多酶恒温扩增核酸试纸条法快速检测肺炎支原体方法的建立及应用

【背景】肺炎支原体是导致儿童和青少年呼吸道感染的重要病原体,长期以来由于其临床表现不特异而容易错过最佳治疗时期。【目的】结合多酶恒温扩增(multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA)技术和核酸试纸条建立一种快速检测肺炎支原体的方法。【方法】以肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征(community acquired respiratory distress syndrome, CARDS)毒素编码基因为靶基因设计引物和探针,对反应体系的温度、时间等进行优化,评估其敏感性,通过检测肺炎支原体和其余7种病原体分析其特异性,并对35份临床样本进行验证。【结果】MIRA核酸试纸条法在37℃条件下,15 min内便可完成对肺炎支原体的检测,最低检出限为10 copies/μL;除肺炎支原体外,其余7种病原体均不能扩增,特异性较好。以实时荧光PCR检测为标准,MIRA核酸试纸条法对35份临床样本检测后的诊断特异度为100.00%、灵敏度为96.15%、阴性预测值为90.00%、阳性预测值为100.00%。【结论】本研究建立了MIRA核酸试纸条法...     

基于双重芯片式数字PCR快速鉴定KPC型碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的方法

【背景】由于碳青霉烯类药物的泛用和滥用,致使肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐药株与日俱增,产碳青霉烯酶是肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药的主要原因。目前对肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐药株的检测方法存在费时费力、特异性差、灵敏度低等问题。【目的】建立一种能同时检测肺炎克雷伯菌和碳青霉烯酶基因bla_KPC的双重芯片式数字PCR方法。【方法】依据肺炎克雷伯菌的特有基因yhaI和碳青霉烯耐药基因bla_KPC保守序列设计特异性引物和探针,确定双重芯片式数字PCR同时对yhaI和bla_KPC两个基因核酸浓度绝对定量的检测范围、检出限和最佳实验体系,并进行方法特异性、灵敏度、重复性分析及临床菌株的检测。【结果】双重芯片式数字PCR检测灵敏度比双重实时荧光定量PCR提高了约1.5个数量级,在两基因同时检出的情况下,最低检出限分别为3.74 copies/μL (yhaI基因)和1.93 copies/μL (bla_KPC基因);优化后的双重芯片式数字PCR对参考菌株检测特异性的结果与双重实时荧光定量PCR结果一致;利用优化后的双重芯片式数字PCR方法共检测58株临床菌株,其中肺炎克雷伯菌43株,属肺炎克雷伯菌且含有bla_KPC基因的菌株13株,这与质谱及耐药谱检测结果一致。【结论】利用双重芯片式数字PCR技术建立了产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的绝对定量检测方法。该方法特异性强、灵敏度高、准确度好,可用于检测具有碳青霉烯酶基因bla_KPC的肺炎克雷伯菌的核酸检测和定量分析,也为产其他类型碳青霉烯酶的病原菌检测提供了新的技术参考。     

肺炎支原体肺炎患儿血清sB7-H3含量与细胞因子水平及病情严重程度的相关性研究

摘要 目的：研究肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP）患儿血清可溶性共刺激分子B7-H3（soluble co-stimulatory molecule B7-H3, sB7-H3）含量与细胞因子水平及病情严重程度的相关性。方法：收集2019年3月至2020年6月期间我院收治的MPP患儿共96例,根据患儿病情严重程度分为轻症MPP组和重症MPP组,另选取同期于我院体检中心体检的健康儿童50例作为对照组。收集所有受试者的一般资料、主要临床表现、临床指标及细胞因子水平,对各指标进行Pearson相关性分析和多元逐步回归分析。结果：与对照组相比,MPP组患儿的白细胞计数（white blood cell, WBC）、中性粒细胞计数（neutrophil, NE）、红细胞沉降率（erythrocyta sedimentation rate, ESR）、C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、sB7-H3、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF）、干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、白介素-10（interleukin-10,IL-10）和白介素-17A（interleukin-17A,IL-17A）均较高（P＜0.05）;与轻症MPP组患儿相比,重症MPP组患儿的WBC、NE、ESR、CRP、sB7-H3、GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A均较高（P＜0.05）。Pearson相关性分析结果表明,sB7-H3与WBC、NE、ESR、CRP、GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A呈正相关（P＜0.05）。多元线性回归分析显示,GM-CSF（β=0.103,P＜0.001）、IFN-γ（β=0.121,P＜0.001）、IL-10（β=0.026,P＜0.001）和IL-17A（β=0.093,P＜0.001）是sB7-H3的独立影响因素。结论：MPP患儿血清sB7-H3、GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A与MPP的病情严重程度密切相关,且sB7-H3的表达水平与GM-CSF、IFN-γ、IL-10和IL-17A的水平呈正相关。     

