Smurf1对增生性瘢痕纤维化形成的影响及分子机制

摘要 目的：探究Smurf1对增生性瘢痕形成中纤维化进程的影响及分子机制。方法：收集2021年6月至2022年6月空军军医大学第二附属医院烧伤整形科行增生性瘢痕切除手术患者的瘢痕组织及正常皮肤标本各12例,采用HE和Masson染色进行病理学检查。取增生性瘢痕组织无菌处理后,采取组织块法分离培养获取人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）。将HSF细胞按照实验方案分组,（1）Smurf1过表达分组：对照1组（Con-1组）,空载体组（Vector组）和Smurf1过表达组（OE-Smurf1组）;（2）Smurf1干扰表达分组：对照2组（Con-2组）,阴性组（si-NC组）,Smurf1干扰表达组（si-Smurf1组）。再分别将pcDNA3.1空质粒、pcDNA3.1+Smurf1质粒、si-NC和si-Smurf1转染至Vector组、OE-Smurf1组、si-NC组和si-Smurf1组HSF细胞。通过qRT-PCR检测Smurf1表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭水平,细胞划痕实验检测细胞迁移水平。结果：HE染色和Masson染色结果显示,与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织的真皮层厚度显著增加,真皮层中存在大量被染成蓝色的胶原纤维,排列紊乱且致密。与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中TGF-β1、α-SMA、COL1、COL3、TβR-I、p-Smad3和Smad7的蛋白表达水平均升高（P<0.05）,Smurf1表达水平降低（P<0.05）。与Con-1或Vector组比较,OE-Smurf1组HSF细胞中TGF-β1、α-SMA、COL1、COL3、TβR-I、p-Smad3和Smad7蛋白的表达水平均降低（P<0.05）,HSF细胞增殖、侵袭和迁移水平降低（P<0.05）,凋亡水平升高（P<0.05）。与Con-2组或si-NC组比较,si-Smurf1组HSF细胞中TGF-β1、α-SMA、COL1、COL3、TβR-I、p-Smad3和Smad7蛋白的表达水平均升高（P<0.05）,HSF细胞增殖、侵袭和迁移水平升高（P<0.05）,凋亡水平降低（P<0.05）。结论：Smurf1可能通过抑制TGF-β1/Smad通路,进而抑制增生性瘢痕的纤维化进程。     

积雪草甙治疗瘢痕的分子生物学研究进展

积雪草戒作为一种中药提取物有抑制疲痕增生的作用,本文通过对国内外期刊中有关积雪草甙分子生物学研究的文献进行查阅,综述了积雪草武对成纤维细胞、胶原代谢、细胞因子等的影响,为在分子水平研究中药提取物治疗瘢痕的作用机制提供思路,以期研制出广泛应用于临床的治疗瘢痕的药物.     

一种新型的截短型转化生长因子βⅡ型受体在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

克隆人源的截短型转化生长因子βⅡ型受体（tTGF-βRⅡ）,成功构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。采用PCR技术扩增得到目的基因tTGF-βRⅡ,插入原核表达载体pGEX4T3的相应位点,并在大肠杆菌BL21（DE3）中获得高可溶性表达的重组蛋白,重组蛋白GST-tTGF-βRⅡ经Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化后,再经凝血酶酶切,然后经Glutathione-Sepharose 4B纯化获得目的蛋白tTGF-βRⅡ,SDS-PAGE分析表明：可以通过Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST-tTGF-βRⅡ,其分子量约37.0 KDa,和目的蛋白tTGF-βRⅡ,分子量为11.0 KDa。Western blot结果显示GST-tTGF-βRⅡ和tTGF-βRⅡ为特异性蛋白。运用基因工程的方法获得tTGF-βRⅡ目的蛋白,对瘢痕成纤维细胞增殖具有很好抑制作用。     

