细胞培养物中污染支原体的去除

经小鼠体内、体外加用不同的抗菌素处理及克隆的方法处理细胞污染的支原体,三株细胞经两次、一株细胞经三次处理后,经培养法、ＤＮＡ染色法及ＰＣＲ法检查支原体污染均为阴性,并证明对其抗体分泌没有任何影响,不失为一个理想的去除支原体的方法,从而使有重要应用价值的支原体污染细胞的应用成为可能。     

应用重离子束苏制核微孔滤膜除菌除支原体的研究

本文采用苏制核微孔滤膜进行了除菌、除支原体实验研究,核孔膜孔径分别为０．０７、０．１、０．５、０．７及１．５微米,采用的菌种为白色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌,支原体为解脲脲原体,实验结果表明：０．０７及０．１微米的核孔膜可完全滤除细菌及支原体,０．５微米的核孔膜可滤除绝大部分细菌,不能滤除支原体,１．５微米的核孔膜只能滤除少量细菌。     

Comparison of the conserved region in the dnaA gene from three mollicute species

Abstract Polymerase chain reaction was carried out to amplify the conserved region (789 bp in the case of Mycoplasma capricolum ) of the dnaA gene (1350 bp in the case of M. capricolum ) of 15 representatives of the class Mollicutes using degenerate oligonucleotide primers. The dnaA gene fragments were amplified from M. mycoides subsp. capri, Spiroplasma apis and S. citri . The amino acid sequences deduced from the nucleotide sequences of the amplified fragments showed very low similarities to those of the corresponding regions of four walled bacteria. The values of similarity between any two of the three mollicute species were lower than those between any two of the four walled bacteria.     

Deletion analysis of the essentiality of penicillin-binding proteins 1A, 2B and 2X of Streptococcus pneumoniae

Abstract An internal fragment from each of the penicillinebinding protein (PBP) 1A, 2B and 2X genes of Streptococcus pneumoniae , which included the region encoding the active-site serine residue, was replaced by a fragment encoding spectinomycin resistance. The resulting constructs were tested for their ability to transform S. pneumoniae strain R6 to spectinomycin resistance. Spectinomycin-resistant transformants could not be obtained using either the inactivated PBP 2X or 2B genes, suggesting that deletion of either of these genes was a lethal event, but they were readily obtained using the inactivated PBP 1A gene. Analysis using the polymerase chain reaction confirmed that the latter transformants had replaced their chromosomal copy of the PBP 1A gene with the inactivated copy of the gene. Deletion of the PBP 1A gene was therefore tolerated under laboratory conditions and appeared to have little effect on growth or susceptibility to benzylpenicillin.     

Chemotaxis away from thiocyanic and isothiocyanic esters in Pseudomonas aeruginosa

Abstract A novel mycoplasmal species designated as Mycoplasma penetrans has recently been isolated from patients infected with human immunodeficiency virus. The 16S rRNA gene from this mycoplasma was cloned and its nucleotide sequence determined. This sequence was aligned with previously published homologous sequences from several mycoplasmas and with related Gram-positive bacteria and a phylogenetic tree was constructed. The results indicate that M. penetrans belongs to the evolutionary group Pneumoniae.     

多酶恒温扩增核酸试纸条法快速检测肺炎支原体方法的建立及应用

【背景】肺炎支原体是导致儿童和青少年呼吸道感染的重要病原体,长期以来由于其临床表现不特异而容易错过最佳治疗时期。【目的】结合多酶恒温扩增(multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA)技术和核酸试纸条建立一种快速检测肺炎支原体的方法。【方法】以肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征(community acquired respiratory distress syndrome, CARDS)毒素编码基因为靶基因设计引物和探针,对反应体系的温度、时间等进行优化,评估其敏感性,通过检测肺炎支原体和其余7种病原体分析其特异性,并对35份临床样本进行验证。【结果】MIRA核酸试纸条法在37℃条件下,15 min内便可完成对肺炎支原体的检测,最低检出限为10 copies/μL;除肺炎支原体外,其余7种病原体均不能扩增,特异性较好。以实时荧光PCR检测为标准,MIRA核酸试纸条法对35份临床样本检测后的诊断特异度为100.00%、灵敏度为96.15%、阴性预测值为90.00%、阳性预测值为100.00%。【结论】本研究建立了MIRA核酸试纸条法...     

