攸县麻鸭DMA细管精液冷冻技术研究

为利用冷冻精液保存地方鸭品种资源,以笼养攸县麻鸭公鸭(日龄170 d)为试验对象,检测其精子密度与活力,对精液稀释液渗透压进行筛选;将活力在0.5以上的精液以6%二甲基乙酰胺(dimethylacetamide,DMA)作为冷冻保护剂,用便携式简易专利技术装置,将细管精液置于液氮面上约2 cm高度熏蒸冷冻7 min后浸入液氮10 min以上,随后40℃水浴解冻10 s,检测解冻精子活力;将精子活力在0.3以上的细管精液在液氮中保存,待收集到足够细管精液后对相近周龄临武鸭母鸭进行输精。结果显示:1)在不同渗透压稀释液中,精子体外存活时间以LR液303 m Osm/kg组最佳,其活力与273 m Osm/kg组差异不显著(P>0.05),与215 m Osm/kg组差异显著(P<0.05); 2)采集的原精平均活力中,诱情方式的为0.71,按摩方式的为0.61; 3)诱情方式冻精液的平均活力为0.33,活力在0.3以上的冻精输精组的受精率为85.93%,鲜精组为88.17%,且冻精最高批次平均受精率达93.8%。本文精液冷冻方法为我国鸭乃至禽类延长公禽在后裔测定中的种用期限,利用精液冷冻保存种质资源,弥补活体保种的不足等领域的研究与应用提供了技术支撑。     

电子支气管镜下氩气刀联合冷冻疗法治疗晚期肺癌的临床疗效及对患者癌性疼痛和免疫功能的影响

目的:评价电子支气管镜下氩气刀联合冷冻疗法治疗晚期肺癌的疗效及对患者癌性疼痛和免疫功能的影响。方法:选择我院2016年7月～2018年7月收治的94例晚期肺癌患者,按随机数字表法分为对照组(51例)和4研究组(43例)。对照组采用常规化疗,研究组在对照组基础上联合电子支气管镜下氩气刀和冷冻疗法。治疗后,比较两组的临床疗效,治疗前后疼痛程度、疼痛介质、免疫功能、生活质量的变化和不良反应的发生情况。结果:治疗后,研究组疾病控制率显著高于对照组(P0.05),两组疼痛Ⅰ级率、CD4~+、CD4~+/CD8~+及生活质量评分均较治疗前显著上升(P0.05),而疼痛介质及CD8~+均较治疗前明显下降(P0.05),研究组疼痛Ⅰ级率、CD4~+、CD4+/CD8~+及生活质量评分明显高于对照组,而疼痛介质及CD8~+均显著低于对照组(P0.05)。两组总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:电子支气管镜下氩气刀联合冷冻疗法用于治疗晚期肺癌的疗效明显优于常规化疗,其可显著减轻癌性疼痛,改善患者免疫功能斌提高患者的生活质量。     

猪胚胎玻璃化冷冻保存技术的优化

在以往工作的基础上本研究对现有猪胚胎玻璃化冷冻保存技术进行了优化。以巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5~6日龄的胚胎(囊胚/桑椹胚),比较冷冻方法、胚胎承载工具胚胎、透明带处理和冷冻胚胎移植受体对猪胚胎冷冻效果的影响。结果表明,冷冻方法I[胚胎首先在冷冻液1(TCM199+20%FBS+10%EG+10%DMSO)中平衡3min,然后立即转入冷冻液2(TCM199+20%FBS+20%EG+20%DMSO+0.4mol/LSUC)中并在1min内装管(每管含2~6枚胚胎),直接投入液氮保存]与冷冻方法II[透明带完整的胚胎在NCSU23(含7.5μg/mLCB)培养液中平衡25min,13000×g离心12~13min,然后在含2mol/LEG的NCSU23中平衡5min,再在含8mol/LEG+7%PVP的NCSU23中快速漂洗,装进OPS/GMP管,放入液氮保存]冷冻效果没有显著差异;GMP法能显著提高冷冻胚胎存活率(83.8%vs77.6%,P<0.05)和囊胚细胞数(47.5vs53.1,P<0.05);以0.5%链蛋白酶(Pronase)处理透明带10s,虽然对猪胚胎存活率没有显著影响,但能...     

