毛竹（Phyllostachys pubescens）竹笋群动态的研究

 本文从克隆植物生长的调节与适应的角度,研究了毛竹竹笋群的时空动态。竹笋的单位面积产量及个体大小在年际之间变化很大。环境有利的年份出土的竹笋要比条件恶劣的年份多得多、高得多、壮得多。而且,自始至终较早的同生群的竹笋总比较晚的同生群的要高得多、壮得多。较早的同生群的竹笋刚出土时要经历一段生长缓慢的时期,而较晚的同生群的竹笋一出土生长就十分迅速。不管竹笋何时出土,它们几乎都同时进入最快生长期。竹笋高度日增量最快时可达每天100cm左右。本文解释了亚热带竹子在春季不同时间出土的竹笋为何及如何几乎同时抵达林冠顶部。最后,提出了一些有利于竹林经营管理的建议。     

青冈种群克隆多样性及其与环境因子的关系

 采用等位酶分析测定了6个青冈种群的克隆多样性。种群和种水平上每基因型含有的个体(克隆分株)数分别为1.270和1.508。青冈种群中克隆多样性较高,Simpson’s指数平均为0.9882,均匀度平均为0.7921。81.3％的基因型为局部分布,仅有1种(0.5％)基因型分布于75％以上的种群中。相关分析表明Simpson’s指数与总氮含量呈显著的负相关(P<0.05),与其他环境因子的相关性不显著。     

以葡萄渣为原料,固体发酵生产单细胞蛋白的初步研究

本文报道以葡萄渣为唯一碳源,利用微生物混合培养固体发酵技术生产单细胞蛋白的初步尝试。将自分的３株霉菌、（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ）４株酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）和１株细菌（Ｃｅｌｕｌｏｍｏｎａｓ）进行了不同组合的培养,并用正交试验法作了培养基配方试验,同时对培养基含水量和发酵时间也进行了一些摸索。初步结果表明,培养基在未经灭菌的条件下,以尿素为氮源,培养基含水量６０％,于２８℃—３０℃,培养４８ｈ,发酵产物的粗蛋白含量可提高一倍。     

小鼠金属硫蛋白ⅠcDNA编码序列的克隆及其在昆虫细胞中的表达

将质粒ＰＢＸ－ＭＴ上的小鼠ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ片段切下作为模板,通过ＰＣＲ方法删除该片段的非编码序列,将编码序列克隆到质粒ＰＢＳ－ＳＫ中,经ＤＮＡ序列测定后证明其克隆序列正确,再将ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ编码序列插入到转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点之间,通过磷酸钙／ＤＮＡ共转染方法将其导入昆虫细胞Ｓｆ９中,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＤｏｔＥＩＡ方法对表达产物进行了检测,表达量为１ｍｇ＝     

短小芽孢杆菌degQ基因的克隆与鉴定

ｄｅｇＱ基因编码一个由４６个氨基酸组成的多肽,能增强许多芽孢杆菌胞外酶基因的表达,以ＰＭＫ４作克隆体构建短小芽孢杆菌基因库,并用ＤＮＡ探针原位杂次法从中钓出ｄｅｇＱ基因,对克隆基因的ＤＮＡ序列进行了分析并证明克隆的短小芽孢杆菌ｄｅｇＱ基因具有增强枯草杆菌蛋白酶和果聚糖蔗糖酶基因表达的能力,ｄｅｇＱ基因克隆有助于研究芽孢杆菌的正调控机一并可望提高外源基因在芽孢杆菌中表达。     

百日咳杆菌粘着素的分子克隆、表达、纯化及生物学特性研究

大肠杆菌中克隆了编码百日咳杆菌粘着素（Ｐｅｒｔａｃｔｉｎ,Ｐｒｎ）１．９ｋｂ的结构基因,获得了４株表达Ｐｒｎ的重组菌株,以融合蛋白的形式,对Ｐｒｎ进行了表达。Ｐｒｎ融合蛋白的表达量占细胞总蛋白量的４６．４％。融合蛋白纯度达８９．２％。免疫印迹证明,抗天然Ｐｒｎ的单克隆抗体ＢＰＥ３能识别重组菌中及纯化的Ｐｒｎ融合蛋白。Ｐｒｎ融合蛋白能与抗百日咳杆菌Ⅰ相血清发生特异凝集反应。Ｐｒｎ融合蛋白及重组菌免疫小鼠后,对百日咳杆菌毒力株１８３２３的脑内攻击,保护率达６０～６２．５％。     

HCV5′端非编码区cDNA的体外转录

采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５′端非编码区（５′ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒,获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定,将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｃｏＲｆｆＩ和ＰｓｔＩ切点之间,所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应,产物     

抗冻蛋白结构基因片段的克隆

为了研究和开发利用抗冻蛋白或多肽,木文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）合成了抗冻蛋白１１０ｂｐ的结构基因片段,然后将该基因片段克隆到大肠杆菌质粒载体Ｐ（Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）Ⅱｋｓ＋／－上,获得了重组质粒,经酶切证明,获得的重组质粒中含有抗冻蛋白结构基因片段,以供该基因在大肠杆菌或酵母中表达抗冻蛋白。     

坚强芽孢杆菌三个淀粉酶基因的克隆和表达

以pUC18为载体,用鸟枪法从产淀粉水解酶的坚强芽孢杆菌725菌株中得到三个产淀粉水解酶的重组质粒,在大肠杆菌中表达。用高压液相色谱分析了三个表达的酶的淀粉水解产物,其中pBA135和pBA150表达的酶的淀粉水解产物主要是麦芽糖,具β-淀粉酶的性质。pBA140表达的酶的淀粉水解主要产物除麦芽糖外还有一糖,三糖和四糖。pBA135编码的酶有较好的热稳定性,60℃保温30min,活性保留70％以上,最适反应温度55-60℃。而在同样条件下pBA150编码的酶仅保留37％的酶活,最适反应温度50℃。     

生长素结合蛋白cDNA的克隆及其在烟草中的表达

基于拟南芥内质网生长素结合蛋白基因的ｃＤＮＡ序列,设计合成了Ａｐ５和Ａｐ３两个引物,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增了拟南芥的ＡＢＰ基因。将该基因克隆在植物表达载体ｐ３５ＳＳＩＮ的３５Ｓ启动子必Ｎｏｓ３‘端之间,得到植物表达载体ｐ３５ＳＥ。通过农杆菌介导的方法对烟草ＳＲ１进行了转化,由分子杂交等检测证明,生长素结合蛋白基因已在烟草中表达,同时转基因烟草后代对生长素的敏感性明显增加。