花生主要变应原Ara h2的克隆及原核表达

目的:在原核载体中克隆、表达花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定基础。方法:合成花生主要变应原Ara h2基因,设计特异性引物行PCR扩增,经Eco RⅠ、HindⅢ双酶切后与做相应酶切的pET-28a载体连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序分析,使用IPTG诱导融合蛋白表达,使用Ara h2特异性多克隆抗体对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果:成功扩增了Ara h2基因,重组质粒双酶切见目的条带,基因测序显示Ara h2在正确开放阅读框中,基因长423bp,编码140个氨基酸,预测的等电点为5.3,分子量约16660.17 Da,基因比对分析显示其与相关报道的核苷酸序列一致性达100%。重组pET-28a-Ara h2/BL21经0.6 mmol/L IPTG诱导表达可见重组融合蛋白在相应分子量大量表达,使用Ara h2多克隆抗体免疫印迹法能检测到目的蛋白。结论:成功克隆、表达了花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定了基础。     

miR-24对心脏成纤维细胞生长和迁移的影响及机制研究

目的:探讨miR-24对心脏成纤维细胞的生长和迁移的影响及机制。方法:采用RT-PCR检测心肌细胞和心脏成纤维细胞中mi R-24的表达水平。在心脏成纤维细胞中转染mi R-24 mimics、mimics control、mi R-24 inhibitors、inhibitors control后,通过Western blot检测细胞中Col-1、α-SMA的表达,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞迁移能力。通过靶基因预测库预测mi R-24的靶基因,荧光素酶鉴定靶基因的正确性,并通过RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中Furin的表达。结果:心脏成纤维细胞HEH2中mi R-24的表达水平与心肌细胞H9C2相比差异显著(P0.01),心脏成纤维细胞中mi R-24表达上调。mi R-24 mimics组中Col-1、α-SMA的表达水平明显低于mimics control组(P0.01)。mi R-24 mimics组中细胞OD值较mimics control组显著降低(P0.01),mi R-24 inhibitors组中细胞OD值较inhibitors control组显著升高(P0.01)。mi R-24 mimics组、mimics control组、mi R-24 inhibitors组、inhibitors control组细胞凋亡无显著性差异(P0.05)。mi R-24 mimics组细胞迁移数目明显低于mimics control组,差异显著(P0.01),mi R-24 inhibitors组细胞迁移数目高于inhibitors control组,差异显著(P0.05)。mi R-24 mimics组细胞中Furin蛋白和m RNA水平明显降低,野生型Furin和mi R-24 mimics共转染的细胞中荧光素酶活性最低。结论:mi R-24在心脏成纤维细胞中高表达,通过靶基因Furin抑制心脏成纤维细胞合成Col-1、α-SMA,抑制心脏成纤维细胞增殖和迁移。     

泽泻中二个三萜新成分的研究Ⅱ

继前文鉴定的七个泽泻醇类成分后 ,又从泽泻中分离、鉴定出六个三萜成分 ,其中 11 乙酰 2 5 脱水泽泻醇A(2 5 anhydroalisolA 11 acetate,Ⅳ )、2 4 乙酰 2 5 脱水泽泻醇A (2 5 anhydroalisolA 2 4 ac etate ,Ⅴ )为新化合物 ,新泽泻醇 (neoalisol,Ⅵ )为新天然产物 ,其它已知成分是泽泻醇A(alisolA ,Ⅰ )、2 4 乙酰泽泻醇A(alisolA 2 4 acetate ,Ⅱ )、2 5 脱水泽泻醇A(2 5 anhydroalisolA ,Ⅲ )。     

红豆杉一内生真菌化学成分的研究(英文)

从药用植物红豆杉 (Taxuschinensis (Pilg.)Rehd .)的内生真菌———粘帚霉属真菌 (Gliocladiumsp .,简称F菌 )菌丝体中分离到 3个化合物 ,根据光谱方法确定了它们的结构。其中 ,(2 0S ,2 2S)_4a_同_2 2_羟基_4_氧杂麦角甾_7,2 4 (2 8)_二烯_3_酮为新化合物 ,化合物 4 ,8,12 ,16_四甲基_1,5 ,9,13_四氧杂环十六烷_2 ,6 ,10 ,14_四酮为首次从该属真菌中分离到 ,6 ,9_环氧麦角甾_7,2 2_二烯_3_羟基为首次从F菌中分离到。     

