陕西省汉族人群11号染色体10个STR基因座的遗传多态性研究

为了分析陕西汉族人群中11号染色体上10个短串联重复序列(short tandem repeat, STR)基因座的多态性,采用荧光标记基因扫描方法,对11号染色体上的D11S1760、D11S4102、D11S4116、D11S4207、D11S4162、D11S914、D11S4127、D11S917、D11S4146和^D11S915基因座的遗传多态性进行分析。结果显示：D11S1760、D11S4102、D11S4116、D11S4207、D11S4162、D11S914、D11S4127、D11S917、D11S4146和D11S915基因座分别检出17、11、15、11、4、6、7、12、11和13个等位基因,41、18、36、30、8、10、16、30、29和32个基因型,等位基因型符合Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）。其杂合度分别为86.72%、67.95%、83.90%、85.96%、58.18%、57.63%、72.60%、72.73%、77.87%和86.40%,表明11号染色体上的这10个STR基因座在汉族人群中有较好的多态性,是理想的遗传标记物。     

7个Y-STR基因座荧光标记复合分型及在中国汉族群体中遗传多态性的研究

建立了FAM（蓝色荧光）标记的DYS456、DYS464a/b/c/d和DYS527a/b和JOE(绿色荧光)标记的DYS531、DYS709、DYS448和DYS522 7个Y染色体STR基因座(相当于11个位点)复合扩增分型体系。利用ABI3100遗传分析仪调查中国广东汉族151例和河南106例汉族无关男性个体的遗传多态性分布, 并探讨在法医学中的应用价值。结果显示, 此方法能作出正确分型的最低基因组DNA量为0.02 ng; 在女性成份为男性成份150倍的混合DNA样本(总DNA量为160 ng)中能正确检出全部7个Y-STR基因座的基因型。 广东和河南2个汉族男性群体中, 观察到的单体型分别有150、105种, 其中仅观察到1次的单体型分别有149、104种, 单体型多样性(HD)分别为0.999912、0.999820; 这组Y-STR单体型在两个群体中的分布差异有统计学显著意义(秩和检验: P<0.001)。此7个Y-STR基因座多态性分析适用于法医学实践和人类进化的研究。     

可剪切多拷贝抗菌肽融合表达载体的构建

抗菌肽是生物体防御系统产生的一类对外源病菌具有高效杀灭活性的小分子多肽, 在植物抗病基因工程中具有重要的应用价值。Thanatin是刺肩蝽(Podisus maculiventris)成虫经诱导产生的一种抗菌肽, 由21个氨基酸残基组成, 该抗菌肽对革兰阳性、革兰阴性菌以及真菌都有很强的抗菌活性。为研究该抗菌肽转入油菜对菌核病抗性提高的效果, 采用同尾酶反复酶切连接的方法构建了分别含1~5拷贝的Thanatin串联融合表达载体, 并导入农杆菌用于油菜的遗传转化。研究采用引物重叠法扩增并克隆了抗菌肽基因, 并采用了一种在植物体内可被特异性切割的短肽作为连接肽, 使多拷贝融合表达的抗菌肽在植物体内可自动剪切为有功能活性的单个抗菌肽单元, 以增加抗菌肽表达丰度和抗菌肽的稳定性。研究还采用了大豆几丁质酶的信号肽作为引导肽引导多拷贝融合表达的抗菌肽分泌到细胞间隙, 以增强抗菌肽作用效果。     

深圳无偿献血人群中李姓、王姓和张姓无关男性个体Y-STR单倍型遗传多态性

为研究姓氏群体Y染色体特异STR单倍型的遗传多态性, 采用PCR复合扩增和ABI PrismTM 3100基因测序仪荧光检测方法对DYS426等9个Y-STR基因座进行基因分型, 检测深圳地区李姓无关男性个体血样139份、王姓无关男性个体118份、张姓无关男性个体119份。结果在139份李姓群体中, 共检出126种单倍型, 其中118种单倍型仅出现1次, 检出频率最高的1种单倍型出现6次, 单倍型多样性为0.9974; 118份王姓无关男性样本中, 共检出105种单倍型, 其中94种单倍型仅出现1次, 检出频率最高的1种单倍型出现4次, 单倍型多样性为0.9953; 张姓无关男性样本中, 共检出101种单倍型, 其中88种单倍型仅出现1次, 检出频率最高的1种单倍型出现4次, 单倍型多样性为0.9964。结果表明: 深圳地区李、王、张姓氏无关男性个体Y-STR单倍型的遗传多态性丰富, 与以往的汉族无关男性群体遗传资料相比较, 差异不显著。     

构建基因工程菌发酵产生维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸

从棒状杆菌ＳＣＢ３０５８克隆得到两个２,５－ＤＫＧ＾＊＊还原酶基因后,构建了两个能够表达２,５－ＤＫＧ还原酶的基因工程大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＰＥＴ９ａⅡ和ＤＨ５α（ｐＢＬ４）和一个基因工程欧文氏菌ＥＲ９７。２,５－ＤＫＧ还原酶基因分别受控于ＰＬ或Ｔ７启动子,通过加入ＩＰＴＧ或提高温度进行诱导,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和酶活测定确定它们在诱导后得到了高表达,用细胞抽提液在加入辅酶ＮＡＤＰＨ的体外实验中转     

