厚壳贻贝足丝黏附蛋白mfp-3的重组表达及黏附功能分析

厚壳贻贝（Mytilus coruscus）中富含各种黏附蛋白分子,其中贻贝足丝蛋白3（mussel foot protein-3, mfp-3）是贻贝用以与外界基质进行黏附的主要蛋白分子.贻贝足丝中天然的mfp-3的含量低,水溶性差,因此纯化困难.本文以厚壳贻贝足丝蛋白mfp-3的cDNA序列为目的基因,用PCR法扩增Mfp-3基因,并成功构建含有多聚组氨酸标签的重组mfp-3原核表达载体pET-21a/ Mfp-3.经IPTG（isopropylthio-β-D-galactoside）诱导表达出重组蛋白,利用亲和层析和反相高效液相色谱分离纯化,获得分子量为9.18 kD的重组蛋白.经酪氨酸酶催化、玻璃包被和石英晶体微天平（quartz crystal microbalance,QCM）分析.结果表明,重组厚壳贻贝mfp-3蛋白经酪氨酸酶催化后,L-3,4-二羟基苯丙氨酸(即多巴,L-3,4- dihydroxyphenylalanine, DOPA) 含量较高并且具有较好的黏附性能.上述研究为开发以mfp-3黏附蛋白为来源的生物粘合剂奠定了良好的基础.     

重组肺炎链球菌甘油脱氢酶活性及晶体培养的初步分析

甘油脱氢酶能够氧化胞内甘油为代谢活动提供能量,并参与调控与宿主粘附相关细菌蛋白质的表达,是潜在的抗菌药物靶点. 本文利用大肠杆菌BL21原核表达肺炎链球菌甘油脱氢酶,获得大量上清表达的目的蛋白. 再用Ni-NAT亲和层析、DEAE离子交换层析以及Superdex 200分子筛进行纯化. 经数据拟合,证实该酶在溶液中以同源二聚体形式存在. 光谱实验证实该重组表达甘油脱氢酶仍具有氧化甘油生成1, 3-二羟基丙酮的活性. 用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体,在0.1 mol/L Bicine PH 9.6,13% PEG MME 5000,0.2 mol/L KSCN,4% Dioxone条件下,得到了晶型好且有一定衍射能力的单晶,为解析肺炎链球菌甘油脱氢酶的三维结构及研究结构与酶活之间的关系奠定了基础.     

芋营养器官中的草酸钙晶体及其可能的生理作用

利用徒手切片,在光学显微镜下对芋(Colocasia esculenta(L.)Schott)营养器官中晶体的类型和分布进行了观察和研究,并用化学方法对晶体的化学成分进行了鉴定。结果表明,芋营养器官中的晶体为草酸钙结晶体,形态上可以分为针晶和簇晶两大类。含针晶束的异细胞有3种类型:含发射型草酸钙针晶束异细胞(存在于叶片、叶柄、块茎中),含大型草酸钙针晶束异细胞(存在于叶片、叶柄、块茎、块茎皮中),含大量草酸钙针晶的管状异细胞(仅存在于不定根中)。草酸钙针晶也有散乱分布于块茎和不定根中的。草酸钙簇晶在叶片、叶柄、块茎、块茎皮、不定根中均有分布,且叶片、叶柄、块茎皮中的簇晶比块茎和不定根中的尖锐。芋营养器官中的草酸钙晶体很可能是作为一种防御机制,防止动物的取食。     

量子点在生物医学中的应用

半导体量子点是无机纳米结晶,构成于硒化镉核心和硫化锌外壳.这种荧光标记物的发射光强是常用有机荧光染料的20倍,稳定性是其100倍.量子点的发射波长取决于核心粒子的大小,而每一种单色量子点的发射波长窄而对称.这些光学特性使量子点在医学诊断、药物的高速筛选以及基因和蛋白质的高通量分析方面具有广泛的应用前景.基于量子点的稳定性和生物相容性,有可能通过标记不同颜色的量子点到不同的分子,观察它们在活细胞内的运动.     

外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达

[目的]研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis简称Bt)工程菌的方法.在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力.而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失.将基因整合人染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法.[方法]本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12.并利用pKTF12质粒将crylAc基因定点整合入XBU001染色体上.[结果]利用载体pKTF12将crylAc定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响.重组菌株KCTF12中的crylAc基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体.与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势.[结论]定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法.     

白内障与人工晶体

一份调查材料显示,中国有视力障碍者800万,其中仅白内障致盲就达400万左右,白内障已成为中国盲人致盲的首要原因。在全世界4000万盲人中,约有半数是白内障所致。近年来,随着中国人口老年化问题,因白内障致盲者已达到世界白内障盲人的五分之一,每年还将新增白内障患者约40万人。     

31例心脏移植的体外循环转流及供心保护经验

目的：报道连续31例心脏移植的体外循环转流经验及供心保护经验。其中扩张性心肌病29例,缺血性心肌病1例,复杂性先天性心脏病1例。方法：体外循环采用中度低温、轻度血液稀释法。供心保护方法为10例采用晶体保存液,21例采用UW液。结果：31例手术脱离体外循环顺利,无手术死亡。结论：良好的供心保护,监测各重要生理指标,使灌注充分合理是成功顺利脱离体外循环的关键。     

压电生物传感器及其研究进展

生物传感器的研究是近年来生物化学,分子生物学,传感器技术等领域的研究热点。本文简要介绍了压电生物传感器（PEBS）的基本原理,组成和分类,重点对近年为国内外PEBS方面的研究进展,生物识别元件的固定化技术和PEBS的发展趋势进行了综述。     

苏云金芽孢杆菌HD-1伴孢晶体水解规律的研究

采用HCl将蛋白质彻底水解的方法对苏云金芽孢杆菌HD-1伴孢晶体的水解规律和酸水解条件下芳香族氨基酸的被破坏程度进行了研究,不经衍生HPLC法直接测定水解样中酪氨酸的含量。得出酸水解的最佳时间为24h、水解剂的用量为1．0mlHCl／mg伴孢晶体、水解最佳温度为110℃。该研究为Bt制剂毒力效价的测定奠定了基础。     

单切口与双切口有晶体眼后房型人工晶体植入术治疗高度近视的疗效对比

目的:观察和比较单切口与双切口有晶体眼后房型人工晶体植入术治疗高度近视的疗效和安全性。方法:将2011年1月至2013年6月间40例行常规双切口ICL植入术(80眼)患者设为对照组,2013年7月~2016年1月间40例行单切口ICL植入术(80眼)患者设为观察组。比较两组手术前后的裸眼视力、最佳矫正视力、手术安全性指数、有效性指数、屈光度(柱镜、等效球镜度数)、眼压、ECD、前房深度及并发症的发生情况。结果:术后6个月时,两组的裸眼视力均较术前显著提高(P0.05),且观察组的显著高于对照组(P0.05);观察组的手术安全性指数和有效性指数均显著高于对照组(P0.05)。术后6个月时,两组的柱镜、等效球镜度数均较术前显著改善,且观察组的显著优于对照组(P0.05);术后两组的眼压、前房深度比较差异均无统计学意义(P0.05);对照组术后角膜内皮细胞计数(ECL)较术前显著降低(P0.05),观察组术后ECD与术前比较差异均无统计学意义(P0.05),ECD显著高于对照组(P0.05)。术后6个月内,观察组的并发症发生率显著低于对照组(P0.05)。结论:与双切口术比较,单切口有晶体眼后房型ICL植入术治疗高度近视临床效果显著,安全性更高。