肺炎支原体肺炎患儿血清sB7-H3含量与细胞因子水平及病情严重程度的相关性研究

摘要 目的：研究肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP）患儿血清可溶性共刺激分子B7-H3（soluble co-stimulatory molecule B7-H3, sB7-H3）含量与细胞因子水平及病情严重程度的相关性。方法：收集2019年3月至2020年6月期间我院收治的MPP患儿共96例,根据患儿病情严重程度分为轻症MPP组和重症MPP组,另选取同期于我院体检中心体检的健康儿童50例作为对照组。收集所有受试者的一般资料、主要临床表现、临床指标及细胞因子水平,对各指标进行Pearson相关性分析和多元逐步回归分析。结果：与对照组相比,MPP组患儿的白细胞计数（white blood cell, WBC）、中性粒细胞计数（neutrophil, NE）、红细胞沉降率（erythrocyta sedimentation rate, ESR）、C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、sB7-H3、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF）、干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、白介素-10（interleukin-10,IL-10）和白介素-17A（interleukin-17A,IL-17A）均较高（P＜0.05）;与轻症MPP组患儿相比,重症MPP组患儿的WBC、NE、ESR、CRP、sB7-H3、GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A均较高（P＜0.05）。Pearson相关性分析结果表明,sB7-H3与WBC、NE、ESR、CRP、GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A呈正相关（P＜0.05）。多元线性回归分析显示,GM-CSF（β=0.103,P＜0.001）、IFN-γ（β=0.121,P＜0.001）、IL-10（β=0.026,P＜0.001）和IL-17A（β=0.093,P＜0.001）是sB7-H3的独立影响因素。结论：MPP患儿血清sB7-H3、GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A与MPP的病情严重程度密切相关,且sB7-H3的表达水平与GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A的水平呈正相关。     

血清SAA、YKL-40及SP-A的联合检测对小儿难治性肺炎支原体肺炎的预测价值分析

摘要 目的：探究血清淀粉样蛋白A（SAA）、几丁质酶样蛋白YKL-40和肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）表达水平对的联合检测对小儿难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）的预测价值。方法：纳入2019年11月至2021年12月期间我院收治的60例MPP患儿作为研究对象,依据病情最终转归将其分为RMPP组和普通肺炎支原体肺炎（GMPP）组,另纳入同期于我院行体格检查的60例健康儿童作为对照组。收集所有受试儿童的临床资料、实验室指标及影像学结果,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清SAA、YKL-40和SP-A的表达水平,应用受试者工作特征曲线（ROC）判定各指标单项检测和联合检测的预测效能。结果：MPP组患儿和对照组儿童一般资料相比无统计学差异（P＞0.05）。依据病情最终转归,60例MPP患儿中共有23例（38.33 %）进展为RMPP,RMPP组与GMPP组患儿在白介素-6（IL-6）、C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、D-二聚体（D-D）等实验室指标以及肺不张、胸腔积液等影像学特征方面相比有统计学差异（P＜0.05）。RMPP组和GMPP组血清SAA、YKL-40和SP-A的表达水平显著高于对照组（P＜0.05）,同时RMPP组血清SAA、YKL-40和SP-A的表达水平显著高于GMPP组（P＜0.05）。血清SAA的最佳截断值为39.75 mg/L,预测RMPP发生的ROC曲线下面积为0.894（95%CI：0.861-0.925）,敏感度为78.26 %,特异度为86.67 %;血清YKL-40的最佳截断值为31.85 ng/mL,预测RMPP发生的ROC曲线下面积为0.754（95%CI：0.634-0.873）,敏感度为73.91 %,特异度为67.21 %;血清SP-A的最佳截断值为35.59 ng/mL,预测RMPP发生的ROC曲线下面积为0.761（95%CI：0.640-0.891）,敏感度为73.91 %,特异度为75.00 %;SAA+YKL-40-1+SP-A三者联合检测预测RMPP的AUC为0.914（95%CI：0.871-0.957）,敏感度为91.30 %,特异度为91.66 %。结论：血清SAA、YKL-40和SP-A表达水平的检测可作为预测RMPP发生的重要生物学指标,且三者联合检测的预测效能较高,可为临床尽早诊断RMPP、尽早干预、改善患儿预后提供一定的帮助。     

用Ciprofloxacin去除传代细胞株中的支原体污染的研究

在应用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产品中,支原体污染仍是一个非常棘手的问题。对Ｖｅｒｏ和ＳＰ２／０－Ａｇ１４等细胞,应用Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ,１０μｇ／ｍｌ处理１４天,支原体检测全部转阴,经４个月的培养、传代、冻存、复苏,每次支原体检测均保持阴性。对去除了支原体的Ｖｅｒｏ和ＩＳＣ－１１６细胞株,测试了其生长特征和功能,均未见受影响。