子宫动脉化疗栓塞与单子宫动脉栓塞在瘢痕妊娠治疗有效性对比

目的:对比子宫动脉化疗栓塞与单子宫动脉栓塞在瘢痕妊娠治疗中的有效性。方法:选择2016年1月-2018年12月在我院诊治的瘢痕妊娠患者96例,根据手术方式不同分为两组,各48例,其中,对照组采用单子宫动脉栓塞治疗,研究组采用子宫动脉化疗栓塞治疗,记录并对比两组术中出血量、手术时间、住院时间、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(human chorionic gonadotrop(h)in-beta subunit,β-HCG)下降至正常范围时间、宫腔异常包块消失时间、月经恢复正常时间、首次肛门排气时间等指标;记录并对比两组患者治疗前后的卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)、抑制素B(inhibin B,INHB)等卵巢功能指标变化;记录并对比两组的膀胱损伤、阴道流血、感染等术后并发症的发生情况。结果:研究组的术中出血量、手术时间、住院时间均显著少于(短于)对照组(P0.05);研究组的β-HCG下降至正常范围时间、宫腔异常包块消失时间、月经恢复正常时间、首次肛门排气时间均显著短于对照组(P0.05);治疗前,两组的FSH、LH、E2、INHB等卵巢功能指标对比均无显著性差异(P0.05);治疗后,两组的FSH水平均升高,LH、E2、INHB水平均降低,且研究组更优(P0.05);研究组的并发症发生率显著低于对照组(6.25%vs. 20.83%,P0.05)。结论:相比于单子宫动脉栓塞,子宫动脉化疗栓塞有利于改善瘢痕妊娠患者的手术相关指标及术后恢复情况,对患者卵巢功能的恢复较好,且安全性较高,值得推荐至临床广泛应用。     

炎症和纤维标志物在痤疮增生性瘢痕形成中的表达

本研究旨在考察炎症和纤维标志物在痤疮增生性瘢痕形成中的表达模式及其在瘢痕形成中的作用。采用免疫组化和RT-PCR检测了20份痤疮增生性瘢痕组织和20份正常组织中抗炎细胞因子(IL-4和IL-10)、促炎细胞因子(IL-1β和TNF-α)和纤维化标志物(TGF-β1, TGF-β3, IGF-1R和SMAD2)的表达情况。研究显示,增生性瘢痕组织中IL-4和IL-10的阳性染色强度分别下降了36.13%和47.86%(p0.05),而IL-1β和TNF-α的阳性染色强度分别升高了1.34倍和5.37倍(p0.05)。增生性瘢痕组织中IL-4和IL-10的m RNA相对表达量分别下降了53.57%和62.28%(p0.05),而IL-1β和TNF-α的mRNA相对表达量分别升高了2.45倍和1.75倍(p0.05)。增生性瘢痕组织中TGF-β1、TGF-β3、IGF-1R和SMAD2的阳性染色强度分别显著升高了2.46倍、1.18倍、2.65倍和1.54倍(p0.05)。增生性瘢痕组织中TGF-β1、TGF-β3、IGF-1R和SMAD2的mRNA相对表达量均分别升高了4.02倍、2.11倍、3.78倍和2.45倍(p0.05)。本研究表明,增生性瘢痕组织中抗炎细胞因子IL-4和IL-10为低表达模式,而促炎细胞因子IL-1β和TNF-α为高表达模式,另外,纤维化标志物TGF-β1、TGF-β3、IGF-1R和SMAD2均为高表达模式。上述炎症和纤维化标志物均参与调节增生性瘢痕的形成。     

脂氧素A4对瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响及机制研究

最新文献表明,脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)对组织纤维化及相关疾病有防治作用。为了观察脂氧素A4对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响并探讨其抗瘢痕形成的机理,该文首先通过RT-PCR和Western blot法检测瘢痕成纤维细胞是否表达脂氧素受体ALX;然后将不同浓度脂氧素A4加入瘢痕成纤维细胞培养液中分别作用相应时间后,MTT法检测细胞的增殖程度,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,羟脯氨酸测试盒检测细胞培养液中羟脯氨酸含量,ELISA法检测细胞培养上清中TGF-β水平。结果发现,瘢痕成纤维细胞表达ALX,脂氧素A4抑制瘢痕成纤维细胞增殖、羟脯氨酸释放及TGF-β分泌,同时还诱导细胞凋亡。综上所述,脂氧素A4抑制瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成并诱导其凋亡,可能是防治瘢痕形成的重要潜在药物。     

