金属硫蛋白抗自由基损伤研究

采用电子自旋共振技术(ESR),以马来酰亚胺自旋标记完整血红细胞和细胞膜,监测氧自由基引起的ESR波谱的变化,研究了不同亚型、不同结合金属的兔肝金属硫蛋白(MT)清除·OH和其对辐射损伤的防护作用。首次观察到四种MT清除·OH及抗辐射的能力与其亚型和结合金属种类有以下顺序的关系:ZnMT_2>ZnMT_1>CdMT_2>CdMT_1。而且还观察到MT对自由基损伤具有修复作用,其作用的强弱和清除·OH的能力大小顺序一致。对实验结果的分子机制进行了某些探讨。     

金属硫蛋白(Metallothionein,MT)基因在转基因领域的应用

MT丰富的巯基含量及重金属结合能力决定了它功能方面的多样性。本文综述了其高效可诱导性的启动子及其富含半胱氨酸的结构基因在细胞分子生物学,医学,农业及环保方面的转基因的应用及其发展过程。并对其在疾病诊断,环境保护等方面的前景进行了探讨。     

火箭电泳法进行人用狂犬病疫苗抗原的检测

应用火箭电泳法(RIE)建立并优化了人用狂犬病疫苗抗原的检测方法。以传统的动物NIH法对电泳结果进行验证,实验结果显示该方法特异、重复性好、简便易行,与NIH法有较好的相关性。适用于人用狂犬病疫苗中间品抗原的检测,对人用狂犬病疫苗的生产及质量控制有重要意义。     

冻干人用狂犬病纯化疫苗稳定剂的筛选

取同一批人用狂犬病纯化疫苗纯化液,分别加入筛选出的A、B、C和D稳定剂,按已确定的适宜冻干曲线进行冻干后,分别检测其安全、效力、外观、水分等,效力结果显示,使用A、B、D稳定剂的制品在37℃放置3个月,效价降低了48%～60%;使用C稳定剂的制品在37℃放置3个月效价仅下降了16.1%。表明C稳定剂为冻干人用狂犬病纯化疫苗适宜的稳定剂配方。     

拟杆菌与肠道微生态

人和动物的肠道正常微生态体系对于维持机体的健康有重要作用。文章主要介绍了肠道中的优势厌氧菌—— 拟杆菌的作用及其作用机理, 从其基因组角度揭示它对宿主益生作用的根源, 为进一步认识动物与其共生菌的互惠关系提供了重要依据, 同时也为动物肠道疾病的防治提供重要的理论基础。     

拟杆菌与肠道微生态

人和动物的肠道正常微生态体系对于维持机体的健康有重要作用.文章主要介绍了肠道中的优势厌氧菌--拟杆菌的作用及其作用机理,从其基因组角度揭示它对宿主益生作用的根源,为进一步认识动物与其共生菌的互惠关系提供了重要依据,同时也为动物肠道疾病的防治提供重要的理论基础.     

金属硫蛋白-3对dUTPase调节dUTP细胞毒性作用的影响

金属硫蛋白-3（MT-3）,又称神经生长抑制因子,是一种脑特异性金属硫蛋白。人细胞核dUTP焦磷酸酶（dUTP pyrophosphatase, dUTPase）是最近在脑中研究发现的能与人金属硫蛋白-3（human metallothionein-3,hMT-3）相互作用的一个蛋白,两者共同作用具有神经元生长抑制活性。为了探讨hMT-3对dUTPase调节dUTP引起的细胞毒性作用的影响,通过基因转染HEK293细胞观察细胞在dUTP中的生长情况,发现共转染hMT-3和dUTPase基因的细胞比单转染dUTPase或hMT-3基因的细胞具有更强的对dUTP细胞毒性的耐受能力;同时在大肠杆菌BL21中表达重组蛋白,测定hMT-3在dUTPase水解dUTP中的作用,结果显示重组蛋白hMT-3可以促进dUTPase对dUTP的水解。结果均初步证实了hMT-3对dUTPase抵抗dUTP引起的正常细胞死亡有一定的协同作用,为进一步研究dUTPase及其相互作用蛋白hMT-3在化疗中的应用提供理论依据。     

G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达

利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明 ,Rab3a蛋白获得了正确表达     

早老性痴呆大脑cDNA文库构建及目的基因克隆

 取临床确诊为早老性痴呆 (Alzheimer’sdisease ,AD)患者的大脑组织 ,应用磁珠法直接提取mRNA ,电泳检测其质量 .经逆转录合成双链cDNA后 ,用碱性凝胶电泳检测其大小在 0 .2～ 9.0kb范围 ,主要集中在 1.0～ 2 .0kb之间 .层析除去多余的adaptors ,收集大于 4 0 0bp的cDNA片段 ,与载体pYESTrp2连接 ,经电转化后 ,得到克隆总数为 5.1× 10 5的AD病人大脑cDNA文库 .用PCR技术从该文库中扩增得到小肠三叶因子 (intestinaltrefoilfactor ,ITF) [1] 和神经生长抑制因子 (growthin hibitoryfactor,GIF) [2 ] 的cDNA编码区 .研究表明 ,所构建的cDNA文库质量较高 ,可广泛用于AD病研究工作 .同时 ,将所克隆的GIF编码区插入到载体pHybLex Zeo上 ,构建成带饵基因的质粒 ,为进一步通过酵母双杂交方法搜寻与GIF相互作用的神经因子提供了必要条件     

牦牛MT-I/-Ⅱ cDNA分子克隆及其蛋白质结构分析

利用基因特异引物YMTSP1和YMTSP2,通过RT-PCR从牦牛肝脏组织RNA中克隆出了牦牛MT-Ⅰ(Genbank Accession NoAY513744)和MT-Ⅱ(Genbank Accession NoAY513745)基因编码区全长.将牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ cDNA序列在CBI上进行同源性搜索发现,牦牛MT-Ⅰ/-Ⅱ编码区序列在不同哺乳动物中相当保守.牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ编码的MT-Ⅰ和MT-Ⅱ蛋白分别由61个氨基酸组成,其具有保守的短肽结构如C-X-C,C-C-X-C-C,C-X-X-C等,其决定MT蛋白分子的整个三维结构,在分子进化上十分保守.同时对牦牛MT的疏水性和跨膜区分析表明,牦牛MT蛋白可能不存在跨膜区,也不存在信号肽,是1种非分泌蛋白.并通过同源比较模建,预测和构建了牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ蛋白的分子空间结构,表明牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ由α-和β-两个结构域组成,在α-结构域含有5个Cys短肽结构,β-结构域有4个Cys短肽结构,且2个结构域由保守的三肽序列KKS相连.