| 草鱼呼肠孤病毒RNA聚合酶基因的表达与产物纯化 |
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| 引用本文： | 方勤,丁清泉,汪亚平,朱作言.草鱼呼肠孤病毒RNA聚合酶基因的表达与产物纯化[J].中国病毒学,2003,18(2):169-173. |
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| 作者姓名： | 方勤 丁清泉 汪亚平 朱作言 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院武汉病毒研究所,湖北武汉,430071
2. 淡水生态与生物技术国家重点实验室,中国科学院水生生物研究所,湖北武汉,430072 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30170730);"淡水生态与生物技术国家重点实验室"开放课题(2002FB05) |
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| 摘 要： | 草鱼呼肠孤病毒是引起草鱼出血病的主要病原,隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属.序列分析表明,GCRV S2 片段长为3 877核苷酸,编码一个分子量为138kDa 的蛋白VP2,具有RNA聚合酶性质.为进一步了解该病毒 RNA聚合酶特性,本研究在对GCRV RNA聚合酶基因(GCRV-RdRp)保守区(约1.5kb)重组质粒pR/RRp高效表达的基础上,分别构建了编码GCRV RNA聚合酶保守区N端与C端部分基因的 pR/RRpN及pR/RRpC重组表达载体,并在原核细胞中获得成功表达.筛选的重组表达菌株经IPTG诱导培养,得到分子量分别为98kDa、103kDa的目的表达融合蛋白.Western blot分析表明,该表达产物与兔抗GCRV-VP2血清呈阳性反应.通过ProBond柱亲和层析,纯化了融合有6个组氨酸的重组表达产物,并获得约90%纯的目的蛋白.上述结果为GCRV RNA聚合酶特性分析提供了依据.
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| 关 键 词： | 草鱼呼肠孤病毒 双链RNA病毒 RNA聚合酶 基因表达与纯化 |
| 文章编号： | 1003-5125(2003)02-0169-05 |
| 修稿时间： | 2002年9月11日 |
Expression of Grass carp reovirus RNA Polymerase Gene and Purification of its Product |
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