HIV-1型核衣壳蛋白P24截短体在大肠杆菌中的表达,纯化和鉴定

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从ＨＩＶ １ｇａｇ基因中扩增出衣壳蛋白Ｐ２４截短体（ｔＰ２４）基因,插入质粒ｐＧＥＸ ４Ｔ３中构成重组表达质粒ｐＧＥＸ ｔｐ２４,将ｐＧＥＸ ｔｐ２４转化大肠杆菌ＢＬ２１后获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白量的３４３８％。经Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化的截短体Ｐ２４纯度为９２７７％。纯化的截短体Ｐ２４在间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹检测ＨＩＶ抗体阳性血清和正常人血清中,具有很高的抗原特异性和免疫反应性。     

24-表油菜素内酯对盐藻细胞分裂的促进作用及与Ca2+和钙调素的关系

外加２４表油菜素内酯（２４ｅｐｉＢＬ） 无论在光下或暗中均可促进盐藻细胞分裂数的增加,激动素只在光下具有这种作用。外界Ｃａ２＋ 浓度升高时,２４ｅｐｉＢＬ 促进细胞分裂的效果更为明显,而ＥＧＴＡ 可以抑制２４ｅｐｉＢＬ引起的促进作用。Ｖｅｒａｐａｍｉｌ、Ｗ７ 、环己酰亚胺均可抑制盐藻细胞分裂。Ｃａ２ ＋ 载体Ａ２３１８７ 在低浓度（０ ．２５ μｍｏｌ／Ｌ） 时具有促进分裂的作用。可以认为２４ｅｐｉＢＬ对低等单细胞藻类具有生理作用,并且,其促进盐藻细胞分裂的机制与激动素是不同的,它不仅与Ｃａ２ ＋ 有关,而且与钙调素也有较密切的关系。     

肠道菌群对2型糖尿病肾病患者肾功能损害及白蛋白尿短期进展的影响

目的 研究2型糖尿病肾病（DN）患者肠道菌群与肾功能损害及白蛋白尿短期进展的关系。方法 选择2018年2月至2021年2月收治的2型DN患者作为DN组并分为微量白蛋白尿患者（30～300 mg/24 h）和大量白蛋白尿患者（>300 mg/24 h）,另取同期收治的尿白蛋白水平正常（<30 mg/24 h）的2型糖尿病患者作为DM组,健康体检者作为对照组,检测各组对象肠道菌群多样性指标Ace指数、 Simpson指数、Chao1指数、Shannon指数及肠道菌群门水平的组成,根据2型DN组患者前后2次入院时尿白蛋白水平的变划分为白蛋白尿短期进展和未进展,分析2型DN患者肠道菌群特征与病情及白蛋白尿短期进展的关系。结果 DN组患者的肠道菌群Ace指数、Simpson指数及厚壁菌门占比均低于DM组和对照组,拟杆菌门占比高于DM组和对照组（均P<0.05）,Chao1指数、Shannon指数以及放线菌门、变形菌门占比与DM组、对照组比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;DN组中大量白蛋白尿患者的Ace指数、Simpson指数及厚壁菌门占比低于微量白蛋白尿患者,拟杆...     

急性出血性结膜炎爆发中柯萨基病毒A_(24)变种的分离与鉴定

1988年7—11月湖北沙市出现了一次急性出血性结膜炎(红眼病)的爆发流行,市区发病率为7％,累计患者不少于1.7万人。用Hela细胞从38例典型红眼病患者眼拭中分离出病毒28株(74％),理化试验与电镜观察提示为肠道病毒,根据其生物学特性与特异性中和实验证明为柯萨基A组24型变种(CA24V)。检测的两个毒株中一株对乳鼠有致病性,而另一株无致病性。流行后红眼病48名患者恢复期血清CA24V特异性中和抗体阳性率(以≥1:4为阳性计)为81.2％,非红眼病对照血清阳性率为14.6％,差异极显著(P<0.01),结合流行病学与临床特征,认定是CA24V引起的AHC爆发流行。     

五指莲重楼的甾体皂甙(2)

从五指莲重楼根中(Paris axialis)分离鉴定了七个甾体皂甙,其中有一新甙Ⅶ,经MS、~1H NMR、~(13)C NMR和化学降解方法证明其化学结构为:24α-羟基偏诺皂甙元-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基1→2[α-L-阿拉伯呋喃糖基1→4]-β-D-葡萄吡喃糖甙。     

西里伯斯青鳉tyr和slc24a5的克隆及表达分析

为了探究黑色素合成相关基因酪氨酸酶(Tyrosinase,tyr)和溶质载体24家族成员5(Solute carrier family 24,member 5,slc24a5)在西里伯斯青鳉(Oryzias celebensis)中的表达特征,研究采用RACEs(Rapid Amplication of cDNA En...