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通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素4-10 (ACTH(4-10))与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的融合基因,并将它重组克隆到表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET-ACTH(4-10)-GDNF,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导可高效表达ACTH(4-10)-GDNF融合蛋白.用Ni2+-NTA树脂一步法纯化目的蛋白,纯度达85%以上.纯化和复性的ACTH(4-10)-GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活,作用强于ACTH(4-10)及GDNF蛋白. 相似文献
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根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)的氨基酸序列,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的6条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化这6条寡核苷酸片段,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因.将PACAP基因克隆至pGEX-4T-3质粒中转化BL21进行表达分析,融合蛋白约占细胞总蛋白的30%,其中部分为可溶性,部分以包涵体形式存在.通过亲和层析纯化GST-PACAP融合蛋白,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活. 相似文献
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垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成表达与活性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary
adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)的氨基酸序列,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的6条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化这6条寡核苷酸片段,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因.将PACAP基因克隆至pGEX-4T-3质粒中转化BL21进行表达分析,融合蛋白约占细胞总蛋白的30%,其中部分为可溶性,部分以包涵体形式存在.通过亲和层析纯化GST-PACAP融合蛋白,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活. 相似文献
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将人胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因克隆入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经G418筛选得到多拷贝转化子,甲醇诱导表达。将人GDNF基因克隆入昆虫病毒转移载体pBacPAK8中,与线性化Bm-BacPAK6修饰病毒基因组DNA共转染家蚕细胞,经体内重组,筛选到重组病毒。用重组病毒感染家蚕幼虫,5d后收集血淋巴。SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了酵母培养上清液及家蚕幼虫血淋巴中含有GDNF蛋白。活性研究表明,甲醇酵母及家蚕幼虫表达的GDNF蛋白能促进多巴胺能神经元的存活和突起生长。 相似文献
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家蚕NPV SOD基因序列和在大肠杆菌中表达 总被引:3,自引:0,他引:3
通过PCR 克隆了家蚕核型多角体病毒(BmNPV) SOD基因, 并在大肠杆菌中进行表达, 证明了Bm NPVSOD基因产物确有SOD活性, 其活力单位约为576 u/mL 培养液。DNA 测序结果表明Bm NPV SOD 基因编码151 个氨基酸, 与人的SOD1 基因的核苷酸同源性为56 % , 与AcNPV 拟为的SOD基因同源性为97 .2% 。 相似文献