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991.
乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究 总被引:4,自引:3,他引:1
构建了pCHBSSIG质料,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎(乙肝)表面抗原S+前S1融合基因在前,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后,此质粒转化到CHO-dhfr^-细胞中,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增,建立了7个高效表达乙肝表达抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1-18细胞系的生物学特性,结果表明:未发现微生物污染,无致瘤性、遗传稳定,电镜下可观察到2 相似文献
992.
Nadia Ramírez Damaris Lorenzo Daniel Palenzuela Lissett Herrera Marta Ayala Alejandro Fuentes Marlene Pérez Jorge Gavilondo Pedro Oramas 《Biotechnology letters》2000,22(15):1233-1236
An anti-hepatitis B surface antigen (HBsAg), single-chain Fv antibody fragment (scFv) with a 6-histidine N-terminal tag was produced in cultured transgenic tobacco cells. Western blot and antigen-specific chromatography showed high levels of biologically active scFv in the culture supernatant (1 mg l–1) and in cells (5 mg kg–1). A simple one-step scFv purification was developed using immobilized metal ion affinity chromatography. 相似文献
993.
994.
基因拷贝数与染色体位置对酵母表达乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
应用FLP重组酶介导的染色体定点整合技术,将带有不同拷贝数的乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因表达单元的质粒整合在酵母不同的染色体位点,并测定了SA-28基因的表达情况,初步研究了基因拷贝数与染色体位置对酵母表达外源基因的影响。结果表明SA-28基因在HIS3位点整 合时的表达水平随基因拷贝数的增加而提高,遵循基因剂量效应;在某些染色体位点整2合时,插入方向对其表达有不同程度的影响,呈现出明显的染 相似文献
995.
RNA-蛋白质印迹筛选HBsAg转录后调节因子表达克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
RNA结合蛋白是基因表达的重要调节因子.RNA-蛋白质印迹(Northwestern blot)是近年来国外建立的筛选这类因子的重要方法之一.应用这一方法从肝细胞株HepG2 cDNA文库中成功筛选到乙型肝炎病毒表面抗原转录后调节片段互相作用蛋白表达克隆.结果显示:该蛋白与探针结合特异性强,经三轮筛选后,100%克隆为阳性克隆;PCR和EcoRⅠ酶切初步鉴定, 编码该蛋白的cDNA长约1 kb. 相似文献
996.
以克隆乙型肝炎病毒pC/C及C基因为例,报道了在DNA重组中,当目的基因与载体末端不匹配时可采取的一新方法.用内切酶切取的基因片段为平端时,可在含dATP的反应体系中,用Taq酶的末端转移酶活性在其3′末端加上单个碱基(dA)的突出尾;基因片段为3′凹端时,可在含4种dNTP的体系中,利用Taq酶的聚合酶活性先将其末端补平,再经末端转移酶活性在其3′末端加dA尾;末端经此修饰的基因片段可亚克隆至T载体中,再克隆于其他表达载体中. 相似文献
997.
毕赤酵母表达的重组乙肝表面抗原SS1的纯化及性质鉴定 总被引:3,自引:1,他引:2
对毕赤酵母(Pichia pastoris)表达的重组乙肝表面抗原SS1的纯化以及蛋白质的理化性质及免疫原性进行了进一步的研究。采用单抗亲和层析的方法,一步纯化即可得到纯度为95%的纯化蛋白质。ELISA和Western印迹鉴定表明,纯化的SS1融合蛋白同时具有良好的S和PrcS1抗原性。CsC1密度梯度离心和电镜检测的结果则表明,这一重组抗原可以形成与HBV亚病毒颗粒类似的颗粒结构。在BALB/ 相似文献
998.
乙型肝炎病毒3′末端缺失的preS/S基因在转基因小鼠中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从乙型肝炎病毒adr亚型的基因组DNA中分离3′末端缺失的preS/S基因的DNA片段,构建了由CMV启动子控制的真核表达载体。采用受精卵显微注射方法,获得了基因组整合有3′末端缺失的preS/S基因的2个转基因小鼠品系。在不同的时间点采取血清进行了ELISA分析,发现在这2个小鼠品系中3′末端缺失的preS/S基因可被表达,而且呈稳定状态。此小鼠品系的建立,对于探讨乙型肝炎病毒3′末端缺失的preS/S基因的表达产物在体内的生物学作用及其与肝细胞内细胞癌基因的转录激活之间的关系有重要意义。 相似文献
999.
建立了一种单细胞海水绿藻--杜氏盐藻(Dunaliella salina Teod.)的外源基因稳定表达系统.通过电激法将携带乙肝病毒表面抗原基因(HBsAg)和氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)的质粒转入盐藻细胞内,CAT基因为筛选基因.PCR和Southern杂交结果显示,HBsAg基因已经整合到盐藻基因组中.Northern杂交结果表明,转化成功细胞内的该基因已转录成mRNA.HBsAgELISA和Western杂交检测证明,HBsAg蛋白在转化的盐藻细胞内稳定地表达.同时,PCR和Southern杂交显示,CAT基因也已整合到盐藻基因组中.且CATELISA检测证明,CAT蛋白在转化体中也已稳定地表达.进一步对转化盐藻进行无氯霉素筛选培养,60代后,HBsAg基因依然稳定地存在并表达.本实验第一次报道了外源基因在杜氏盐藻细胞内的稳定表达. 相似文献
1000.
三种兽药添加剂对土壤赤子爱胜蚓的毒理学研究 总被引:6,自引:0,他引:6
喹乙醇、阿散酸和土霉素是应用极广的兽药添加剂,在畜牧业的发展中起着特殊的作用,但其使用不当或过量使用会给环境带来很大危害.采用土壤中的重要生物赤子爱胜蚓作为生物材料,分别研究了喹乙醇、阿散酸和土霉素对赤子爱胜蚓的急性毒性和对赤子爱胜蚓体腔细胞DNA的损伤.结果表明,喹乙醇溶液法LC50>2000mg·L-1,滤纸法LC50>5.71×10-2mg·cm-2,而阿散酸和土霉素在所设最大受试剂量内没有毒性.单细胞凝胶电泳试验结果表明,阿散酸没有引起蚯蚓体腔细胞DNA明显损伤;喹乙醇和土霉素均能引起一定程度的DNA损伤,中、高剂量组与阴性对照相比有极显著差异(P<0.01).因此,有必要加强对以上兽药添加剂,特别是喹乙醇和土霉素的管理,控制用药时间和剂量,以确保人体健康和环境安全. 相似文献