简单、快速、高效扩增和标记目的基因技术的研究

从固体平板挑取转化带有目的基因的单菌落 ,用特异引物通过聚合酶链式反应可直接扩增和标记目的基因 ,不需经过菌的液体培养、质粒提取和酶解反应等复杂过程 ,能快速获得目的基因扩增产物和进行目的基因探针的标记。     

通过原位反转录研究MADS盒基因M79的时空表达模式

通过设计可以引发特定mRNA进行转录的特异引物,采用了一种新的原位反转录的方法检测mRNA,这种原位反转录的方法是把原位杂交和反转录进行有机结合的结果,其实用性能和关键步骤都已进行优化.研究表明,只要设立合适的对照原位反转录方法,检测mRNA的灵敏度高、假阴性和假阳性率低.用这种方法对一个属于AGL2亚组的水稻(Oryza sativa L.)的MADS-盒基因M79的表达进行了分析,结果表明,在水稻从营养到生殖的各个发育阶段,M79均有表达,与平行进行的传统原位杂交的方法得到的结果类似.相对而言,原位反转录法耗时短、容易操作,可以成为一种可靠的原位定位mRNA的基本技术.     

应用 PPIN分析肝移植临床耐受患者PBMC基因表达特点

应用生物信息学方法分析肝移植临床耐受患者PBMC基因表达特征,筛选临床耐受关键基因。从GEO数据库获取19个肝移植临床耐受病例及22个非临床耐受病例基因表达谱数据。应用DAVID网络软件进行差异基因功能注释与聚类分析;通过Cytoscape软件的MiMI插件构建蛋白质相互作用网络(PPIN)筛选肝移植临床耐受关键基因。差异基因涉及蛋白质及RNA代谢、免疫应答、膜结构调节等复杂生物过程。PPIN网络分析获得10个临床耐受核心基因。我们的研究表明:肝移植临床耐受涉及外周血免疫细胞复杂的基因表达调控机制及蛋白质间相互作用;RNA的转录后加工及蛋白质降解在免疫耐受的形成中发挥了重要作用;RBM8A、DHX9、CBL、IKBKB、CSNK2A1、HSPA8等核心基因发挥重要的免疫调节功能。     

茶树原位转化方法的建立

解决茶树缺乏高效、稳定的遗传转化体系问题,建立了一种基于根癌农杆菌介导的茶树原位转化转基因方法,为茶树基因功能研究和种质创新奠定坚实的基础。以茶树品种‘铁观音’、‘白叶1号’和‘龙井43’的实生幼苗为受体材料,进行去顶芽和腋芽处理。利用根癌农杆菌菌液侵染实生苗伤口,通过抗性筛选获得再生芽,经分子生物学鉴定后,采用短穗扦插法获得茶树转基因植株。结果表明,再生芽中GUS(β-glucuronidase)和HYG(hygromycin)标记基因经多次PCR检测均为阳性,经测序验证PCR产物序列与标记基因序列一致。‘铁观音’、‘白叶1号’和‘龙井43’的转化率分别为8.14%、2.99%和2.53%。建立了不依赖茶树组织培养的原位转化转基因体系,具有操作简便、转化率高、成本低、试验周期短的特点。     

有机磷水解酶纳米胶囊的调控及其对酶活性和稳定性的影响

纳米胶囊化是提高有机磷水解酶(organic phosphorus hydrolase,OPH)稳定性,进而实现其实用化的最具前景的解决方案.纳米胶囊一方面能够有效保护有机磷水解酶免于失活,但另一方面胶囊的存在也会阻碍底物与酶活性中心的接近.因此,通过调节纳米胶囊的结构来调控有机磷水解酶纳米胶囊活性和稳定性是十分值得研...     

