能,本研究采用同源重组的方法获得敲除株。并对敲除株进行功能验证。结果显示对Fig基因敲除株培养观察并与野生型菌株相比发现,在含有不同浓度NaCl的MYA培养基中,仍能产生成熟的子囊孢子和分生孢子,但分生孢子数量是野生型的1/4,子囊孢子数量是野生型的1/5,且敲除株菌落几乎没有渗出液,无皱褶,菌落表面干燥,色素产生量急剧下降,这些结果表明Fig基因对冠突曲霉产孢起正调控,本实验为冠突曲霉发育调控机制的研究提供了一定的技术基础。     

感染蛴螬的一种新虫草

描述了感染鞘翅目幼虫的茂兰虫草新种（ＣｏｒｄｙｃｅｐｓｍａｏｌａｎｅｎｓｉｓＺ．Ｙ．ＬｉｕｅｔＬｉａｎｇｓｐ．ｎｏｖ）其主要特征为子座单生,可孕部分白色,近球形或卵圆形,其皮层栅状,１００～１２５μｍ柄中部地上和地下相交处有瘤节,子囊壳黄色,埋生,６００～７００ｘ３００～３５０μｍ子囊柱状,３００～４５０×３～４．５μｍ,每个子囊具有４个丝状多隔的子囊Ｃ．ｇｒａｃｉｌｉｏｉｄｅｓ．Ｃ．ｉｎｓｉｇｎ     

两种虫草无性型的微循环产孢确证

从贵阳地区采得两种虫草,古厄虫草Cordycepsgunnii（Bark．）Berk．和布氏虫草CordycepsbrongniartiiShimazu。经诱发它们子囊孢子的微循环产孢再次确证了古尼虫草的无性型是古尼拟青霉PaecilomycesgunniiLiang,布氏虫草的无性型是布氏白僵菌Beauveriabrongniartii（Sacc．）Peteh。