银染法检测STR复合扩增产物应用于法医个体识别的初步研究

为提高法医生物检材利用率和检案效率,研制银染法能检测的4个基因座和6个基因座STR复合扩增试剂。对一例轮奸案检材DNA,运用同步复合PCR技术对CSF1PO、TPOX、THO1和vWA(A组)4个STR基因座;D18S51、D7S820、D13S317、D5S818、D3S1358 5个STR基因座和Amelogenin(B组)性别基因座分别进行4个基因座和6个基因座的PCR复合扩增,两组扩增产物同时经测序聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测,扩增片段互不干扰。两组试剂用于一例个体识别案获得了2.43×10-19的个体识别率。证实了银染法检测STR 4个基因座和6个基因座复合扩增产物的可行性。 Abstract:Amplification of short tandem repeat(STR) loci has become a useful tool for human identification applicationsTo improve throughput and efficiency for the forensic materials and gain foure and six STR locis multiplex methods with silver staining,CSF1PO、TPOX、THO1 and vWA(referred to as multiplex A), D18S51、D7S820、D13S317、D5S818、D3S1358 and Amelogenin(referred to as multiplex B) have been evaluated for use in a rape case.The products of multiplex amplication were separated in a denaturing polyacrylamide gel and analyzed with silver staining.Two multiplex amplications used in this case could provide a power of discrimination of approximately 2.43×10-19.Silver staining was showen to be a validation methods for analysing the products of four and six multiplex amplications.     

液相色谱紫外-荧光串联检测器法检测我国污水中常见11种抗生素

城市污水处理厂是环境中多种抗生素污染物的主要来源之一.建立污水中多种类抗生素的同时分析检测方法,可为获取该类污染物的常规监管提供技术储备.本研究以我国污水处理厂检出率最高的抗生素为目标污染物,建立了同时分析检测11种抗生素的高效液相色谱紫外/荧光检测器串联分析方法.该方法首先使用紫外检测器,在一组优化仪器参数条件下,实...     

超高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中烷基间苯二酚

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中2种全麦食品生物标志物烷基间苯二酚（ARs）的方法。方法：血浆加入内标，经丙酮提取，离心取上清液过滤，滤液吹干异丙醇定容，使用实心核色谱柱（2.1mm×100mm，1.6μm）为分离柱，以异丙醇∶乙腈=30∶70为流动相，等度洗脱，质谱采用电喷雾负离子模式，多反应监测模式进行检测，用内标法定量。结果：2种ARs在2~200ng/mL浓度范围内线性良好，r2>0.998 0。方法检出限为0.1ng/mL，定量限为0.3ng/mL，加标回收率为88.2%~110%，相对标准偏差为2.48%~13.2%（n=6）。结论：该方法快速准确、灵敏度高、前处理简单，能够有效测定血浆中2种ARs的含量。     

动物组织蛋白酶L-like基因家族的进化分析

目的:组织蛋白酶L-like家族是在溶酶体中发现的一类非常重要的半胱氨酸组织蛋白酶。其主要功能为催化各种蛋白质的水解,并通过水解蛋白质参与到许多的生理调节过程当中。根据序列比对分析和传统的功能分类,在动物中,组织蛋白酶L-like家族成员包括组织蛋白酶L、V、S、K、H和F。但是这些家族成员之间的进化关系仍然没有详细研究分析清楚。本课题主要研究组织蛋白酶L-like家族成员之间的进化关系。方法:本研究通过搜集整理22个物种的177条组织蛋白酶L-like家族蛋白的序列,并构建系统发育进化树来分析组织蛋白酶L-like家族各成员之间的进化关系。结果:序列数据结果显示,串联重复在组织蛋白酶L-like家族的进化过程中发生。斑马鱼的组织蛋白酶L,爪蟾的组织蛋白酶S和K,大鼠和小鼠的组织蛋白酶L都发生过明显的串联重复事件。进化树结果显示了组织蛋白酶H、S和K、L和V之间的进化关系,组织蛋白酶S和K在脊椎动物出现的进化过程中,从组织蛋白酶L中分化出来,与他们在脊椎动物体内的特异性功能,以及脊椎动物在进化过程中分化产生的特异性功能相对应。结论:在物种进化的过程中,组织蛋白酶L-like家族成员F、H、S和K、L和V按时间顺序分化,这表明组织蛋白酶L-like基因家族结构和功能的分化与新的物种和新的功能出现密切相关。     

利用串联质谱鉴定氨基酸突变的生物信息学算法

氨基酸突变能够改变蛋白的结构和功能,影响生物体的生命过程.基于串联质谱的鸟枪法蛋白质组学是目前大规模研究蛋白质组学的主要方法,但是现有的质谱数据鉴定流程为了提高鉴定结果的灵敏度往往会有意压缩数据库中的氨基酸突变信息.因此,如何挖掘数据中的氨基酸突变信息成为当前质谱数据鉴定的一个重要部分.当前应用于氨基酸突变鉴定的串联质谱鉴定方法大致可以分为3大类:基于序列数据库搜索的方法、基于序列标签搜索的算法以及基于图谱库搜索的算法.本文首先详细介绍了这3种氨基酸突变鉴定算法,并分析了各种方法的特点和不足,然后介绍了氨基酸突变鉴定的研究现状和发展方向.随着基于串联质谱的蛋白质组学的不断发展,蛋白序列中的氨基酸突变信息将被更好地解析出来,从而得以深入探讨由氨基酸突变引起的蛋白结构和功能改变,为揭示氨基酸突变的生物学意义奠定基础.