抗组织纤维化多肽药物研究进展

组织纤维化是一种慢性疾病,多发于肝、肺、心脏、肾脏等部位,全球有 1/3 的人死于组织纤维化以及由其产生的器官衰竭。当组 织受到损伤后,损伤部位发生一系列细胞反应,最终导致细胞外基质过度沉积,发生组织纤维化。纤维化治疗的策略和药物开发围绕着抑 制纤维化过程中关键细胞通路和蛋白的分泌而展开。在药物开发过程中,多肽药物因其高效性、毒副作用低,可以根据治疗目的进行针对 性设计,成为研究人员进行抗纤维化药物开发的良好选择,现已有部分药物进入临床研究。综述抗纤维化治疗中的多肽药物及其治疗的机制, 为其他相关药物开发提供思路。     

模拟α-螺旋多肽类似物抑制剂设计的研究进展

抑制剂筛选主要是通过反复、高通量地筛选化合物库,这个过程存在着对已有化合物库的依赖性和一定的机遇性。通过分析蛋白质数据库(PDB)发现,大多数蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)界面以α-螺旋结构为主体。α-螺旋多肽的骨架结构及其热点氨基酸残基(hotspots)为高效理性设计小分子抑制剂提供了模板。对近几年来依据多肽类似物和小分子化合物模拟α-螺旋结构设计抑制剂的研究进展进行了概述,同时对依据模拟α-螺旋设计抑制剂骨架的结构原理进行了讨论。     

人绒毛膜促性腺激素β亚基和补体C3d片段组成的单链多肽的生物合成

In view of the strong immunity-enhancing function of HEL-C3d3 designed by Dr. Paul W. Dempsey, we made our efforts to produce a similar recombinant protein of hCG beta. With polymerase chain reaction, we introduced a Bam HI restriction site into the 3' terminal of hCG beta cDNA. The new cDNA and its terminal's correctness has been confirmed by sequencing. Then we have it covalently attached to the C3d3 cDNA at the pre-designed Bam HI/Bgl II site. Having the chimeric DNA correctly cloned into the protein nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) expression vector pVL1393, we constructed the expression vector pVL1393-(hCG beta-C3d3). The insect cells were co-transfected with the expression vector and linearized nuclear polyhedrosis virus DNA, and recombinant viruses AcNPV-(hCG beta-C3d3) were screened out. Through anti-hCG beta immunoaffnity chromatography, the recombinant hCG beta-C3d3 chimera polypeptide was purified from culture supernatant of insect cells infected by the recombinant viruses. In RIA test, the expressed product competitively inhibits the binding of 125I-hCG beta to hCG beta-antibody. On SDS-PAGE and Western blot, the recombinant peptide hCG beta-C3d3 obviously appears to be with a molecular weight of 116KD. Therefore, we arrive at a conclusion that it has a normal immunogenic ability.     

蛋白质和多肽分离分析技术的新进展

本文介绍了蛋白质和多肽分离分析的一些最新进展。对氨基酸分析中水解及衍生化这二个步骤由手工发展到自动化进行了简要的阐述.关于HPLC则主要侧重于微柱分析和制备分离,这是与生物工程有关的二个重要技术。本文还用几个例子说明了毛细管电泳的高分辨力。并对蛋白质顺序分析技术进行了概括与评价。     

激素和活性多肽

<正> 854997 编码人胰岛素原的 DNA 合成[英]/Ovchinnikov,Y.A.…//Gene.-1984,31(1～3).-65～78[译自 DBA,1985,4(4),85-01704]使用化学-酶方法合成271bp 和286bp 的双链 DNA,每个 DNA 含有为胰岛素原编码     

系列甾体药物关键中间体转化菌种构建及智能化生产应用

甾体激素药物是仅次于抗生素的第二大类药物,当前甾体工业的初始原料已经由从黄姜等植物中提取的薯蓣皂素转向植物甾醇。作为食用油工业的副产物,植物甾醇来源广泛,价格低廉,经微生物转化后可生成雄烯二酮(androstenedione, AD)、雄二烯二酮(androstadiendione, ADD)、9α-羟基-雄烯二酮(9α-hydroxy-androstenedione, 9α-OH-AD)等一系列化合物,这些关键中间体可用于甾体药物合成。甾体代谢途径长、副产物多、调控复杂,传统的微生物筛选、诱变育种方法和油水两相转化体系已经不适于当前的工业生产需求。文中以笔者团队与浙江仙居君业药业有限公司联合开发的新一代甾体药物关键中间体的转化菌株构建和智能化生产为例,综述甾体药物中间体菌种改造和转化工艺开发及其在产业化应用中的进展。未来,随着合成生物学技术的发展,有望开发出更适于甾体药物合成的新一代中间体;乃至以葡萄糖等为原料,使用微生物直接合成甾体原料药。这些生物技术(biotechnology, BT)创建的新一代菌株在基于信息化、智能化技术(intelligent technology, IT)建设的现代工厂中的应用,将会形成更高效、更绿色的生产方式,并产生显著的社会效益和经济价值。     