瘢痕子宫再次住院妊娠不同分娩方式的研究

目的:探讨瘢痕子宫妇女再次妊娠后采用不同分娩方式的临床效果,为今后瘢痕子宫产妇分娩提供可靠经验和指导.方法:选择从2011年5月至2012年10月在我院门诊检查并收住入院的120例瘢痕子宫再次妊娠孕妇,将120例再次妊娠产妇平均分为两组,分别是剖宫产组和阴道分娩组,对比两组孕妇产后新生儿窒息情况、产后出血及产后发热等情况.结果:通过统计后发现采用剖宫产组产妇在平均产后出血量、新生儿窒息等方面与阴道分娩组差异不大,但和初产妇剖宫产之间差距较多.结论:瘢痕子宫妇女再次妊娠后可以采用阴道分娩方式分娩,在分娩前后做好准备工作和产妇心理疏导,值得临床使用.     

咪喹莫特抑制兔耳瘢痕增生的机制研究

目的:研究咪喹莫特抑制兔耳瘢痕增生的作用及可能机制.方法:选取10只新西兰大耳白兔,雌雄不限,根据本实验室的改良方法建立兔耳瘢痕模型,每只兔耳腹侧做六个直径为1cm的圆形创面,每个相距1.5cm,双侧对称,左耳为实验组涂抹5％咪喹莫特软,右耳为对照组涂抹等量凡士林软膏,待术后14天上皮化均完全后开始涂抹,一日一次.分别于术后14天、21天、28天、35天及42天同一时间点空气栓塞随机处死2只兔子,后沿每个瘢痕边缘外周的0.5cm处环形切下,经瘢痕最凸点直径一切为二,一半固定后行苏木精-伊红(HE)染色及Masson三色法染色,观察形态学差异,测量并计算瘢痕增生指数(Scar elevation index,SEI):另一半用于提取RNA,反转录后行Real-time PCR检测细胞外基质I型胶原(Collagen-I,Col-I),细胞因子IFN-γ及IL-4的表达.结果:HE及Masson染色可见实验组胶原沉积较对照组明显减少,SEI显示空白对照组于术后第21天增生程度达到高峰,其增生程度明显高于实验组;Real-time PCR结果可见实验组Col-I及IL-4的表达在各时间点明显降低,且IFN-γ的表达较对照组增高.结论:咪喹莫特可能通过调节IFN-γ及IL-4的表达来发挥抑制瘢痕增生的作用.     

剖宫产后瘢痕子宫14～27周孕引产方法的比较

目的：探讨不同方法对剖宫产后瘢痕子宫中期妊娠（孕14~27周）引产的临床效果。方法：对97例既往有剖宫产史、要求引产的中期妊娠妇女进行回顾性分析,其中单独使用利凡诺的有27例,米非司酮联合利凡诺的有28例,利凡诺联合米索前列醇的有19例,米非司酮联合米索前列醇的有23例,观察采用不同引产方法的孕妇宫缩出现时间、产程、产后出血量及完全流产率的不同。结果：使用米非司酮联合利凡诺、利凡诺联合米索前列醇、米非司酮联合米索前列醇的患者较单独使用利凡诺的患者,其宫缩出现时间及产程均显著性降低,完全流产率均显著性升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：米非司酮联合利凡诺、利凡诺联合米索前列醇、米非司酮联合米索前列醇优于单独使用利凡诺进行引产,其宫缩时间及产程均降低,完全流产率升高,值得在临床上推广使用。     

树体结构的整形和修剪

树体结构影响着树的生长旺盛程度和形成花芽,影响产量。通过树体结构的整形和修剪来提高树的生长和产量。