突触中磷蛋白的生后发育变化

为了研究在突触功能中起重要作用的磷蛋白状况,利用高分辩率的放射自显影、梯度电泳和双向电泳,以及抗ＣａＮ多克隆抗体封闭ＣａＮ磷酸酶活力等技术,并运用计算机图象处理系统,对大鼠大脑皮层突触体中磷蛋白生后发育变化进行定量分析．结果表明,大鼠出生后（ＰＮＤ）３ｄ、７ｄ、２１ｄ、和成年磷蛋白表达有很大不同,在出生后早期对应突触主要形成时期,磷蛋白呈高表达;从ＰＮＤ２１ｄ开始至成年,底物蛋白磷酸化状态逐渐降低,同时研究了突触主要形成时期有显著变化的钙调神经磷酸酶,它的内源底物及其在其生后发育所发生的变化．     

白色念珠菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶三维结构分子模型研究

基于四种原核细胞色素Ｐ４５０晶体蛋白Ｐ４５０ＢＭ３、Ｐ４５０ｃａｍ、Ｐ４５０ｔｅｒｐ、Ｐ４５０ｅｒｙＦ模建白色念珠菌羊毛甾醇１４α－去甲基化酶三维结构。序列匹配采用四种晶体结构比较结果基础之上提出的细胞色素Ｐ４５０超家族蛋白基于结构知识的序列匹配方法。以Ｐ４５０ＢＭ３晶体结构坐标模建目标蛋白结构保守区主链结构,结构保守区侧链构象来源于四种晶体蛋白与模建蛋白对应残基同源性得分最高残基构象。模建结果用分子力学和分子动力学进行结构优化,模建结果蛋白采用Ｐｒｏｆｉｌｅ－３Ｄ图、Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ图和疏水图分析确证结构的合理性。并根据模型推测与血红素辅基相互作用的残基、与氧化还原偶联蛋白作用和参与电子传递的残基、底物进出通道和活性位点的残基。这些研究结果为定点突变研究、抗多肽抗体结合实验等提供理论依据,为高效低毒抗真菌药物合理设计提供靶标。     

黄酮6位羟基化酶催化机制的理论研究与应用

灯盏乙素发酵生产过程中,黄酮6位羟基化酶催化效率不足,导致产生至少约18%的副产物。本研究以2种黄酮6位羟基化酶CYP82D4与CYP706X为研究目标,通过分子动力学模拟与量子化学计算,对两种黄酮6位羟基化酶的催化机制进行解析。结果表明,CYP82D4与CYP706X在反应决速步的能垒几乎相同,应当具有相似的反应速率,而CYP82D4相对较小的底物结合能可能有利于产物释放,是其具有更高催化效率的直接原因。最后,基于对底物进出过程的研究,CYP82D4的L540A突变将催化效率提高了1.37倍,证明了理论计算指导黄酮6位羟基化酶改造优化的可行性。本研究揭示了黄酮6位羟化酶的催化机制,为对其进行改造优化以提高灯盏乙素的发酵生产效率提供了参考。     

L-酪氨酸对大鼠黄体细胞3p-羟-甾体脱氢酶活性的影响

目的：研究L-酪氨酸对离体培养大鼠黄体细胞3β-HSD活性的影响。方法：运用细胞培养技术和放射免疫分析法,观察不同剂量L-酪氨酸对大鼠黄体细胞3β-HSD活性的影响和L-酪氨酸及其类似物酪氨酰肼在拮抗hCG诱导孕酮生成作用中,3β-HSD活性的变化。结果：①0．2mmol^-1和2．0mmol^-1的L酪氨酸明显抑制3β-HSD的活性,相同浓度的L-苯丙氨酸及L-广多巴胺对此酶活性无影响;②在底物浓度较低时,L-酪氨酸可显著增强3β-HSD活性,随着底物浓度的增加,L-酪氨酸的作用逐渐减弱并转为抑制作用。③L-酪氨酸及酪氨酰胼对hCG诱导的3β-HSD活性有明显的抑制作用。结论：L-酪氨酸可明显影响大鼠黄体细胞3β-HSD活性,其作用性质与底物浓度密切相关。L-酪氨酸及酪氯酰肼抑制hCG诱导的3β-HSD活性。     

温度和底物对大豆液泡膜H~+-ATPase二级结构的影响

利用圆二色性光谱,检测了纯化的大豆液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ在不同条件下蛋白二级结构的变化。液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的圆二色光谱对温度敏感,２５℃、３７℃分别保温１０分钟２０分钟,２０８ｎｍ和２２２ｎｍ双负峰变小,酶蛋白α－螺旋含量减少,与２５℃相比较,３７℃保温时酶蛋白构象的变化更为剧烈、迅速。不同磷酸数目的腺苷酸处理,液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的α－螺旋含量均降低,降低程度为ＡＤＰ＞ＡＭＰ＞     

可渗透管网络非定常跨壁传输问题的解耦算法

提出了可渗透管网络非定常跨壁传输问题的解耦算法,这是一种有限元法与初值问题Ｃａｕｃｈｙ方法相结合的半解析算法。在一维管流的假设下,通过引入插值函数,得到用管外变量表示的管内变量的解析解,使最终导出的有限元方程中只包管外变量,从而减少了联立方程的数目,大大节省了计算时间,本方法特别适用于大型网络的数值计算。     

黑曲霉木聚糖酶的底物特异性和低聚木糖生产

对黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）木聚糖酶进行了纯化研究,结果表明,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０分离后,获得三个组分,称为Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３。它们经ＰＡＧＥ电泳分析均为单一组分。对Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３的相关性质,特别是底物特异性也作了研究,纯酶Ｘ３组分或部分纯化的酶可用于生产低聚木糖,产品得率为１０％。     

突变型环酰亚胺水解酶的底物专一性

摘要 目的：研究环酰亚胺水解酶（CIH293）C-末端区残基对其底物专一性的影响。方法：通过缺失或替代获得了环酰亚胺水解酶C-末端剔除2个或3个氨基酸残基及C-末端两个Lys替代为两个Glu的突变型酶CIH291、CIH290以及KK292,293EE,用比色法与高效液相色谱法分析了重组野生型酶与突变型酶的底物专一性和动力学参数。结果：突变型酶与野生型酶相比,底物专一性未发生显著改变,最适底物仍为琥珀酰亚胺,然突变型酶对最适底物的亲和力略有降低,导致反应速度减小。结论：环酰亚胺水解酶（CIH293）C-末端区残基的改变对其底物专一性的影响不大,但影响了酶对底物的亲和力。