草鱼呼肠孤病毒RNA聚合酶基因的表达与产物纯化

草鱼呼肠孤病毒是引起草鱼出血病的主要病原,隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属.序列分析表明,GCRV S2 片段长为3 877核苷酸,编码一个分子量为138kDa 的蛋白VP2,具有RNA聚合酶性质.为进一步了解该病毒 RNA聚合酶特性,本研究在对GCRV RNA聚合酶基因(GCRV-RdRp)保守区(约1.5kb)重组质粒pR/RRp高效表达的基础上,分别构建了编码GCRV RNA聚合酶保守区N端与C端部分基因的 pR/RRpN及pR/RRpC重组表达载体,并在原核细胞中获得成功表达.筛选的重组表达菌株经IPTG诱导培养,得到分子量分别为98kDa、103kDa的目的表达融合蛋白.Western blot分析表明,该表达产物与兔抗GCRV-VP2血清呈阳性反应.通过ProBond柱亲和层析,纯化了融合有6个组氨酸的重组表达产物,并获得约90%纯的目的蛋白.上述结果为GCRV RNA聚合酶特性分析提供了依据.     

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属.草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鮁鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鮁鱼病毒病病原.本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究.结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异.此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型.在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性.Western blot 检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇.     

二龄草鱼肠炎病发病机理

本文通过对患肠炎病的二龄草鱼病鱼和正常草鱼的肠道及血液中的产气单胞菌(Aeromonas)的数量和毒力的比较,病鱼肠道、血液和其他内脏中的产气单胞菌所出现比率的调查,不同水温对该菌致病力的影响和用菌体提取液接种鱼体,以及用鲎试剂(鲎变形细胞溶解物Tachypleus Amebocyte Lysate“TAL”)对病鱼和正常鱼体内的内毒素进行测定等一系列的试验和观察,从而推断出二龄草鱼细菌性肠炎病的发病机理。     

饼形碘泡虫在草鱼苗体内发育各阶段的显微及超微结构

饼形碘泡虫是一种引起草鱼苗肠道疾病的病原体,主要寄生在草鱼苗前肠的绒毛固有膜内。通过光学显微镜、电子显微镜观察,在不同日龄的病鱼组织中可见到单核营养体,核分裂,多核营养体及孢质分割的单产孢体或双产孢体,极囊形成,孢壳组合及孢囊产生等过程。在27-30℃的水温中,该寄生虫在鱼体内发育成熟需要12-15天。透射电镜观察到成熟孢子有丰富的粗面内质网,糖原体,近极囊处各有一个略呈三角形的核,两个黑色的圆形体。极囊内极丝为4-5圈。通过扫描电镜观察到孢子的缝脊较凸出,每办孢壳各有一极丝孔。从裂开的孢子里还见到细胞质。     

草鱼同工酶基因座位多态性的初步研究

采用垂直淀粉凝胶电泳及特异性组织化学染色技术研究了25尾草鱼的6种同工酶系统(LDH,MDH,ADH,GDH,IDH,EST)约18—23个基因座位的遗传变异型。有7个基因座位(s-Mdh-A,Adh—B,Gdh-1,Gdh-2,Est-1,Est-6,Est-14)具有多态性,在其中4个基因座位(s-Mdh—A,Adh-B,Gdh-1,Est-1)上观察到的基因型频率与Hardy-Weinberg定律相符．实验表明草鱼的同工酶基因座位具有明显的多态性。这一结果为草鱼的人工选种和定向育种的可能性提供了依据。对草鱼GDH,EST同工酶的遗传基础、亚基组成以及酶变异的机理等问题进行了讨论。     

宽叶香蒲净化塘系统净化铅／锌矿废水效应的研究

研究了以宽叶香蒲(Typha latifolia)为优势群落的净化塘系统来处理广东韶关凡口铅/锌矿选矿废水。经5年多的监测结果表明,该系统能有效地净化铅/锌石广废水。在进入净化塘系统前,未处理的废水合有高浓度的悬浮物(4 635mg/L)和重金属[Fb(1.61mg/L)、Zn(1.96mg/L)和Cd(0.022mg/L)]等,经过净化后,水质明显改善,pH从8.03下降到7.74,总悬浮物去除率达99％,Pb去除率为90％,Zn和Cd去除率为84％,其它重金属如Cu、Fe和Al等也都有不同程度的降低。     

模拟稳定塘系统对污染指示菌的去除作用

本文研究了模拟稳定塘系统去除污染指示菌如总大肠菌群(TC),粪大肠菌群(FC),粪链球菌(FS)以及异养细菌(HPC)的作用。结果表明,16℃时污水在日进污水10t的模拟稳定塘系统停留9天后,TC与FC的密度下降4个数量级。在日进污水90t,污水理论水力停留时间10天的模拟稳定塘系统进行的全年跟踪监测结果表明,TC与FC密度随各塘依次递减。Ⅳ号塘出水的TC密度下降2.5个数量级,基本上达到了我国GB3838-88中规定的地面水Ⅲ级标准;FC密度下降3个数量级,达到WHO标准的轻污染水平,肯定了稳定塘系统去除污染指示菌的有效性。     

LAS和DEHP对草鱼胚胎和鱼苗的毒性效应

LAS对草鱼胚胎及鱼苗96h LC50值分别为4．2mg/L及5．6mg/L。胚胎发育在高于5．6mg/L时出现发育畸形。DEHP在乳化后浓度高达1000mg/L对虹将幼鱼未见急性毒性,在饱和的DEHP溶液中暴露30d的胚－鱼苗阶段试验也未见明显的毒性效应。     

性成熟草鱼卵巢发育的年周期变化

产卵前的卵巢同时含有大量4时相卵母细胞及少量2时相和3时相卵母细胞。产后2时相及3时相卵母细胞增多而4时相卵母细胞骤减,8月份4时相卵母细胞的数量又增多,约占卵巢体积的80％,及至11月份其数量又下降。自11月至翌年1月,卵巢中3时相卵母细胞增多而4时相卵母细胞则消失不见。至2月份,新的4时相卵母细胞又开始出现并逐渐增多。性成熟草鱼的卵巢以如此规律周而复始地产生成熟的卵子。卵巢中卵母细胞的发育是不同步的。但在产卵前有大量的3时相卵母细胞向4时相演化,同时有为数不少的发育中的2时相卵母细胞存在。产后卵巢中亦同时存在不同发育时期的卵母细胞。