几种蛋白酶活力测定新方法

几种蛋白酶活力测定新方法陈安和（西南师范大学生化教研室,重庆６３０７１５）关键词蛋白酶活力测定近年来,蛋白酶特别是丝氨酸蛋白酶及其抑制剂已成为研究热点。众多研究表明,蛋白酶在许多重要的生命活动过程中发挥着十分重要的作用。蛋白酶参与蛋白质的水解、消化、...     

对吲哚乙酸氧化酶活性测定方法中某些步骤的改进

目前我校采用的植物生理学实验教材是张志良主编的《植物生理实验指导》（高等教育出版社,1990）。在实践中,我们对书中“实验63——吲哚乙酸氧化酶活性测定”方法中的某些步骤做了一些改动。是否得当,写出来请同行们指教。首先是关于标准曲线的绘制。在实验中我们发现,实验的“操作步骤3”所配制的两个体系的反应混合液中,无酶参与的那个体系IAA浓度始终为35urn·ml‘,因为其组成为：lml氯化锰十lml二氯酚十2mlIAA（原液浓度为175ug·ml卜十6ml磷酸缓冲液,总体积为10ml。显然在此体系中IAA浓度等于（175X2）／10—35（urn·ml卜…     

用葡萄糖酶电极法测定葡萄糖淀粉酶活性的研究

利用固定化葡萄糖氧化酶酶膜和过氧化氢电极组成酶电极测定葡萄糖淀粉酶的活性单位。用已知单位的葡萄淀粉酶作为测定标准定标后,在仪器上直接测出被测样品的葡萄糖淀粉酶活性单位,测定时间１４０ｓ,操作周期３ｍｉｎ,连续１０次测定ＣＶ值为０.６７％,５０～５００ｕ／ｍｌ的范围内线性良好,ｒ＝０.９９９９。     

考马斯亮蓝显色液组分对蛋白质测定的影响

考马斯亮蓝（CBB）显色法测定蛋白质含量的主要缺点之一是线性关系差．通过研究显色液组分对线性关系的影响,发现显色液H⁺浓度是影响线性关系的主要因素,并提出了一个新的显色液配方来改善考马斯亮蓝蛋白质测定法的线性关系．     

组织凝集素在人染色体上的基因定位

本文用非放射性DIG标记组织凝集素基因探针研究其在人染色体上的基因定 位,首先对基因原位杂交条件进行了一系列研究。结果表明采用染色体温和变性、基因 片段探针等为较好的基因原位杂交条件,通过135个细胞中期相的分析结果显示, 杂交阳 性率为20%,本底为2.81,杂交点分布峰位于3q12-13。 Abstract:The localization of sarcolectin gene on human chromosome is studied.A modified system of in situ hybridization was developed.A specific signal was generated by employing a nonradioactive DIG-labelled gene fragment as a probe in combination with the hybridization buffer containing no dextran sulphate and softly denatured chromosomes.Using this system,unique sequence for sarcolectin as small as 0.65kb was detectable and observed at 3q12-13.Of 135 metaphases examined,27(20%) had at least one grain deposited on 3q12-13,and the backgrand was 2.81.     