草菇子实体多肽的分离纯化及其结构分析

采用碱性蛋白酶酶解提取草菇子实体多肽,透析法对其进行分离纯化得到3-10、1–3及1 kDa以下3种多肽组分,比较3种组分的体外抗氧化活性。用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)、紫外吸收光谱、傅里叶红外光谱和氨基酸的测定方法表征纯化后多肽结构。结果表明,1–3kDa组分的抗氧化活性最强,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率达到99.81%,铁离子自由基还原能力为1.47, 2,2′-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid), ABTS+]自由基和羟自由基的清除能力分别达到99.15%、99.34%。此分子量的草菇抗氧化肽的总蛋白含量为71.12%,灰分含量为12.75%,水分含量为8.44%,其他为7.69%。经鉴定表明草菇子实体多肽是一种优质蛋白质。     

乳房链球菌GapC蛋白的表达及其B细胞抗原表位的预测与鉴定

乳房链球菌Streptococcus uberis的GapC蛋白是一种位于该菌表面的具有甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性的蛋白,其参与细胞活动,表现出多种生物学活性,此外还具有良好的抗原性。文中旨在对乳房链球菌GapC蛋白可能的B细胞抗原表位进行预测,分析和验证候选表位肽的免疫原性。利用S. uberis分离株RF5-1克隆gapC基因,构建重组表达质粒pET-28a-GapC,诱导表达GapC重组蛋白,并以纯化蛋白免疫家兔,获得抗GapC多抗。利用生物信息学软件预测并分析GapCB细胞抗原表位的三维结构和空间位置及对GapC蛋白及表位的同源性比较。结果表明,表达纯化了44kDa的GapC蛋白具有良好的反应性。利用表位预测软件筛选并合成针对S.uberisGapC蛋白的6个线性和3个构象优势B细胞表位多肽,三维结构的分析显示,筛选的多肽具有良好的抗原表位形成条件。以纯化的S.uberis GapC蛋白免疫家兔制备多抗,通过间接ELISA对抗原表位进行鉴定。ELISA检测结果显示,9条抗原表位肽均可不同程度地与抗GapC多抗反应,其中表位266AANDSYGYTEDPIVSSD282与多抗反应...     

猪塞内卡病毒A型间接ELISA抗体检测方法的建立

为了建立一种基于固相合成多肽技术的猪塞内卡病毒A型抗体血清学检测方法。本研究对猪塞内卡病毒A型VP1、VP2和VP3三种重要结构蛋白的B细胞表位进行设计并筛选到SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605共四条表位多肽,进而建立了一种用于检测猪塞内卡病毒A型抗体的间接ELISA方法,并验证该方法的检测敏感性、特异性、重复性以及与血清中和试验的符合率。试验结果显示,建立的间接ELISA方法对6份感染血清的最高稀释倍数为1:640,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.4%～6.5%和4.4%～10.3%。与血清中和试验比较,符合率为97.7%。结果显示采用SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605建立的间接ELISA方法的敏感性较高,且重复性较好,可用于临床血清中猪塞内卡病毒A型特异性抗体的检测。     

双序列比对基础和应用实例

首先介绍序列比对的分子生物学基础,即核酸序列基本单元核苷酸和蛋白质序列基本单元氨基酸。文中以精心设计的图表列出四种核苷酸和二十种氨基酸的名称、性质和分类。第2节简述序列比对基础,包括相似性和同源性基本概念、整体比对和局部比对、点阵图方法、动态规划和启发式算法、计分矩阵和空位罚分,以及常用软件和分析平台。第3节介绍核酸序列比对中常用计分矩阵DNAfull,蛋白质序列比对中常用计分矩阵BLOSUM62和PAM250。第4-8节则以血红蛋白、多肽毒素、植物转录因子、癌胚抗原和唾液酸酶为例,介绍双序列比对的具体应用。通过这些实例,说明如何选择分析平台和比对程序、如何设置计分矩阵和空位罚分,如何分析比对结果及其生物学意义。文末进行简要总结。