平板菌落计数的改进方法

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样结合总量即可换算出样品中的含菌数。传统的平板菌落计数正是基于上述原理而进行的。     

绿色木霉LTR-2 β-1, 3-葡聚糖酶基因的克隆及其在 毕赤酵母中的表达

根据从GenBank中检索到的木霉菌β-1,3-葡聚糖酶基因序列设计引物,以高产β-1,3-葡聚糖酶菌株--绿色木霉LTR-2的cDNA为模板,采用PCR方法扩增得到内切β-1,3-葡聚糖酶基因(glu).将glu克隆至载体pMD18-T上,进行了全序列测定.序列分析表明该基因由2289个核苷酸残基组成,含有一个开放阅读框架,可以编码762个氨基酸,与报道基本相同.翻译后的氨基酸序列含有两个β-1,3-葡聚糖酶的保守区RVVYIPPGTY和AASQNKVAYF.基因与已发表的木霉β-1,3-葡聚糖酶基因有较高的同源性,其中和哈茨木霉bgn3.1和绿木霉bgn13.1的同源性达到93%.序列已经提交GenBank,登录号为EF176582.将glu基因插入到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)穿梭载体pPIC9K中,获得重组质粒pGLU14,经线性化后转化毕赤酵母菌株KM71.经大量平板筛选,获得能有效分泌表达β-1,3-葡聚糖酶的毕赤酵母工程菌株KGLU14,菌落PCR扩增证实了glu基因已经整合到酵母基因组中.SDS电泳结果表明其β-1,3-葡聚糖酶的分子量大约为80kDa,和理论推测值大致相同.摇瓶发酵结果表明,培养基中β-1,3-葡聚糖酶的活力可达889U/mL.     

多重PCR鉴定不同毒素型的产气荚膜梭菌菌落

参照文献报道的产气荚膜梭菌a, b, e, t 毒素基因cpa、cpb、etx 及iA序列合成了针对4种毒素基因的4对特异引物, 建立了一种简单的产气荚膜梭菌定型的菌落多重PCR方法。结果本所保存的A, B, C, D, E各型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期条带, 而诺维氏梭菌、腐败梭菌和破伤风梭菌的扩增均为阴性; 将单个菌落稀释100倍利用此菌落多重PCR仍能扩增到相应的目的片段。并利用此多重PCR对13株不同动物来源的产气荚膜梭菌进行了定型鉴定, 并与毒素中和试验鉴定结果进行了比较, 结果表明两种方法具有较高的符合率。本方法的建立对于产气荚膜梭菌的快速检测、定型具有十分重要的意义。     

现生微生物群落形态研究及其对解释埃迪卡拉生物群化石属性的启示

通过对常见微生物种类进行纯培养获得多种微生物菌落形态,并将其与埃迪卡拉生物群化石形态进行对比研究,发现：1）盘状化石Aspidella与圆盘形菌落的轮廓和放射状分布的小脊具有相似性;2）“rangeomorphs”分支状化石与具有次级分支结构的菌落具有某些相似性;3）五边形似棘皮动物化石Arkaruaadami与五边形菌落较为相似;4）两侧对称类化石Kimberella与圆盘形边缘具放射状脊的菌落的表面形态非常相似;5）盘状化石Az—bumaresbrunsae与圆盘形表面具辐射状脊的菌落的轮廓和表面纹饰分布极为相似。以上对比结果表明部分埃迪卡拉生物群化石与微生物菌落形态具有一定的相似性。本研究为埃迪卡拉生物群化石生物属性的解译提供了新思路。     

昆明地区35种森林木本植物的燃烧性排序与分类

采用自行设计的燃烧试验装置对昆明地区35种森林木本植物的活枝叶进行燃烧试验,在测定和分析样品引燃时间、有焰燃烧阶段烟气温度变化和质量损失过程等基础上,提出了燃烧性参数,即单位质量可燃物在有焰燃烧阶段产生的烟气温升峰面积与引燃时间之比.根据该参数和引燃时间长短对35种植物的燃烧性进行排序和分类,采用2种方式对燃烧性排序的可靠性进行验证.结果表明,小白花杜鹃(Rhododendron siderophyllum)等14种植物为难燃类;水红木(Viburnum cylindricum)等5种植物为可燃类;圆柏(Sabina chinensis)等16种植物为易燃类.可燃类与易燃类间平均引燃时间相差36.2s,可燃类与难燃类间平均引燃时间相差276.7s,可燃类与易燃类占样品总数的60%,而难燃类占40%,难燃物种比例较小是昆明地区森林火灾多发的原因之一.     

物种总数的一类Bayes区间估计的改进

通常所使用的由传统方法得到的物种总数的一类Bayes置信区间不是最短的,就此意义而言也不是最优的。本文得到改进后的Bayes区间估计,并在各种有代表性的自由度情形下通过对比指出它相对于传统的Bayes区间估计的优越性所在,由分析可见,改进后的区间估计更能满足生产实践的需要,得到的物种总数的区间估计更为精确。     

东湖水体的微生物污染状况初步调查

通过检测东湖的细菌总数、大肠杆菌与纤维素分解菌数目 ,发现东湖的细菌总数与大肠杆菌数目仍严重超标 ,前者为《生活饮用水卫生标准》GB5 74 9- 85的 2～ 99倍 ,后者为此标准的 1 0 0～ 1 0 0 0倍 ,但与一期截污工程完成初期相比已有很大改善 ,说明对东湖的污染治理取得初步成效。各湖区的细菌数目高度异质性 ,其规律与各湖区的有机碎屑数量呈正相关性     

霉菌总数测定培养基的改进研究

在霉菌检测国标法GB4789.15-94中所采用的孟加拉红培养基的基础上,添加不同浓度的葡萄糖、胰蛋白胨、酵母膏等营养物和表面活性荆吐温80,分别对黑曲霉、青霉菌液和不同种类的食品进行霉菌总数测定,经大量对比试验已优选出A4培养基,即在孟加拉红培养基中,添加0。15％的吐温80和1.0％的葡萄糖的培养基。试验结果表明,A4培养基对霉菌检出率较国标孟加拉红培养基的检出率提高了57.9％,且茵落更清晰易数。     

常见元素及其浓度对榆干离褶伞菌丝生长的影响

为研究常见元素对榆木离褶伞菌丝生长的影响,通过其在含有不同离子浓度的PDA培养基中生长速度的观察,探讨不同元素及其浓度对榆木离褶伞菌丝生长的影响。结果表明:1 mg/mL的Mg(Ac)2、KH2PO4和CaO促进菌丝生长;5,10 mg/mL的Mg(Ac)2、CaO,10mg/mL的Na2SO4、NaCl抑制菌丝生长;其他种类及浓度的离子对菌丝生长的影响不显著。     

球孢白僵菌野生及转基因菌株的退化

球孢白僵菌在人工培养基上继代培养容易发生退化变异,表现为菌丝徒长以及产孢量减少和毒力的逐渐下降,给真菌杀虫剂的生产和使用造成较大的损失.没有丢失被插入的外源毒力基因的工程株同样出现退化.培养基成分和含水量以及培养温度和光照等环境因子皆可不同程度地诱发退化的发生,但退化主要由其遗传机制决定,包括线粒体基因突变、异核现象、准性生殖、核基因突变以及有性重组等;菌落局变实质上也是菌种老化的征兆.真菌杀虫剂生产中防止退化的对策除减少传代次数外,还要根据具体菌株确定适宜的环境控制细则.