肺力咳合剂辅助布地奈德和复方异丙托溴铵对支气管哮喘患儿肺功能、炎症介质和免疫功能的影响

摘要 目的：探讨肺力咳合剂辅助布地奈德和复方异丙托溴铵对支气管哮喘患儿肺功能、炎症介质和免疫功能的影响。方法：选择2021年2月~2022年3月期间我院小儿内科接收的76例支气管哮喘患儿。根据信封抽签法将患儿分为对照组（n=38,布地奈德和复方异丙托溴铵治疗）和研究组（n=38,肺力咳合剂辅助布地奈德和复方异丙托溴铵治疗）。对比两组患儿疗效、肺功能、炎症介质和免疫功能,同时记录两组治疗期间的用药安全性状况。结果：研究组的临床总有效率较对照组明显升高（P<0.05）。治疗2周后,研究组第1秒用力呼气容积（FEV₁）、用力呼气流量（PEF）、用力肺活量（FVC）高于对照组同期（P<0.05）。治疗2周后,研究组白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）低于对照组,干扰素-γ（IFN-γ）高于对照组（P<0.05）。治疗2周后,研究组CD8⁺低于对照组,CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺较对照组高（P<0.05）。不良反应发生率组间对比无差异（P>0.05）。结论：肺力咳合剂辅助布地奈德和复方异丙托溴铵治疗支气管哮喘患儿,可有效改善患儿的肺功能和免疫功能,降低炎症介质水平,疗效可靠。     

血清SAA、YKL-40及SP-A的联合检测对小儿难治性肺炎支原体肺炎的预测价值分析

摘要 目的：探究血清淀粉样蛋白A（SAA）、几丁质酶样蛋白YKL-40和肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）表达水平对的联合检测对小儿难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）的预测价值。方法：纳入2019年11月至2021年12月期间我院收治的60例MPP患儿作为研究对象,依据病情最终转归将其分为RMPP组和普通肺炎支原体肺炎（GMPP）组,另纳入同期于我院行体格检查的60例健康儿童作为对照组。收集所有受试儿童的临床资料、实验室指标及影像学结果,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清SAA、YKL-40和SP-A的表达水平,应用受试者工作特征曲线（ROC）判定各指标单项检测和联合检测的预测效能。结果：MPP组患儿和对照组儿童一般资料相比无统计学差异（P＞0.05）。依据病情最终转归,60例MPP患儿中共有23例（38.33 %）进展为RMPP,RMPP组与GMPP组患儿在白介素-6（IL-6）、C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、D-二聚体（D-D）等实验室指标以及肺不张、胸腔积液等影像学特征方面相比有统计学差异（P＜0.05）。RMPP组和GMPP组血清SAA、YKL-40和SP-A的表达水平显著高于对照组（P＜0.05）,同时RMPP组血清SAA、YKL-40和SP-A的表达水平显著高于GMPP组（P＜0.05）。血清SAA的最佳截断值为39.75 mg/L,预测RMPP发生的ROC曲线下面积为0.894（95%CI：0.861-0.925）,敏感度为78.26 %,特异度为86.67 %;血清YKL-40的最佳截断值为31.85 ng/mL,预测RMPP发生的ROC曲线下面积为0.754（95%CI：0.634-0.873）,敏感度为73.91 %,特异度为67.21 %;血清SP-A的最佳截断值为35.59 ng/mL,预测RMPP发生的ROC曲线下面积为0.761（95%CI：0.640-0.891）,敏感度为73.91 %,特异度为75.00 %;SAA+YKL-40-1+SP-A三者联合检测预测RMPP的AUC为0.914（95%CI：0.871-0.957）,敏感度为91.30 %,特异度为91.66 %。结论：血清SAA、YKL-40和SP-A表达水平的检测可作为预测RMPP发生的重要生物学指标,且三者联合检测的预测效能较高,可为临床尽早诊断RMPP、尽早干预、改善患儿预后提供一定的帮助。     

