结核分枝杆菌H37Rv 色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析

目的 克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析。方法 以结核分枝杆菌( 简称结核杆菌)H37Rv 基因组为模板, 扩增trpA 基因, 构建pET30a-trpA 重组质粒; 转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21( DE3) 诱导表达, 纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基( His-rMtTrpA) 。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE) 和质谱分析测定相对分子质量( Mr) 后, 用圆二色光谱( CD) 分析和同源模建方法检测二级和三级结构。研究不同浓度HisrMtTrpA对β亚基酶活反应的影响。结果 成功克隆了813 bp 的目的基因trpA, 并获得了高纯度的His-rMtTrpA 蛋白。重组蛋白Mr 为33. 151 ×10³ ( 含载体蛋白) 。25 ℃时His-rMtTrpA 的二级结构包括31. 8% α 螺旋、31. 8% β 折叠、8. 4% β转角和27. 9%无规则卷曲, 它的三维模型显示为( β/ α) 8 桶状结构。酶学性质研究表明, 在His-rMtTrpA 与MtTrpB 的摩尔比为2. 2时, 色氨酸合成酶α亚基可以最大限度促进β亚基酶活反应。结论 成功得到高纯度的重组目的蛋白His-rMtTrpA, 其功能分析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础。     

肠道微生物与血清素互作研究进展

肠道微生物在肠道稳态和大脑健康中发挥着举足轻重的作用.血清素是大脑的一种重要的单胺类神经递质,90％以上在结肠肠嗜铬细胞中由色氨酸代谢转化而来,在机体发挥广泛作用.近年来的研究表明,血清素对机体发挥的作用可能受到肠道微生物影响.肠道中某些微生物具有产生血清素的能力,同时,微生物群及其代谢产物(如丁酸)能通过影响色氨酸羟...     

犁头尖凝集素色氨酸(Trp)所处微环境及构象的研究

本文通过荧光淬灭的方法对犁头尖凝集素(TDL)的内源荧光进行了淬灭研究.研究结果表明:丙烯酰胺与TDL分子中Trp残基的可接近程度达到100%,而KT和CsCl与Trp残基的可接近程度分别为83.3%和50%,说明TDL中大部分Trp残基位于分子表面或近表面区域,且位于表面的Trp残基所处微环境中带正电荷基团约为带负电荷基团的一倍.荧光淬灭数据分析表明这三种淬灭剂对TDL的荧光淬灭作用均属动态淬灭机制.此外,本文还研究了变性剂对TDL凝血活性与荧光光谱的影响,研究表明同浓度的盐酸胍对TDL变性作用明显强于脲,TDL活性的丧失主要是由于其活性中心被变性剂破坏而造成.     

IFN-γ在沙眼衣原体感染的细胞培养中的影响

为了探讨IFN-γ在沙眼衣原体（chlamydia trachomatis,ct)感染细胞培养中的影响,本实验采用不同浓度γ-干扰素作用于ct感染的HeLa细胞,用透射电镜观察HeLa细胞内原体（elementary bodies,EBs)和网状体（reticulate bodies,RBs)。同时用反相高效液相色谱法（reversed-phase high performance liquid chromatography,HPLC)测定细胞内色氨酸的浓度。结果显示不同浓度γ-干扰素作用下细胞内ct的EBs和RBs形态及数量不同,中高浓度的IFN-γ作用下胞内EBs和RBs明显减少或轻度减少,et生长受到抑制,细胞内色氨酸含量与γ-干扰素量呈负相关,说明IFN-γ通过诱导产生2,3-吲哚-双加氧酶（indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)降解色氨酸而抑制ct生长,提示γ-干扰素是抑制细胞内感染ct生长的一个重要因素。     

色氨酸卤化酶研究进展

能催化卤代反应的卤化酶,因其具有高效、选择性好、反应条件温和的特点受到广泛关注。其中色氨酸卤化酶是研究最多的一类酶,它的特点是可以有选择性地卤化色氨酸,主要包括氯化和溴化。而卤代化合物具有多种生物活性,在医药、化工等领域有着广泛的应用。本文主要介绍了色氨酸卤化酶的来源和种类,酶学性质及其异源表达的研究现状;重点阐述了其结构和功能之间的相互关系及催化机理;并对色氨酸卤化酶的应用以及未来发展方向进行了展望,以期为色氨酸卤化酶的开发应用提供参考。     

重金属Hg^2＋离子作用于PSⅡ 23 kD外周蛋白的光谱学研究

23kD蛋白是光系统Ⅱ（PSⅡ）的外周蛋白,具有增加Ca^2＋和Cl^-的结合以维持放氧活性的作用。本文借助内源荧光光谱和紫外吸收差谱考察了23kD蛋白与Hg^2＋的相互作用。所得结果表明：低浓度的Hg^2＋离子（〈10μM）引起23kD蛋白的荧光淬灭,淬灭程度与Hg^2＋离子浓度相关;进一步分析显示,Hg^2＋离子对23kD蛋白色氨酸荧光的淬灭属于静态淬灭。紫外吸收差谱可以检测到明显的配体向金属进行电荷转移的谱带（LMCT band）。随着Hg^2＋浓度的增加,LMCT带的强度逐渐增强。分析显示23kD蛋白只存在一类Hg^2＋离子结合位点。     

克木毒蛋白三种酶活性与色氨酸残基的关系

对一种新的核糖体失活蛋白──克木毒蛋白的研究表明,该分子中仅含一个色氨酸.此色氨酸与克木毒蛋白具有的三种酶活性有明显不同的关系.     

HPLC快速测定氨基酸口服液中的L—色氨酸

本文用ＨＰＬＣ直接测定Ｌ—色氨酸,简便快速,波长２８０ｎｍ,线性良好（ｒ＝０．９９９９）,平均回收率：１００．０１％,ｎ＝４,ｃｖ＝０．６０％。     

酵母菌色氨酸合成酶基因的克隆与表达

用RemHI酶切酿酒酵母(Saceharomyces cercuisiae) 1412-4D染色体DNA,通过蔗糖梯度分离2-4kb DNA片段并插入穿棱质粒pCN60,构成1412-4D基因文库。从基因文库中提取重组质粒,转化受体菌C9(a,trp5,adcl,ade6),用直接功能互补法,分离到9株重组质粒,它们都含有3．2kb的TRP5 DNA片段,分别命名为pCN60(trps)1-90转化体中色氨酸合成酶的酶活水平比原始菌株1412-4D高3倍。