棕色固氮菌缺失nifZ基因的突变种固氮酶MoFe蛋白的纯化和性质

采用 52℃下加热 6 min,后经 DEAE- 52、Sephacryls S- 2 0 0和 Q- Sepharose等柱层析方法 ,分离纯化了棕色固氮菌 (Azotobacter vinelandii)缺失 nif Z基因突变种固氮酶 Mo Fe(Δnif Z Mo Fe)蛋白 ,其纯度达到电泳纯。Δnif Z Mo Fe蛋白的固氮活性为 2 83nmol C2 H2 还原 / (min·mg蛋白 ) ,远低于野生种 Mo Fe蛋白。Δnif Z Mo Fe蛋白对氧更敏感 ;热稳定性略低于野生种。Δnif Z Mo Fe蛋白的可见光吸收光谱与野生种 Mo Fe蛋白极为相似。其圆二色谱和磁圆二色谱在 450～ 550 nm与野生种 Mo Fe蛋白显著不同 ,表明其 P- cluster及其周围环境与野生种 Mo Fe蛋白有所差异。这亦可能是造成缺失 nif Z突变种 Mo Fe蛋白固氮活性低的原因。     

罗伦隐球酵母胞外多糖的研究I．发酵条件

研究了罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)产生胞外多糖的适宜条件。培养基组成(g／L)：葡萄糖80.00,酵母膏1.25,KH2PO4 3.00,MgSO4·7H2O 0.05,CaCO3 10.00,pH6.0。在30℃,旋转式摇床(200r／min)上培养6天。胞外多糖产量最高可达17.38g／L,对底物的转化率为21.725％。     

赤霉素A_4、A_7的发酵研究

初选藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)农大17菌株为赤霉素A_4、A_7(GA_4、GA_7)的生产菌,该菌株GA_(4+7)的积累量,除与营养条件有关外,温度和pH是极为重要的因子,随着发酵温度从28℃上升至32℃,GA_(4+7)的产量由21μg/ml增至81μg/ml,GA_3由702μg/ml降至328μg/ml。pH回调至中性,GA_(4+7)的产量由75μg/ml增至180μg/ml,GA_3由322μg/ml降至211μg/ml。此外,设法延长发酵周期也是增加GA_(4+7)的一个因素。综合上述条件,即发酵过程中,发酵液的pH由48h前的4回调并维持在6.7左右,温度由28℃上调并控制在32℃,摇瓶培养12天,GA_(4+7)的产量达890μg/ml,20—600L发酵罐发酵240h,GA_(4+7)产量达680μg/ml左右。GA_(4+7)浓度的测定亦作了简化处理,发酵液不经提取,可直接用硅胶板G薄层层析(TLC)后进行荧光比色,产品测定宜采用高效液相色谱法(HPLC)。按照上述条件培养的农大17菌株,产生GA_3、GA_7和GA_4的比例为23.131:16.105:31.258,GA_4高于有关报道。     

罗伦隐球酵母胞外多糖的研究 Ⅰ.发酵条件

研究了罗伦隐球酵母(cryptococcus laurentii)产生胞外多糖的适宜条件。培养基组成(g/L):葡萄糖80.00,酵母膏1.25,KH_2PO_3.00,MgSO_4·7H_2O0.05,CaCO_3 10.00,pH6.0。在30℃,旋转式摇床(200r/min)上培养6天。胞外多糖产量最高可达17.38g/L,对底物的转化率为21.725％。     

Affinity chromatography—dependent selection （ACDS） of genomic DNA fragments bound specifically to bacterial synthesized Myc／Myn proteins

This paper describes an approach to seek for mouse c-Myc/Myn proteins-bound specific sequences among genomic DNA.cDNA fragment of myn gene was obtained through RT-PCR technique from RNA of NIH3T3 cells.DNA fragments encoding BR/HLH/LZ structure of Myc and Myn proteins were cloned in frame into pGEX-2T vector respectively.Fusion GST-Myc and GST-Myn synthesized in E.coli hosts showed affinity to CACGTG E-box DNA and subsequently interacted with genomic fragments prepared through whole-genome-PCR.A PCR-assisted procedure which combines protein-DNA interaction and affinity chromatography was designed to enrich Myc/Myn bound DNA.At least two genomic DNA fragments obtained exhibit specifical binding capacity to Myc/Myn complex but not to GST alone.Significance of the work and of the technique itself as well asidentification of the DNAs are discussed.     

曲氏传药中乌头碱的薄层色谱测定

在硅胶Ｇ薄层板上用氯仿：１,２－二氯乙烷：甲醇：氨水为展开剂分离中草药复方曲氏传药中生物碱,并有和改良碘化铋试剂显色后对其中的乌头碱进行直接扫描测定。此法简便、快速、准确、灵敏且稳定。     

高压液相色谱法测定脑活素中氨基酸含量

本文介绍用反相高压液相色谱法分析脑活素注射液中游离氨基酸的组成和含量,游离氨基酸通过与２,４－二硝基氟苯在柱前衍生化反应,生成二硝基氨基酸（ＤＮＰ－氨基酸）,经氨基酸专用分析柱分离,用紫外检测器３６０ｎｍ检测,脑活素的１６种氨基酸在６０分钟内得以良好分离,操作简单、准确。     

旋扭山绿豆根瘤菌MXDI6菌株氢酶诱导表达

在自生异养条件下,旋扭山绿豆根瘤菌ＭＸＤＩ６菌株的氢酶诱导表达受气相、ｐＨ值、镍等因子影响：氢酶表达的最适氧浓度为４％,最适氢浓度为１５％,二氧化碳没有明显影响;氢酶表达的ｐＨ值以５．０—６．０为宜;０．５μｍｏｌ／ＬＮｉＣｌ２明显促进吸氢活性,但镍浓度大于１μｍｏｌ／Ｌ则抑制吸氢活性．     

北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶电荷异构体的分离和某些性质

等电聚焦表明,北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶由等电点分别为５．０,５．３,５．９,６．１和６．５的五个主要的活性组分（电荷异构体）构成,利用分析型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳进行电荷异构体的制备级分离,采用三氯乙酸沉淀法快速确定蛋白条带的位置,电渗洗脱法回收蛋白,获得其中两个电荷异构体,对比研究结果表明电荷异构体的活性,氨基酸组成,二级结构等性质无明显差异。