皮下免疫治疗联合沙美特罗替卡松粉吸入剂对中度支气管哮喘缓解期患儿血清Th1/Th2相关细胞因子表达水平的影响

摘要 目的：探讨皮下免疫治疗联合应用沙美特罗替卡松粉吸入剂治疗中度支气管哮喘缓解期患儿的临床疗效及对Th1/Th2相关细胞因子表达水平的影响。方法：选取南方医科大学佛山市妇幼保健院2020年1月～2020年12月收治的中度支气管哮喘缓解期120例患儿,按随机分组原则分为观察组和对照组各60例。对照组予以沙美特罗替卡松粉吸入剂（舒利迭）治疗,早上及晚上各吸1次。观察组在对照组的基础上给予皮下免疫治疗,进行12个月疗程的治疗。对比两组患儿支气管哮喘发作次数以及临床控制率、肺功能变化。检测两组患儿血清Th1相关细胞因子[白细胞介素-2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）]和Th2相关细胞因子[白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）]水平。结果：与治疗前相比,两组患儿治疗6月及治疗12个月后发作次数均显著降低（P＜0.05）,且观察组患儿哮喘发作的次数低于对照组（P＜0.01）;治疗12个月后,观察组患儿的临床控制率显示为90%,显著高于对照组的66.67％（P＜0.05）。治疗6个月后、治疗12个月后,观察组患儿的第1 秒呼气流速（FEV₁）占正常预计值百分比（FEV₁%）及呼气峰流速（PEF）占正常预计值百分比（PEF%）均显著高于对照组（P＜0.01）;而与治疗6个月后相比,两组治疗12个月后上述2项指标均显著升高,且观察组明显高于对照组（P＜0.01）。治疗12个月后,两组患儿血清IL-2、IFN-γ水平均显著升高,且观察组明显高于对照组（P＜0.01）;而两组血清IL-4、IL-6水平均显著下降,且观察组明显低于对照组（P＜0.01）。结论：皮下免疫治疗联合沙美特罗替卡松粉（舒利迭）治疗中度支气管哮喘缓解期患儿的临床疗效确切,患儿支气管哮喘发作次数明显减少,肺功能改善明显,其作用机制可能与调节Th1/Th2相关细胞因子平衡有关。     

血清PGRN、SFRP1、CCL26与支气管哮喘急性发作期患者肺功能和气道炎症的相关性研究

摘要 目的：探讨支气管哮喘（BA）急性发作期患者血清颗粒蛋白前体（PGRN）、分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1）、C-C基序趋化因子配体26（CCL26）与肺功能和气道炎症的相关性。方法：选取2021年1月～2022年6月我院收治的118例BA急性发作期患者作为急性发作期组,根据病情分级将BA急性发作期患者分为轻度亚组55例、中度亚组43例、重度亚组20例,另选取同期77例BA临床控制期患者（临床控制期组）和60例体检健康志愿者（对照组）分别作为对照。采用Pearson相关性分析BA急性发作期患者血清PGRN、SFRP1、CCL26水平与肺功能和气道炎症指标的相关性。结果：对照组、临床控制期组、急性发作期组血清PGRN水平和第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV₁%pred）、峰值呼气流速（PEF）依次降低,SFRP1、CCL26水平和呼出气一氧化氮（FeNO）、外周血嗜酸性粒细胞（EOS）计数依次升高（P＜0.05）。轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清PGRN水平和FEV₁%pred、PEF依次降低,SFRP1、CCL26水平和FeNO、外周血EOS计数依次升高（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,BA急性发作期患者血清PGRN水平与FEV₁%pred、PEF呈正相关,与FeNO、外周血EOS计数呈负相关（P＜0.05）,SFRP1、CCL26与FEV₁%pred、PEF呈负相关,与FeNO、外周血EOS计数呈正相关（P＜0.05）。结论：BA急性发作期患者血清PGRN水平降低,SFRP1、CCL26水平升高,与病情严重程度、肺功能和气道炎症有关,可能成为BA急性发作期患者新的治疗靶点。     

成人革兰阴性杆菌肺炎23例临床分析

本文以临床体征,胸片和连续二次以上细菌培养阳性为诊断标准,报告革兰阴性杆菌肺炎２３例,并就其临床表现,并发症及预后进行分析,提出８种情况应考虑革兰阴性杆菌肺炎,对临床诊断和治疗有指导意义．     

呼吸道感染肺炎克雷伯氏菌的质粒图谱分析

从临床住院病人痰及咽拭标本中分离出肺炎克雷伯氏菌９８株,占培养菌１０．６％。对该菌抽样做质粒图谱分析显示,患者主要为携带有三种即３２．７×１０６ｄａｌ、１×１０６ｄａｌ、０．５×１０６ｄａｌ质粒的肺炎克雷伯氏菌引起的。此方法简便,快速可靠,对进行病源菌流行病学调查有一定参考及实用价值。     

艾滋病合并隐球菌感染17例尸检材料的临床病理学研究

在１５１例艾滋病尸检材料中发现１７例合并隐球菌感染,均经病理学确诊,患者男１５名,女２名,平均４３．６岁。１２例发生脑膜炎、肺炎和淋巴结炎各７例,尚见脾（６例）、肾（５例）等器官受累。９例为播散性感染。病变为慢性肉牙肿性,其中见有隐球菌。本文描述隐球菌性脑膜炎、肺炎等临床病理学表现,并讨论其病变特征与病理诊断问题。