黄鳝二价体上随机引物原位DNA合成的探讨

采用随机引物,在黄鳝二价体上建立了氚标记引物原位DNA合成技术,并详细探索了该技术的实验条件。其结果显示黄鳝二价体上DNA延伸效果十分明显,银颗粒基本上是非随机性的相间排列,而且主要特征是基本稳定的,据此可以进行染色体识别。此外,还讨论了建立该技术的重要意义。 Abstract:We have developed a technique of random-primed tritium labeled DNA extension on the pachytene bivalents of rice-field eels.The bivalents were not homogeneously labeled with this technique and the extension signals were very apparent and relatively stable,and these can be applied to identify the individual bivalent.The significance to develop this technique has also been discussed in detail.     

原位核酸杂交检测宫颈癌中金黄色葡萄球菌L型DNA

应用病原微生物培养、改良革兰氏染色、免疫组化染色及原位核酸杂交等方法,对５０例宫颈癌和３３例慢性宫颈炎进行了研究。结果发现宫颈癌病原微生物培养细菌及其Ｌ型阳性感染率为５８％（２９／５０例）,以金黄色葡萄球菌（金葡菌）及其Ｌ型多见（１３／２９例）;宫颈癌和慢性宫颈炎组织切片革兰氏染色,细菌Ｌ型检出率分别为６６％和４５．５％;免疫组化染色（ＡＢＣ法）金葡菌Ｌ型抗原阳性率各为６８％和４８．５％。Ｌ型主要分布于癌间质、癌巢及宫颈上皮下结缔组织内。１２例宫颈癌金葡菌Ｌ型ＤＮＡ探针原位杂交显示,１０／１２例癌细胞核内有金葡菌Ｌ型ＤＮＡ杂交阳性信号,表明金葡菌Ｌ型ＤＮＡ已进入宫颈癌细胞内,可能会在基因水平上影响宫颈上皮恶变,提示宫颈癌发生与金葡菌Ｌ型感染关系密切,值得进一步研究。     

黄鳝二价染色体上地高辛配基标记随机引物原位DNA合成的研究

在黄鳝二价染色体上, 运用地高辛配基标记的随机引物原位DNA合成技术诱导出了明暗相间、基本稳定且类似于R带的带状结构。本文对该结果进行了较详细的分析和讨论。 Abstract:The dark bands alternating with light bands,relatively stable and R-band-like structure was showed on the pachytene bivalents of Rics-field eel(Monopterus albus Zuiew)by using the random-primed in situ digoxigenin-labelled DNA synthesis technique,and the results were analysed and discussed in detail.     

乙型肝炎人免疫球蛋白预防肝移植术后HBV再感染研究进展

乙型肝炎人免疫球蛋白(HBIG)是含有高效价乙型肝炎表面抗体(HBs Ab)的多克隆球蛋白制剂,其含量占蛋白质总量的96%以上。静脉输注后即刻达到高峰,能与乙肝病毒颗粒外壳上的乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)特异性结合发生抗原抗体反应,从而使病毒失去对细胞的侵袭能力,它与拉米夫定联合应用是公认的预防肝移植术后HBV再感染的有效的常规治疗方法。但是,一旦停止HBIG用药,由于拉米夫定存在耐药性问题,HBV再感染率会升高。为此,国内外在HBIG预防肝移植术后HBV再感染长期效果方面做了大量研究工作,并取得了一些进展,现作一简要综述。     

肝病患者肝细胞内HBV DNA原位杂交研究——形态、分布及意义

应用生物素标记HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)作探针,对129例肝病患者肝组织作原位杂交研究。发现HBV DNA主要存在肝细胞浆内,可分为胞浆致密型、疏松型和包涵体型。HBV DNA阳性肝细胞在肝实质中分为三种型:小叶型、局灶型与散在点状分布。HBV DNA在慢性活动型肝炎中检出率最高(81％),显著高于肝硬化,慢性小叶型肝炎、急性肝炎及原发性肝癌组。乙肝复制指标阳性患者肝细胞内HBV DNA检出率明显高于非复制组;并观察到HBV DNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切,多数紧紧毗邻肝细胞坏死灶/或和位于坏死灶中间,尤以局灶型分布的HBV DNA阳性肝细胞为显著。