饲料及其蛋白源有效赖氨酸测定方法的改进

本文在现有国际标准方法的基础上,重点研究了某些可能影响方法准确性、精密度及实验效率的实验条件,并从目前我国多数实验室的实际装备情况出发提出了一个等效,较为实用和简捷的流水线法。     

ATP-MgCl_2对心肌缺血再灌注产生O~-_■的清除作用

McCord的研究结果表明,心肌缺血再灌注性损伤是活性氧自由基——主要是超氧阴离子自由基的毒性引起的。我们的研究证明,ATP-MgCl_2心脏冷停搏保护液在动物实验和临床心脏外科手术中,对缺血缺氧心肌有着十分满意的保护作用。 我们用电子自旋共振波谱仪(ESR)分别检测了以含氧灌注液、含氧灌注液加入SOD和含氧灌注液加入ATP—MgCl_2对离体兔心再灌注时氧自由基的变化,以阐明ATP-MgCl_2是否具有清除活性氧自由基的作用。     

Mg~(2+)加强嵌有H~+-ATP酶脂酶体脂质分子的堆积(packing)

用亲脂性的灵敏的荧光MC 540标记在有Mg~(2+)(1mM)与无Mg~(2+)条件下重建的线粒体H~+-ATP酶脂酶体,后者的荧光强度较前者增加30%左右.这提示,含Mg~(2+)的脂酶体的脂质分子间的堆积紧密度增加.在N-AF系列(n=27和16)探剂与MC 540之间的能量转移效率,又以反应靠近脂双层表面变化的2-AP与MC 54O之间最高.这进一步表明,含Mg~(2+)的脂酶体具有较适合流动性是与Mg~(2+)通过调节靠近脂双层表面的脂质分子具有适度的堆积相关的.这对阐明我们已提出的Mg~(2+)促进线粒体H~+-ATP酶重建作用模型进一步提供了较直接的证据.     

小麦黄花叶病毒的分离提纯及其血清学等特性

应用梯度离心和超速离心浓缩获得部分提纯的病毒制剂,产量约为7.45g/kg病叶提纯的病毒制剂的紫外吸收曲线呈典型的核蛋白吸收曲线,OD260/OD242和OD260/OD280的比值分别为1.24和1.38。病毒粒子呈线状,宽13—14nm,长度主要分布于250—300nm和550—700nm之间,1000nm以上的粒子也有检到。病毒外壳蛋白仅由一个分子量约为30Kd的亚基组成。在免疫电镜试验中、病毒粒子与日本WYMV抗血清发生强烈的血清学反应。新鲜病叶的超薄切片中可看到大量风轮体和膜状体。     

几株杆状病毒包涵体蛋白双向高压电泳指纹图谱比较

用蔗糖密度梯度离心提纯的6种昆虫病毒包涵体(BsNPV1,BsNPV2,BtNPV,EpNPV,PrGV,PxGV)经DAS碱解,粗提纯的包涵体蛋白经Sepharose-6B柱层析和Caaalco-prep-disc法进一步纯化后,在SDS-PAGE中显示为一条分子量约28,000d的带。用常规双向免疫扩散法检查各种包涵体蛋白之间的差异,结果表明血清学BsNPV与BtNPV,PrGV与PxGV之间都是不可分辩的。6种包涵体蛋白的双向高压指纹图谱表明,它们的指纹图谱都不同程度地存在着一些相同或十分相似的肽点。就每种病毒的指纹图谱又都是独特的,NPV间相似性低于GV间相似性。我们认为NPV和GV的包涵体蛋白在结构上存在着一些相同的或相似的保守区域,但不同种之间在整个一级结构上是有差异的。利用包涵体蛋白的指纹图谱鉴定杆状病毒是个灵敏可行的方法。     

汉坦病毒结构蛋白的鉴定及其应用

对差速离心纯化的汉坦病毒R84-1毒株进行了SDS-PAGE和免疫印迹试验。发现有67k和43k两条蛋白区带能与汉坦病毒抗体起反应。经单克隆抗体鉴定,67k多肽可能属病毒囊膜蛋白,43k多肽未定。用免疫印迹法对出血热患者进行检测,初步证明野鼠型感染者具有上述两种蛋白抗原的抗体,大鼠型患者仅具有67k蛋白的抗体,这对出血热患者血清学分型有重要意义。     

正常人及肝细胞癌患者肝脏及血浆中丙酮酸激酶同工酶免疫测定

 分别从人肝及鼠肝中高度纯化L型和M_1型丙酮酸激酶(Pyk),制备相应的免抗血清。从抗血清中纯化IgG并水解成F(ab')_2,进而还原成Fab',后者与辣根过氧物酶(HRP)交联成Fab'-HRP,再利用这两种复合物建立了各自的高灵敏夹心ELISA来免疫定量L及M_2型(与鼠M_1-Pyk有交叉免疫)Pyk,结果发现:正常人肝中95％的Pyk为L型,M_2-Pyk仅占5％,而肝细胞癌中L-Pyk降至正常肝的3.5％,M_2-Pyk却增至正常的14.6倍,以致M_2-Pyk占总量的95.5％。免疫组化研究进一步证实定量的结果,正常人肝L-Pyk染色呈强阳性。M_2-Pyk染色较弱,而肝细胞癌恰好相反,L-Pyk染色明显减退,而M_2-Pyk不仅癌组织染色很深,癌周组织也明显深于正常,而且愈近癌巢,染色愈深。测定血浆Pyk,发现正常人L-Pyk占89.9％,M-Pyk(以M_2计)仅占10.1％。肝细胞癌患者血浆L-Pyk略见降低,为正常值的79.6％,p值在0.02～0.05之间,但血浆M型Pyk明显升高至正常的4.59倍,占Pyk总量的39.6％,并证明主要来源于肝癌组织中的M_2,故M_2-Pyk有可能成为肝细胞癌诊断的新指标。     

白细胞介素2受体α链基因转录起始点和5'调控区结合蛋白的初步研究

 借助于5'和3'末端删切后重建的IL-2R a链基因调控区次级克隆,在体外合成有放射性同位素参入的反意义RNA探针与总RNA进行液相杂交,结果表明TPA或PHA分别活化的T细胞在IL-2R a链表达过程中都在不同程度上有选择地利用了调控区内分别为-58(5')和+1(3')位两个转录起始点中3'转录起始点。热休克使PHA活化细胞更明显地利用+1位点。PHA诱导Jurkat细胞表达IL-2RamRNA斑点杂交证实,Jurkat细胞在活化16小时表达IL-2Ra基本达到高峰,至24小时已明显下降。根据这一规律提取PHA诱导活化15小时的Jurkat细胞S100和NE,进行有关结合蛋白的研究,初步结果显示磷酸纤维素柱的KCI洗脱组分中存在着DNA结合蛋白,有关结合蛋白性质的研究正在进行中。     

山莨菪碱对经有限蛋白水解后的脑突触膜Ca~(2+)-ATPase的影响

 从猪脑中提取钙调蛋白和突触质膜,我们研究了山莨菪碱对经有限蛋白水解和磷脂酶A_2处理后的突触膜Ca~(2+)-ATPase活性影响。发现药物对不同预处理后的Ca~(2+)-ATPase表现出不同影响并调节钙调蛋白对它的激活作用。