一种适合针刺活检样品的蛋白质组学分析方法

针刺活检样品是一种重要的临床组织样品,其蕴涵的蛋白质信息,对了解人类疾病极为重要.然而,由于该样品的体积极小,其研究受到很大限制.本文建立和优化了适合针刺活检样品的基于双向电泳的蛋白质组学分析平台：通过直接抽提获得针刺活检组织的蛋白质样品;用24 cm 固定梯度干胶条(pH 3-10NL)等电聚焦及12.5% SDS-PAGE分离获得蛋白质样品;感兴趣的蛋白质点经过胰酶酶解后用MALDI TOF/TOF质谱分析.运用所建立的平台对3例来自3只不同大鼠的肝脏针刺活检样品进行分析,获得了多于2500个蛋白质点的高重复性的二维凝胶银染图谱.应用该方法分析人前列腺针刺活检样品的蛋白质组,同样获得了高质量、高重复性的结果.其中随机选取的包括低丰度点在内的57个蛋白质点,经胰酶酶解后进行MALDI串联质谱分析,均获得了高确定性的鉴定结果.通过建立针刺活检样品的蛋白质组学分析方法,为研究人类疾病的分子机制提供了必要的前提保障.     

循环肿瘤DNA的检测技术及在癌症诊疗中的应用价值

循环肿瘤DNA（ctDNA）来源于肿瘤,能很好地反映肿瘤的基因信息,并且会随着肿瘤的进展发生相应的改变。近年来,ctDNA独特的能力备受人们关注并被广泛研究,本文在总结ctDNA的来源、性质和样品处理的基础上,对ctDNA的检测技术及在癌症诊疗中的应用进行综述,阐述了ctDNA标准物质在二代测序中的作用及重要性,并指出ctDNA样品的收集、存储、定量检测以及数据分析等各个流程中建立统一标准及规范的迫切性。     

影像引导下前列腺定向穿刺活检术的研究进展

确诊前列腺癌的金标准无疑是病理组织学检查,影像引导下的前列腺定向穿刺活检又是这当中最有效、最便捷的方式。而基于前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)筛查以及6分活检结果的前列腺癌诊断,已经由于其对低度肿瘤的过度诊断和对临床上有意义前列腺癌(格林森评分≥7)的诊断不足遭到批评。所以纵观国内外,影像引导已经增加到先用多参数MRI(multi-parametric magnetic resonance imaging,mpMRI)扫描检出病变组织再进行前列腺定向穿刺活检,包括,in-bornMRI引导,认知融合引导,以及MRI/TRUS融合引导下的活检。本文就一些影像引导下前列腺定向穿刺活检术的研究进展进行综述。     

树反复肝活检技术

本文报道在利用树建立感染人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）模型,以及进行ＨＢＶ和（或）黄曲霉毒素Ｂ１诱癌实验研究中,摸索出的反复对树肝活检技术。对７６只树进行３６３例（次）肝切手术,其中有４９只树每只反复肝活检６次,有１６只每只反复肝活检７次。相邻两次手术间隔为２个月。没有１例因手术而死亡。亦没发现严重的术后并发症。肝活检所获取的标本可以进行多项检查。表明该技术是对树进行动态肝活检的既安全又简便的方法。     

应用原位杂交及免疫组化检测肝活检组织中流行性出血热病毒RNA及抗原

本文应用原位杂交及免疫组化技术对25例流行性出血热(EHF)患者肝活检组织进行了病毒RNA及其囊膜G_2蛋白的定位检测,结合光镜,认为肝细胞的变性、胞浆疏松化、点状坏死是EHF病毒直接侵犯并在其胞浆内增殖表达所致,肝组织的灶状坏死则主要是肝窦狭窄、枯否氏细胞增生导致微循环障碍引起的缺血性梗死。急性脂褐素沉积是病毒侵犯肝细胞的间接证据。研究还发现,肝细胞内病毒的多少与病程关系不明确,而与临床分型有一定相关,为探讨EHF的发病机制提供了分子水平的依据。     