免疫测定光敏核不育水稻中光敏色素I含量

光敏核不育水稻（农垦58S）是中国水稻研究中的一个重要发现,水稻杂交育种上有巨大潜力。研究表明：农垦58S的雄性不育性受光周期调控,光敏色素是育性转变过程中光周期反应的光受体。然而,鉴于高等植物中存在至少两种不同的光敏色素分子,并且它们同时存在水稻中,人们对调节农垦58S雄性不育过程的光敏色素分子种类及作用方式仍然不清楚。本文采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）,比较了不同光周期下农垦58S和对照品种农垦58叶片（光周期感受器官）中光敏色素（phyA）的含量。从农垦58S的二次技梗原基分化期开始,进行10天的光周期处理,一组为短日照（SD）,另一组为长日照（LD）。在第10个暗期结束前,于暗绿光下收获每株水稻的最上部两片新展叶,立即保存在液氮中。样品在研钵中磨成液氮粉,然后加入提取液（含50mmol/LTris-HCI和0．2mol／L巯基乙醇,pH8．5）匀浆。粗提液经0．5％聚乙烯亚胺（PEI）沉淀一,上清液供ELISA分析。以燕麦phyA的多克隆隆抗体、单克隆抗体分别作ELISA的一抗和检测抗体。供ELISA分析。以燕麦phyA的多克隆抗体、单克隆抗体分别作ELISA的一抗和检测抗体。采用ELISA可以专一性地检测水稻phyA(Table1)。几次独立的实验说明,光周期处理对phyA含量有较大的影响。要相同的光周期下,农垦58S的phyA在较长时间暗期中的合成速度明显比农垦58快,这证实了前人的推测,即农垦58S甲基化程度较低的phyA基因的表达可能比农垦59更活跃。许多研究指出,pohyA含量的高低必然影响有关的生理过程。两种基因型相同的大麦品种对光周期、远红光（FR）敏感性的不同反应正是phyA含量差异所致。因此,SD下叶片积累较多的phA可能是农垦58S花粉育性恢复所必需的。另外,在农垦58S育性转变敏感期内每天的光周期结束时（EOD）进行短暂（15分钟）的FR照射实验,以推测光敏色素(PhyB)在育性转变中的作用,因为EODFR反应由phyB介导。10次EODFR处理后,农垦58S的抽穗、开花期均比SD对照相应地推迟2天。这与穗、开花（LD效应）,其花粉败育、种了结实率却没有变化（图1）,说明开花与花粉育性的调控机制有所不同。从上述结果我们认为,可能是phyA,而不是pohyB参与光周期诱导的农垦58s花粉育性转变过程,并且phyA可能通过其含量的变化起调节作用;phyB与水稻的抽穗、开花等现象有关。农垦58S可能通过其含量的变化起调节作用;phyB与水稻的抽穗、开花等现象有关。农垦58s控制花粉正常发育的phyA信号传导链可能存在某些缺陷,从而导致对光周期的敏感性增加,SD下积累较多的phyA则可以弥补这些缺陷。     

厌氧消化消化残留液中游离氨基酸含量的测定

采用ＧＣ－９Ａ气相色谱仪进行三种不同原料厌氧消化残留液中游离氨基酸珠测定。实验结果表明,鸡粪厌氧消化残留液中游离氨基酸种类最多,且含量较其他两种残留液高,鸡粪残留液更适于再利用。     

用管碟法测定碱性蛋白酶活力

参照抗生素效价生物测定法,用管碟法测定碱性蛋白酶活力,可大大提高菌种筛选的工作效率。待测样品在２％酪蛋白平板上的水解圈直径被效正后,从标准曲线上可查得相应的酶活。管碟法测得的酶活与Ｆｏｌｉｎ法测得的酶活相差一般小于２０００ｕ／ｍｌ。管碟法测定酶活时,操作要求认真仔细,操作误差可使一样品的水解圈直径相差２．９ｍｍ,但一般误差在０．２～０．３ｍｍ,相应酶活误差小于１０００ｕ／ｍｌ。     

藤茶中香气组成的气相色谱测定

本文用GC和GC/MS系统测定了藤茶中的香气组成。鉴定出28种香气成分,占香精油总量的64％。藤茶中的香气主要成分为反-2-已烯醛、乙酸顺-3-己烯酯、三甲基吡嗪、苯乙醛、α-萜品醇、水杨酸甲酯、香叶醇、β-紫罗酮、顺-茉莉酮、雪松醇、6,10,14-三甲基-2-十五烷酮等。并考察了藤茶中键合态香气成分向游离态转化的潜力。     

根瘤菌新类群代表菌株的16SrDNA全序列测定及其系统发育地位

用双脱氧法测定了一个根瘤菌新类群代表菌株SH2672的16S rDNA全序列,将此全序列与根瘤菌各已知种及相关种的16S rDNA全序列进行了比较及聚类分析,得到系统发育树状图。在系统发育树状图中,菌株SH2672与百脉根中慢生根瘤菌(Mesorhizobium loti),华癸中慢生根瘤菌(M. huakuii)、天山中慢生根瘤菌(M. tianshanense)、地中海中慢生根瘤菌(M. mediterraneum)、鹰嘴豆中慢生根瘤菌(M. ciceri)共同构成一个分支,与各已知种的模式菌株16S rDNA相似性分别为:96.3％,96.4％,97.2％,95.1％,95.6％,均在95％以上,它们应归属于同一属。且分支内各种间DNA同源性低于70％,表明它们分别为不同的种,菌株SH2672代表着一个新的根瘤菌种。