PHProteomicDB： A Module for Two-dimensional Gel Electrophoresis Database Creation on Personal Web Sites

PHProteomicDB is a PHP-written module to help researchers in proteomics to share two-dimenslonal gel electrophoresis data using personal web sites. No technical or PHP knowledge is necessary except a few basics about web site management. PHProteomicDB has a user-friendly administration interface to enter and update data. It creates web pages on the fly displaying gel characteristics, gel pictures, and numbered gel spots with their related identifications pointing to their reference pages in protein databanks. The module is freely available at http：//www.huvec.com/index.php3？rub=Download.     

重组Hepcidin融合蛋白的氧化复性及活性鉴定

将诱导表达的His-hepcidin融合蛋白包涵体通过固定化金属离子配体亲和层析(IMAC)柱分离纯化后,在cys-teine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,稀释复性后用肠激酶将融合蛋白的his-tag切除。酶切后所得的Hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌具有抗菌活性。     

蛋白质复合体非变性凝胶电泳技术及其应用新进展

非变性凝胶电泳技术是研究蛋白质复合体的强有力工具。重点介绍了蓝绿温和非变性凝胶电泳(BN-PAGE)技术的原理和特点,比较了由BN-PAGE衍生的蓝色温和琼脂糖凝胶电泳、清澈温和非变性凝胶电泳(CN-PAGE)和高分辨清澈温和非变性凝胶电泳(HrCN-PAGE)技术的差异和适用范围,并概括地介绍了这些技术在植物蛋白质复合体研究中应用的新进展。     

雅氏瓦螨对氟胺氰菊酯的抗性机理初探

用有效成分为1000μg/L的氟胺氰菊酯药液对雅氏瓦螨Varroa jacobsoniOudemans敏感个体的腹部表皮进行穿透性测定,结果表明药液无法通过表皮起毒杀作用。通过添加酶抑制剂多功能氧化酶(PBO)和酯酶(DEF)的增效测定,结果显示PBO在抗性和敏感螨中分别增加毒效为3.27和1.80倍;而DEF为3.23和1.67倍。反映在抗性蜂螨的抗药性与多功能氧化酶的活性有密切相关,也与酯酶活性有关。对抗性螨和敏感螨的羧酸酯酶的活力测定,显示出在抗性螨中酶活指数高140%以上。同时对酯酶电泳进行扫描,也发现抗性螨与敏感螨的峰值存在差异。     

不同细菌对家蝇幼虫抗菌蛋白/肽的诱导效应

利用抑菌圈测量法和毛细管电泳研究、比较不同细菌对家蝇Musca domesticaL.幼虫抗菌蛋白/肽的诱导效应。结果表明,家蝇幼虫受细菌诱导后抗菌活性比对照都有不同程度的增加,同时不同细菌诱导表达样品对于相应的诱导菌均表现很高的抗菌活性。毛细管电泳图谱表明鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium50013诱导后抗菌蛋白/肽表达强度增加了50倍,其它细菌诱导后抗菌蛋白/肽表达强度增加了1～40倍。与G+细菌相比,G-细菌具有更强的诱导效应。结论:家蝇幼虫对不同的细菌刺激有特异性反应,即不同细菌诱导抗菌蛋白/肽的强度、种类和数量都不一致。     

水稻无侧根突变体生理生化变化的研究

对水稻无侧根突变体RM109,原品种大力及杂交后代F1三者的部分生理指标进行了比较。包括抗氧化酶(SOD、POD、CAT)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性及叶绿素、丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)等的含量,以及可溶性蛋白质的电泳分析。结果表明:RM109超氧化物歧化酶(SOD)活性为大力的50%,F1为大力的72%;RM109过氧化物酶(POD)活性比大力高125%,F1的比大力低3%;RM109过氧化氢酶(CAT)活性为大力的56%,F1为大力的11%;RM109琥珀酸脱氢酶活性为大力的60%,差异都极显著。揭示了基因突变后引发的生理生化的变化,从中探讨突变机理。     

sFGFR1Ⅲc的原核表达及其抑制NIH3T3增殖的作用

目的:克隆sFGFR1Ⅲc胞外段进行原核表达和纯化。方法:将sFGFR1Ⅲc胞外段基因转入pET3c载体后转化BL21工程菌,以包涵体形式表达胞外段。经凝胶层析法复性(复性率为20%)和肝素亲和层析纯化后得到纯度95%以上的目的蛋白。通过电泳鉴定其纯度以及MTT法检测其生物学活性。结果:成功获得大小为660bp的人sFGFR1Ⅲc基因片段,转化菌诱导表达了24kDa的sFGFR1Ⅲc胞外段并通过MTT证实它对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的增殖具有明显的抑制作用,其抑制FGF2引起的细胞增殖呈剂量依赖性,其中作用最为明显的是80ng/ml。结论:成功获得了高纯度的sFGFR1Ⅲc胞外段,该胞外段具备较好的生物学活性,为下一步的研究工作奠定了良好的物质基础。     

重组L-天冬氨酸-β-脱羧酶融合蛋白复性条件的研究

以本实验室构建保存的天冬氨酸脱羧酶工程菌为研究材料,通过基因表达,对所得到的重组胞内融合表达型天冬氨酸脱羧酶蛋白进行体外复性研究,考察温度、复性液的pH、复性时间、复性液种类等因素对重组天冬氨酸脱羧酶体外复性的影响。结果表明:最佳复性液为pH8.7的Tris-HCl缓冲液,在保温时间2h,温度40℃下,复性效果最好。另外一些pH能达到8.7的缓冲液复性效果都不如Tris-HCl缓冲液。     

转录因子Ets-1与β1,3 N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析

β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8（β3GnT-2, β3GnT-8）共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖(［Galβ1→4GlcNAcβ1→3］n)的合成,从而使得细胞表面的相应糖链结 构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株 HL-60分化过程中β3GnT-2,-8的表达上调,但其分子机制不明.本文旨在探讨ATRA诱导 HL-60分化过程中,转录因子Ets-1对β3GnT-2,-8表达调控的分子机制.采用10-6 mol/L ATRA 诱导人白血病细胞株HL-60向粒系分化,RT-PCR检测到细胞中Ets-1的表达 明显增加;进一步采用染色质免疫沉淀（ChIP）结合电泳迁移率变动实验（EMSA）检测 证实,有活化的Ets-1结合至β3GnT-2/-8基因调控区. 以上结果表明,转录因子Ets-1对 人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8基因有表达调控作用.     

超抗原融合基因VEGF-SEA的克隆、原核表达及蛋白纯化

根据Genebank报道的VEGF(NM-003376)、SEA(A28664)基因序列,对密码子进行优化,合成血管内皮细胞生长因子和超抗原基因序列,将VEGF-SEA基因片段插入质粒pET22b构建重组质粒pET22b-VEGF-SEA.重组质粒经序列分析正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析蛋白条带与预期一致,证明融合蛋白原核表达成功.产物经His·Bind Buffer kit试剂盒纯化,纯度达到90%,这一成果为进一步研究VEGF-SEA融合蛋白的活性及其功能,探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础.