癌症液体活检新思路：数字PCR检测DNA甲基化

癌症的早期诊断可提高患者生存率.微创采集人体体液的液体活检方法可避免传统肿瘤组织活检方法侵入性和异质性的问题,逐渐成为癌症诊断的新方式.另外,DNA甲基化作为预测癌症发生发展的标志物,引起了越来越多研究者的关注.但传统DNA甲基化的检测方法灵敏度不高,且容易出现假阳性.近年来,数字PCR技术因其超高的检测灵敏度和精确度、无需标准曲线即可进行核酸绝对定量检测的优势,被用于DNA甲基化的定量检测中.本文首先介绍了DNA甲基化与癌症发生发展的关系,总结了传统DNA甲基化检测方法及其在癌症临床诊断中的应用,阐述了基于不同核酸样本分散方法的数字PCR技术及其在微量DNA甲基化检测中的优势,总结了采用数字PCR技术检测癌症患者体液中DNA甲基化的具体步骤,列举了数字PCR技术在癌症DNA甲基化检测中的研究成果及应用进展,最后提出了数字PCR技术检测癌症DNA甲基化未来可能面临的挑战,并对数字PCR技术在癌症液体活检方面的应用前景进行了展望.     

循环肿瘤DNA检测技术的研究进展

循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ct DNA)检测,即所谓的"液体活检"。与传统的组织活检技术相比,"液体活检"能够更加全面地反映肿瘤的特征。随着ct DNA研究的逐渐深入,其检测技术的灵敏度和特异性都得到了很大的提升,而其中最具代表性的检测技术有数字PCR(digital PCR,d PCR)技术、流式技术的磁珠乳液扩增方法(bead,emulsion,amplification and magnetic,BEAMing)、标记扩增深度测序(tagged-amplicon deep sequencing,TAm-Seq)等,这些技术的发展有望开启精准医疗的新时代。     

肿瘤液态活检的研究进展及其临床应用

液态活检是一类新兴的病理检测手段,其研究内容包括肿瘤循环细胞、肿瘤循环DNA、外泌体等物质,其中的信息为肿瘤患者的个性化医疗提供有力的依据。它凭借无创、便捷等优势在临床应用中展现出广大前景。近年来,随着液态活检研究内容的扩大及其捕获与检测技术的发展,液态活检在临床中的应用日益广泛。本文旨在探讨近年来液态活检的主要研究对象、检测技术以及在临床应用中的发展前景与所面临的挑战,以期为肿瘤患者获得更佳的治疗,推动肿瘤精准医学的发展。     

肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞的快速分离与体外培养

循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)是从肿瘤病灶脱落并进入外周血液循环的处于游离状态的肿瘤细胞,代表了肿瘤病灶的分子特征,可用于对肿瘤的“液体活检”。但外周血中CTCs数目极为稀少,使得后续针对CTCs的分子与功能分析面临巨大挑战。鉴于此,本文建立了一种基于微流控芯片和免疫磁珠的能够快速从肺癌患者的外周血中分离CTCs的方法。该方法直接针对全血进行一步分离,可避免血液样本预处理及富集等过程对细胞造成的损伤,从而有效地保护CTCs的活性(>90%)。分离得到的CTCs可富集在小体积中(80 μL),实现高密度的细胞培养,完成体外扩增,扩增后的CTCs可以被进一步冻存、复苏及再次增殖培养,表明已经对患者血液中的CTCs成功建系。本文进一步对CTCs进行了基因突变(EGFR、KRAS、PIK3CA、TP53和BRAF)检测及荧光标记葡萄糖类似物(2-NBDG)摄取的功能分析,证明CTCs存在较大异质性。本研究成功实现了对外周血中稀少的CTCs进行体外培养,并对CTCs进行了基因、蛋白、功能等各个层面的分析,这对于肿瘤精准医疗具有重要的临床意义。     

肾活检组织免疫荧光染色

免疫荧光技术由 Coons等于五十年代创立 ,目前已广泛应用于临床检验。在人类肾脏疾病中 ,不同类型的肾小球肾炎有不同的免疫反应特点。我科自一九八四年至今 ,对住院患者的肾活检组织进行免疫荧光染色 ,共检测 395 3例 ,在实际应用中收到了很好的效果。现介绍如下 :1.材料1.1　标本来源 :肾组织均系我院肾病科肾活检标本 ,经恒温冷冻切片机 3～ 5 μm切片 ,4℃备用。1.2　试剂配制 :抗人荧光抗体 Ig G、Ig A、Ig M、C3、C4、Cq、F为 DAKo公司产品 ,由北京医科大学病理学系提供。1.3　染色步骤 :1肾组织冷冻切片凉至室温编号入湿盒。2…