两种冷冻保护剂和冷冻程序对兔精子冷冻效果的比较

目的比较不同冷冻保护剂和冷冻程序对兔精子冷冻保护的影响,以期提高兔精子冷冻保存的效果和效率。方法用三步降温法（程序Ⅰ）和两步降温法（程序Ⅱ）两种冷冻程序与终浓度分别为2%,3%,4%,5%的甘油和乙酰胺两种冷冻保护剂配合进行精液冷冻保存,统计精子复苏率。结果使用程序Ⅱ添加3%乙酰胺的冷冻保护剂实验组的精子复苏率较高,同其它组比较差异有显著性意义（P〈0.05）;程序Ⅱ比程序Ⅰ节省约70%的时间,同种浓度冷冻保护剂的不同冷冻程序组之间精子复苏率差异无显著性意义（P〉0.05）。结论程序Ⅱ与3%乙酰胺配合可以取得良好的冷冻保存效果;用程序Ⅱ进行兔精液冷冻保存可以大幅缩短操作时间。     

猪卵母细胞玻璃化冷冻后细胞骨架的变化

为研究玻璃化冷冻后猪卵母细胞纺锤体、染色体和微丝的变化,从屠宰猪卵巢表面直径2—5mm卵泡中采集未成熟(GV)期卵母细胞,由GV期卵母细胞经成熟培养获得体外成熟(MⅡ)期卵母细胞。GV期和MⅡ期卵母细胞各分为3组对照组、冷冻保护剂处理组和玻璃化冷冻组。MⅡ期卵母细胞经分组处理后直接用于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察样本;而GV期卵母细胞处理后先经44h成熟培养,再用作LSCM观察样本。供试卵母细胞经固定、免疫荧光染色后,于LSCM下观察。结果表明,冷冻保护剂处理组GV期卵母细胞经成熟培养后,其纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为42.9%、89.6%和28.6%;玻璃化冷冻组此3项指标的正常率分别为10.1%、36.4%和16.9%,两组间差异显著(P<0.05);除冷冻保护剂处理组染色体正常率与对照组无较大差异外,两试验组的其他指标均明显低于对照组(分别为79.5%、93.1%和72.3%,P<0.05)。MⅡ期卵母细胞冷冻保护剂处理组的纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为34.4%、61.3%和47.9%,而冷冻组分别为12.9%、56.7%和37.2%,两组均显著低于对照组(分别为78.3%、90.1%和72.8%,P<0.05)。结果表明,猪GV期和MⅡ期卵母细胞经冷冻保护剂处理或玻璃化冷冻保存后,均造成了纺锤体、染色体和微丝不可逆的损伤,这可能是影响卵母细胞成熟、受精与发育的重要原因。     

激光辐射奶牛冷冻精液对精子诱变效应的研究

为了探索激光辐射精子的诱变效应,本试验采用ＴＳＴ（Ｔｒｉｐｌｅ Ｓｔａｉｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ,即精子三重染色法）、ＳＰＡ（Ｓｐｅｒｍ Ｐｅｎｅｔｒａｉｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ,即精子穿透分析法和ＣＡＳ（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ Ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ,即精子单倍染色体制备技术）,三项有关精子的现代分析技术,对激光辐射精子的受精学、遗传学效应进行了研究。结果表明：Ｈｅ－Ｎｅ激     

植物组织和细胞的玻璃化冻存研究

利用液氮超低温(-196℃)冻存是进行植物组织和细胞长期、稳定保存的有效方法。它不仅在常规育种中可以克服各种珍稀、濒危植物资源自然繁衍的困难,而且能在现代生物技术研究中保存各种培养细胞和优良中间实验材料,从而为实验细胞库的建立创造条件。     

液氮保存疫霉属菌种存活期检测

对Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ和Ｐｅｒｏｎｏｐｈｙｔｈｏｒａ所属１２个种２９株菌在液氮中保存５年零８个月至６年零３个月后检测证明有６８．９％的菌种存活下来。但有些未能存活,这些种有Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｏｌｏｃａｓｉａｅ（ＸＨ３０）,Ｐ．ｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ（ＡＴＣＣ１５４２８）,Ｐ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｅｐｔｉｃａ（ＡＴＣＣ３６３０２）与Ｐｅｒｏｎｏｐｈｙｔｈｏｒａ ｌｉｔｃｈｉｉ（ＡＴＣＣ３５９     

微生物冷冻干燥的抗性机理

微生物冷冻干燥的抗性机理陈声明,吕琴（浙江农业大学环保系,杭州３１００２９）微生物冷冻干燥法是长期保藏菌种的较好方法之一。因其便于批量生产、长期保藏成活力高,保藏和运输设备简单而成为一种普遍使用的保藏方法,已广泛应用于保存大部分细菌、真菌和一些病毒。...     

不同固定方法对植物细胞扫描电镜观察用冷冻断裂样品的影响

用冷冻断裂法在扫描电镜下研究了洋葱(Allium cepa)根端分生组织细胞内部的三维结构。采用了两种固定方法。冷冻断裂前只用1％锇酸固定的材料容易在细胞质和核之间断开,而用卡诺固定液(无水乙醇:冰醋酸3:1)前固定,然后再用1％锇酸固定的材料容易使细胞核断裂。前一固定方法适于研究细胞质的内部结构(细胞骨架的纤维、线粒体、内质网等及其三维分布关系):后一固定方法适于研究核内结构(染色质、核仁、核基质纤维)的三维形象,特别是核仁纤维中心染色质的三维结构。