生物催化过程中色氨酸与色氨酰胺的测定

采用高效液相色谱法来定量测定生物催化过程中的色氨酸及色氨酰胺。使用戴安C18柱,乙腈与10mmol.L-1的KH2PO4为流动相,梯度洗脱分析。在此条件下进行色谱分离,两样品的分离度达到9.36。并且成功的以美国Astec公司生产的CHIROBIOTIC手性色谱柱为固定相,乙腈与0.5%的冰醋酸为流动相,对产物色氨酸的对映体选择性进行了检测分析。     

HPLC测定莪术油葡萄糖注射液中四种成分的含量

采用HPLC法测定了莪术油葡萄糖注射液中四种成分(莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮、呋喃二烯)含量。本法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇-水(85∶15 V/V),流速为0.8mL/min,柱温:30℃,检测波长为215nm。在该色谱条件下,分别建立莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮、呋喃二烯的线性回归方程。结果表明,该法的精密度、重复性、稳定性良好(RSD<2.0%),平均回收率均大于96%(RSD<3.0%,n=5),通过测定得到莪术油葡萄糖注射液中四种主分的含量分别为67,26,20,45μg/mL。HPLC法准确、可靠、重复性良好,可用于莪术油葡萄糖注射液的质量控制。     

溶剂环境对乙肝表面抗原(HBsAg)结构的影响

HBsAg作为乙肝疫苗的主要成分,是一种病毒样颗粒,由蛋白质和脂类通过非共价键作用形成。HBsAg保持完整结构对其功能非常重要,而目前未见对其在溶液中结构变化的研究。考察了不同溶剂环境(温度、pH值、离子类型和盐浓度)对HBsAg结构的影响。实验发现,HBsAg在常温下比较稳定,但在温度超过60℃时稳定性明显下降;pH值小于4.0时引起不可逆聚集,但在pH5.0时的聚集部分可逆;不同离子对HBsAg的影响基本符合Hofmeister序列,不同之处是SO42-比F-更易引起HBsAg颗粒的聚集,在所考察的盐中,(NH4)2SO4对HBsAg有着较大的影响,0.4mol/L时就会引起HBsAg聚集,随着浓度增加,聚集现象更加严重,所以在HBsAg的疏水层析中要谨慎使用(NH4)2SO4。     

高效液相色谱法测定川射干鸢尾苷元磺酸钠及其制剂泰克吉宁注射液含量和有关物质

建立高效液相色谱法测定鸢尾苷元磺酸钠(4′,5,7-三羟基-6-甲氧基异黄酮-5′-磺酸钠)及其制剂泰克吉宁注射液的含量及有关物质。采用C18色谱柱(150×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-5%醋酸水(80:20),流速为1.0mL/min,检测波长为263nm。鸢尾苷元磺酸钠在11～100μg/mL范围内线性关系良好,回归方程Y=43.3609X-1.5973(r=0.99998),平均回收率为99.77%(n=9)。最低检测限为0.052μg/mL,与有关物质分离良好。本法快速、简便、准确,专属性强。     

产河豚毒素菌株的分离鉴定

从厦门同安海域的黄鳍东方豚(Fugu xanthopterus)卵巢组织中分离纯化出59株菌株,通过小鼠试验筛选出11株产毒菌株,并对其中产毒能力较强的EL10菌株的发酵产物进行高效液相色谱分析,初步认定发酵产物中含有河豚毒素。同时对EL10菌株进行16S rDNA鉴定,结果表明该菌属于希瓦氏菌属(Shewanella)。     

反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNA G+C mol%含量

目的:使用反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNA G+C mol%含量.方法:以Escherichia coli DH5α为标准菌株,采用90%重蒸水10%甲醇为流动相,检测波长260nm,流速1ml·min-1,在Venusil MP C18柱上对四种碱基进行分离.结果:DNA碱基分离效果好,以外标法计算得到标准菌株DH5α的DNA G+C mol%含量为50.3%,待测菌株ST307的DNA G+C mol%含量为60.5%.结论:采用反向高效液相色谱法测定色盐杆菌的DNA G+C mol%含量准确可靠.     

反相高效液相色谱法测定肠球菌FQ15发酵液中的有机酸

目的研究肠球菌FQ15发酵液中的有机酸在不同发酵时间的变化趋势。方法建立反相高效液相色谱法测定此株益生菌发酵液中有机酸的主要成分及其在发酵不同时间的变化趋势。结果丙酸、丙酮酸、乳酸、乙酸的浓度都是在菌体生长处于衰亡期时达到最大值,乳酸随发酵时间的延长浓度明显下降,而乙酸在发酵后期含量呈上升趋势。结论此方法重现性好,精密度高,为研究微生物合成中有机酸种类及变化趋势提供了一种可供参考的快捷分析手段。     

高效液相色谱法检测三羟乙基异氰尿酸酯的纯度

建立了高效液相色谱法定量分析三羟乙基异氰尿酸酯的纯度分析方法。用agilent1100型高效液相色谱仪,CAP-CELL PAK C8(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相为乙腈-水,检测波长为210 nm,流速为1.0 ml.min-1,柱温25℃,对三羟乙基异氰尿酸酯纯度进行定量测定。该法重复性好,相对标准偏差为0.15%,标准回收率在99.8%~100.2%,定量结果准确度高。     

葛花不同工艺提取物的异黄酮成分含量比较研究

目的:以不同浓度乙醇和大孔吸附树脂法提取和纯化葛花的提取物,并用HPLC和UV进行异黄酮成分含量比较分析。方法:以不同浓度的乙醇回流提取葛花药材制备提取物,并采用大孔吸附树脂对其进行纯化;然后以HPLC法对提取物中的3种主要黄酮类成分进行定量分析,并以UV法测定其总黄酮含量。结果:葛花不同提取物的黄酮类成分含量差别较大;所建立的HPLC方法可以同时测定葛花提取物中鸢尾苷、6"-O-木糖鸢尾苷和染料木素的含量;UV法与HPLC法联合应用,可对不同葛花提取物中的异黄酮类成分进行评价。结论:不同工艺提取的葛花提取物中异黄酮类成分有较大区别,大孔吸附树脂纯化后可显著提高总黄酮的纯度;HPLC联合UV法可共同用于葛花的质量评价及提取工艺的研究。     

巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望

巴斯德毕赤酵母经过近二十来年的发展,已经成为表达外源基因的优秀表达系统之一,成功地表达了许多重组异源蛋白。从表达菌株,表达载体等方面详细综述了毕赤酵母表达系统的优点,如：营养要求低、可高密度发酵、遗传稳定性高等;分析了可能影响巴斯德毕赤酵母表达系统的相关因素,这些因素包括外源基因的特性、基因拷贝数、产物稳定性及发酵策略等,结合这些因素和具体实践经验,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量进行了阐述;讨论了该表达系统存在的不足之处并且展望了其发展前景。