中国林蛙卵核糖核酸酶的分离纯化及其抗肿瘤作用

以中国林蛙卵为原料,采用丙酮分级沉淀、SP-Trisacryl阳离子交换色谱、Sephadex G-75凝胶过滤色谱、C8反相色谱等纯化方法,得到一种具有核糖核酸酶活性的蛋白质,采用SDS-PAGE电泳对该蛋白质进行了相对分子质量和纯度测定。结果表明：纯化的中国林蛙卵核糖核酸酶为相对分子质量13kDa的单一成分。该酶最适反应温度为65℃,最适反应pH为5.5~6.0,米氏常数为4.11μmol/L,最大反应速率为2.82 pmol/s。在体外细胞毒性实验中,对人三种肿瘤细胞HeLa、K562、MCF-7具有抑制作用,其IC50分别为0.6μmol/L、0.8μmol/L和4μmol/L,而对于正常人成纤维细胞在酶浓度达到8μmol/L时仍未见明显细胞毒性。这种从中国林蛙卵中分离纯化出的具有选择性细胞毒性的小分子量核糖核酸酶,为肿瘤的治疗提供了新的候选蛋白分子。     

中国林蛙蝌蚪对盐度和pH的耐受性

分别在正常盐度不同 pH值、正常 pH值不同盐度和相同水温 18 3～ 2 0 7℃的条件下 ,进行中国林蛙蝌蚪对盐度和 pH值的耐受性实验。结果表明 ,在pH值为 6 8～ 7 0时 ,盐度在 2 0～ 3 0g·L-1对蝌蚪 96h存活率没有明显影响 ;随着盐度的增加 ,蝌蚪存活率下降 ;盐度对蝌蚪 2 4、4 8、72和 96h的TLm 值分别为 8 79,7 12 ,5 6 4和 3 83g·L-1,安全浓度为 1 73g·L-1。在盐度为 0 18g·L-1时 ,pH值在 4 3～ 9 7范围内对蝌蚪 96h存活率没有明显影响 ;pH值对蝌蚪的 2 4 ,4 8,72和 96h的TLm 值分别为 10 33,10 18,10 0 8和 10 0 2。生产上中国林蛙蝌蚪生存的适宜 pH值为 6 0～ 9 0 ,适宜盐度为 1 0～ 2 0g·L-1。     

桓仁林蛙的繁殖习性(图版Ⅳ,中)

桓仁林蛙Rana huanrenensis Liu,Zhang ,& Liu,1993与我国已知各种林蛙在产卵环境和产卵方式上都有明显区别.一般林蛙于秋末冬初产卵于静水水域如稻田中,产出的卵多漂浮在水体表层.而桓仁林蛙于春末夏初产卵于山区小河中,河面较宽而开阔,水流较慢而平缓,水底多石块,产出的卵成片粘贴于水底大石表面.     

滇蛙和昭觉林蛙的形态差异及其潜在的适应意义

以比较解剖学的方法,观察和比较了采自1997年8月-2000年9月的滇蛙(♂16,♀14)和昭觉林蛙(♂17,♀17)标本的外部形态、肌肉和骨骼。结果显示,两种蛙的皮肤颜色不同;滇蛙的鳞骨比昭觉林蛙的发达;滇蛙雄性个体具声囊,而昭觉林蛙则无;滇蛙和昭觉林蛙的肱三头肌、股三头肌和胫部的肌肉有显著或极显著差异;昭觉林蛙的四肢骨骼较滇蛙的细长,腰带坐骨结节较突出,髋臼也较大;两种蛙头部扩大的骨骼不同;滇蛙腹直肌具腱划4条,昭觉林蛙5条。两种蛙的这些形态差异与其栖息的小生境及生活方式的差异相适应。     

昆嵛林蛙胚后发育的初步观察

昆嵛林蛙（Rana kunyuensis,Lu et Li2002）是新近在山东文登昆嵛山发现的蛙科（Ranidae）蛙属（Rana）林蛙群（Wlld-frogs）的一新种。我们在23.7-26.0℃的条件下,观察了其胚后发育全过程中的形态变化。该蛙胚后发育可划分为19期,历时约49d。唇齿式多为Ⅰ：1-1/Ⅲ、少数Ⅰ：1-1/Ⅱ：1-1,为昆嵛林蛙这一新种的确立提供了形态学依据。     

中国林蛙性腺的发育及温度对其性别分化的影响

为探讨幼蛙性别分化与温度的关系,在恒温和变温条件下培养中国林蛙（Rana chensinensis)受精卵至变态完成,结果表明：（1）胚胎发育到24期时生殖嵴开始出现,25期个别原始生殖细胞（PGCs)已迁移到生殖嵴中,生殖细胞与生殖嵴共同发育成生殖腺;（2）胚胎发育到31期生殖腺出现性别分化,卵巢分化初期较易识别,而精巢分化不明显;…（3）卵巢分化完成于37期,精巢分化完成于变态之后,两侧生殖腺等大;（4）胚胎发育从30期开始,性别分化对温度较为敏感,低温利于雌性化,高温利于雄性化;（5）15－25℃为变温培养时性比发生变化的敏感温度区,缓慢升温雄性比较显著增加,缓慢降温雌性比例显著增加。     

中国林蛙的分子系统关系

测定了 6种林蛙和用作外群的 2种侧褶蛙和 1种陆蛙的线粒体 12SrRNA基因序列 393bp。序列两两对位比较表明内外群间的位点替换率是 7 3%到 2 3 1% ,内群中物种间则为 0 0 %到 9 2 %。依据上述DNA序列 ,用距离法和最大简约法的系统发育分析表明 :①研究的 6种林蛙聚为一支 ,构成单系群 ,并有高的BPs值(90 %以上 )支持 ;② 6种林蛙可以分成 2个姐妹群 ,即中国林蛙、黑龙江林蛙和桓仁林蛙为一组 (BPs >94% ) ,峨眉林蛙、昭觉林蛙和镇海林蛙为一组 (BPs >5 0 % ) ;③昭觉林蛙与镇海林蛙有较近的亲缘关系 ;④中国林蛙的榆中种群与牡丹江种群间的遗传分化似乎达到了种级分化水平。     

野生和人工养殖辽宁中国林蛙肥满度和重/长指标的初步研究

对野生和养殖中国林蛙肥满度和重/长指标的研究表明,辽宁野生中国林蛙肥满度(K)在雌性中无年龄差异,在雄性则亚成年和成年蛙组间有显着差异;性别差异只在成年蛙组间出现。重/长指标(K_wl)均随年龄的增加而显着提高,且在不同年龄组间均有性别差异。1龄家养中国林蛙K无性别差异,K_wl有性别差异。养殖蛙K_wl显着高于同性同龄野生蛙,K无显着差异。K_wl比K更灵敏,二者结合对两栖类肥满度进行研究较合理。     

林蛙在中国的分布

作者收集有关我国林蛙分布的资料绘制了林蛙分布图,其中图1标明了主要分布于中国北方的中国林蛙种绀（Rana chensinensis species-group）和黑龙江林蛙种组（R．amurensis species-group）的分布,图2标明出了在亲缘关系上与日本林蛙很相近（R．jaonica）的分布于南方的长肢林蛙种组（R．longicrus species-group）的分布,图3重点标明了环渤海区域已知6种林蛙的分布。最后,作者提出环渤海区域是林蛙重要的分布中心,并对镇海林蛙（R．zhenhaiensis）和中国林蛙（R．chensinensis）的一些可疑或有争议的分布问题进行了简要讨论。