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利用COS7细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术,构建了原EP0-cDNA表达载体pCSV-EP0(1).其转译起始序列为5’AATTCATGG3’.同时通过定点突变技术,将起始序列改变成5’CCACCATGG3’,而构建了另一表达载体pCSv—EPO(2)。后者经序列分析证明无误后和前者均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞,用ELlSA法定量洲量EP0表达水平.转染后48小时及72小时收集含pCSV—EP0(1)的COS7细胞上清.测定结果为1580pg/mI及954pg/mI,而含pCSV—EPO(2)的上清则为25 300pg/m1和17 450pg/ml。这表明经优化起始序列的基因表达远高于未经优化的。 相似文献
24.
根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植株的再生 总被引:37,自引:0,他引:37
用根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜(Brassi-ca napusL.)主要栽培品种“云北2 号”,获得转基因植株。所用外植体为带有1—2 m m 子叶柄的完整子叶,根癌农杆菌为A208SE(pTiT37-SE, pROA93)。Ti质粒pROA93 带有NPTⅡ及GUS嵌合基因。共培养2 天后转到附加25 m g/L卡那霉素的分化培养基(MS+ 4.5 m g/LBAP)上。AgNO3 和羧苄青霉素促进芽的分化,头孢霉素则有抑制作用。最高转化频率为27% 。把分化出的茎芽切下,插入含有25 m g/L卡那霉素的生根培养基中。羧苄青霉素不利于根的形成。把完整抗性植株移入盛土壤的盆中,生长状况良好。测定β-葡糖苷酸酶活性,84% 明显高于对照。以NPTⅡ基因作探针进行Southern blot分析,证实外源基因已插入到植物细胞基因组中 相似文献
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双价外壳蛋白基因植物表达载体的构建及马铃薯转基因植株的鉴定 总被引:10,自引:0,他引:10
在克隆了马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y 病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的外壳蛋白基因的基础上,构建同时包含PVX和PVY 与PVY 和PLRV 两个外壳蛋白基因植物表达框架的表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草(Nicotianatabacum )和生产上常用的几个马铃薯(Solanum tuberosum )优良品种:“Favorita”、“虎头”、“克4”。经PCR检测证明外源基因已整合到植物的染色体上,得到批量转基因植株。在转PVX+PVY 外壳蛋白基因的烟草上接种PVX (5 μg/m L)、PVY(20 μg/m L)病毒,得到有一定抗性的植株 相似文献
26.
沈月雷 《国外医学:分子生物学分册》1994,16(6):249-253
本以乙型肝炎病毒,人免疫缺陷病毒和脊髓灰质炎病毒为例着重论述了转基因小鼠在病毒学研究中的应用,综述了近几年来以转基因小鼠为工具的病毒学研究成果。 相似文献
27.
转基因微生物生态学及大田释放风险评价研究 总被引:15,自引:4,他引:11
向环境中释放转基因微生物可能会带来一系列的安全问题.在大面积释放之前必须对转基因微生物在环境中发生基因转移的潜力、存活能力、扩散能力及对生态系统的潜在影响等进行生态学研究和风险评价,同时还要探索有效的检测方法和风险评价策略.该研究有助于分子生态学的发展和生物技术的安全应用,具有重要的理论和实践意义. 相似文献
28.
植物基因转移及其应用前景 总被引:5,自引:0,他引:5
植物基因转移及其应用前景刘金元(山东省农科院原子能应用研究所,济南)自从1974年Vanlarebeket[12]等人在根癌农杆菌中发现一种与双子叶植物肿瘤诱导有关的质粒,随后Chilton[7]等人又从分子水平证实了该质粒中的一个DNA片段(T-D... 相似文献
29.
精子作载体的转基因鱼研究 总被引:6,自引:0,他引:6
本文报道了以精子为载体将美洲拟蝶抗冻蛋白基因导入罗非鱼卵,构建转基因鱼的方法,此法简单易行。斑点杂文和SouthernBlot杂交结果表明,外源基因的整合率为18.1%,与其它方法构建转基因鱼的外源基因整合率相近。 相似文献
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