双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物

通过蓝色非变性凝胶电泳(BN-PAGE)比较痢疾杆菌福氏5型野生株M90T和大质粒缺失株M90T△T的膜蛋白复合物,发现一个野生株特有的复合物,其分子量的为290 kD,命名为M90T-290.通过第二向SDS-PAGE分离M90T-290得到6个蛋白亚基,质谱鉴定为:一个由大质粒编码的毒力蛋白Apyrase(ATP-二磷酸水解酶)和5个染色体编码的蛋白,这些蛋白可能以膜复合物的形式影响毒力蛋白IcsA的单极性分布和痢疾杆菌在细胞间的扩散.这个新发现的毒力相关膜复合物在痢疾杆菌的致病过程中可能发挥重要作用.     

小麦叶片类囊体膜蛋白复合体的分离和分析技术研究

膜蛋白复合体在生命活动中执行着重要的生物化学功能,具有重要的研究意义,但由于其低表达和高度疏水的特点,完整状态和低丰度的膜蛋白复合体的分离分析仍是一大挑战.首先,采用蓝绿温和胶非变性电泳作为第一维分离技术,大量分离制备叶绿体类囊体膜蛋白复合物;其次,采用电洗脱方法差异富集第一维电泳分离到的各种蛋白复合体;最后,采用SDS-PAGE作为第二维分离技术,分析差异富集的不同种蛋白复合体的亚基构成.研究结果表明,利用这种分离分析模式,能有效地富集膜蛋白复合体尤其是低丰度膜蛋白复合体,明显提高第二维分离分析的分辨率和蛋白覆盖率.     

一种分析叶绿体类囊体膜色素蛋白复合物的蓝绿温和胶电泳系统

采用蓝绿温和胶电泳系统可以非常有效地分离叶绿体蛋白质复合物,包括PSⅠ, PSⅡ, ATP合酶,细胞色素b₆f复合物,捕光色素复合物和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶.还结合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳将叶绿体多亚基复合物的50多种蛋白质分开,利用免疫印迹对蛋白质复合物进行了初步鉴定,同时还应用蓝色温和胶电泳分析基质、基粒类囊体复合物的组成.     

低叶绿素b水稻突变体类囊体膜的比较蛋白质组学

采用蓝绿温和胶凝胶电泳(blue-nativepolyacrylamidegel-electrophoresis,BN-PAGE),以及改进的第二向SDS-PAGE分离了水稻低叶绿素b突变体ZH249-Y和野生型ZH249-W类囊体膜蛋白复合物,系统比较了突变体和野生型各复合物亚基的表达差异.结果显示,第一向BN-PAGE分离了PSⅠ-LHCⅠ、LHCⅠ缺失的PSⅠ、ATP合成酶、细胞色素b6f、CP43缺失的PSⅡ及LHCⅡ六种复合物.上述各复合物经第二相SDS-Urea-PAGE分离后,利用胶内酶解,高效液相层析分离肽段,电喷雾串联质谱鉴定了复合物的亚基.结合免疫印迹研究,证明和野生型相比,突变体光系统Ⅱ捕光天线复合体的表达量适度下降,但光系统Ⅰ捕光天线破坏严重,同时光系统Ⅱ核心蛋白和ATP合成酶的表达量上升.研究结果对揭示低叶绿素b水稻突变体较高光化学效率和光稳定性的分子基础提供了线索,同时也表明,改进的BN/SDS-PAGE双向电泳不仅可以有效地分离膜蛋白复合物及亚基,也可以进行不同生理条件下,或野生型和突变体之间膜蛋白质组的比较研究.     

一种用于色素蛋白分离的新凝胶系统

用混合去垢剂增溶低离子强度条件下的温和电泳方法,对菠菜叶绿体类囊体膜和不同PSⅡ制剂进行了色素蛋白复合体组成的分析．并结合SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和吸收光谱对部分色素蛋白复合体进行了鉴定．此法简便、迅速、游离色素少．     

HIV-1跨膜蛋白gp41螺旋结构的原核表达及功能研究

HIV-1跨膜蛋白gp41是HIV-1包膜与靶细胞膜的融合过程中的关键蛋白,是理想的HIV-1融合抑制剂靶点。为开展以gp41为靶点的抑制剂筛选,以HIV-1 B亚型病毒基因为模板,通过PCR、酶切、连接等方法构建得到gp41 5-helix与6-helix重组质粒,转入大肠杆菌BL21（DE3）进行表达,经变性和复性后亲和层析纯化蛋白。经SDS-PAGE鉴定,纯化后蛋白纯度较高。本研究还通过非变性凝胶电泳证明gp41 5-helix与C-多肽衍生物T-20存在相互作用,为下一步药物筛选模型的建立奠定了基础。     

用双相电泳技术分析棉酚对大鼠成熟精子蛋白质组成的影响

本文首次将双相电泳(等电聚焦和SDS电泳)技术应用于对棉酚作用机理的研究。实验结果表明,棉酚能够改变大鼠成熟精子的蛋白质组成;同时也证明,双相电泳这一技术对棉酚的研究是有效的。     

对角线电泳的一些应用

作为鉴定物质的一种方法,电泳在生物化学和医学临床等领域有着广泛应用。特别是区带电泳由于设备简单、操作方便等优点,已成为开展生物化学和分子生物学等研究工作的一种不可缺少的工具。在蛋白质的研究中应用最广泛的是聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。由于电泳是生物化学的一项基本技术,对于其基本原理、分类、操作等内容不再赘述。近来由于生命科学各门学科向分子生物学方向的发展,对蛋白质的研究更加深入,而聚丙烯酰胺电泳这一经典技术也有了新的应用,特别是对角线电泳的应用进展更快。对角线电泳是双向电泳的一种特例。双向电泳将蛋白质样…     

Blue Native PAGE电泳

在蛋白质组学研究中Blue Native PAGE电泳常用于在非变性条件下分享蛋白质复合物,是研究蛋白质相互作用等的有力工具。本文将对其原理和具体实验操作进行简要介绍。     

毛细管电泳的最新进展

毛细管电泳是近年发展最快的分离分析技术之一。它具有高灵敏度、高分辨率、高速度等优点,广泛应用于各个领域。随着毛细管电泳技术的不断发展,逐渐出现了非水毛细管电泳,毛细管阵列电泳,毛细管电泳免疫分析,毛细管电色谱手性拆分等分支。