Hepcidin的基因克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

根据已知hepcidin氨基酸序列,参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,设计合成了hepcidin目的基因。所合成的hepcidin基因全长96bp,其5′端引入KEX2基因产物(Kex2)的特异性识别位点序列,以保证表达产物具有天然N端。通过基因重组的方法将hepcidin基因克隆到pPicZαA载体中,构建了分泌型重组酵母表达载体pPICZαA-Hepc,经电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500μg/mL的Zeocin筛选得到高拷贝插入GS115菌株,经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液有明显的hepcidin表达,表达量达到100mg/L。初步抗菌特性研究表明,该表达产物对枯草芽孢杆菌有明显的抑菌作用,而对大肠杆菌抑菌效果不明显。     

漆树各器官中乳汁道的分布与结构特征研究

采用石蜡制片法,对漆树茎、根、叶、花、果实中乳汁道的分布与结构特征进行解剖学观察研究.结果表明,(1)除种子外,漆树的根、茎、叶、花和果实内均具有乳汁道,乳汁道主要分布在各器官维管束的韧皮部内,茎的髓部内也有少数分布.(2)乳汁道都是由一层分泌细胞及其外的多层薄壁鞘细胞围绕着腔道构成,属于贮存生漆的分泌道.(3)漆树不同器官内乳汁道的直径和鞘细胞的层数存在差异.     

不同盐处理对玉米幼苗根系质子分泌及细胞膜透性的影响

以玉米品种郑单958为实验材料,分别用100 mmol/L NaCl、100 mmol/L KCl和50 mmol/L Na2CO3处理其幼苗3 d,研究不同盐类对玉米根系质子分泌和细胞膜透性的影响.结果表明:不同盐处理都显著抑制玉米幼苗根系的生长,抑制程度依次为Na2CO3>KCl>NaCl;不同盐处理均使玉米幼苗根系Na 含量显著增加,NaCl和Na2CO3处理显著降低根系K 含量而导致其Na /K 升高,但KCl处理却显著提高根系K 含量使其Na /K 降低;不同盐处理均能显著增加细胞膜透性而降低根系质子分泌能力,影响程度依次为Na2CO3>KCl>NaCl.研究发现,相同阳离子浓度条件下,KCl处理对玉米根系质子分泌的抑制作用强于NaCl,碱性盐的抑制作用大于中性盐;盐胁迫可能通过改变玉米幼苗根系质膜的稳定性来影响质子分泌,从而抑制根系生长.     

重组人生长激素对梗阻性黄疸大鼠sIgA、EGF的影响

目的：观察重组人生长激素对梗阻性黄疸大鼠sIgA、EGF的影响。方法：Wistar大鼠60只随机分4组（n=15）：假手术对照组（A组）、胆总管结扎组（B组）、胆总管结扎＋rhGH治疗1周组（C组）、胆总管结扎＋rhGH治疗2周组（D组）。除A组外,其余各组将胆总管结扎,致胆总管完全梗阻。A组和B组术后2周处死大鼠;C组于术后开始,在双后肢内侧轮流皮下注射rhGH 0.75U.kg^-1.d^-1,1周后处死;D组于术后开始,在双后肢内侧轮流皮下注射rhGH 0.75U.kg^-1.d^-1,2周后处死。各组均无菌操作,在麻醉成功后开腹直视下获取标本,测定TB、ALP、PA、IGF-I、sIgA、EGF等。结果：大鼠梗阻性黄疸时,B、C、D组血中PA、IGF-I及胃肠液中sIgA、EGF降低,血中TB、ALP升高,与A组比较均具有显著性差异（P〈0．05）;而给予外源性生长激素的c组、D组胃肠液中sIgA、EGF降低幅度明显低于B组（P〈0．05）,且梗阻性黄疸大鼠细菌移位率也明显低于B组。结论：外源性生长激素,能保护梗阻性黄疸大鼠的肝脏功能,以及肠道的机械屏障功能和免疫屏障功能,减少肠道细菌移位的发生。     

可溶性重组人组织因子(rhTF243)分泌型表达载体的构建和表达

目的:构建含有TF的胞外区和跨膜区基因的phoA-TF243分泌型表达载体,在大肠杆菌中以可溶形式表达重组人组织因子(rhTF243)。方法:从人胎盘组织中提取总RNA,以RT-PCR扩增获得目的基因,并克隆到phoA载体中,在大肠杆菌MM294中表达rhTF243,产物采用免疫亲合层析进行纯化。结果:通过低磷酸盐诱导工程菌,获得重组人组织因子(rhTF243) ,表达水平占菌体总蛋白量的16 .3 %,经免疫亲合层析纯化,产物纯度达到95 %以上,分子量为27 .4kD。结论:获得了rhTF243,具有与完整分子完全相同的凝血功能。     

Structures, Components and Functions of Secretory Tissues in Houttuynia cordata

Houttuynia cordata Thunb., traditionally used as a therapeutic plant in folk medicine, has shown antioxidant and anticancer activities. The species, as a core component of paleoherbs, is normally characterized based on the presence of different types of secretory tissue： oil cells, three types of secretory cells and glandular hairs. The aim of this work was to study the structural, componential, and the functional characteristics of the secretory tissues in both the floral and vegetative parts. The results indicate that oil cells and secretory cells are distributed in all organs of the plant, while glandular hairs are situated on the aerial stems and leaves. Both oil cells and glandular hairs initiate from the protoderm, but their developmental processes are different. Although three types of secretory cells initiate from different primary meristems, the developmental patterns of different secretory cells are the same. Also, although the origins of secretory cells are different from oil cells, their early developmental processes are the same. Histochemical results show that oil cells, secretory cells and glandular hairs produce flavonoids, phenolic compounds, tannins, lipids, aldehyde and ketone-compounds. In addition, there are terpenoids and pectic-like substances in oil cells, alkaloids in secretory cells of aerial stems, and terpenoids and alkaloids in glandular hairs. These compounds play very important roles in protecting plants from being eaten by herbivores （herbivory） and infected by microbial pathogens. The oil cell and secretory cell, as unicellular secretory tissues, are intermediates between the primitive surface glandular and secretory cavity and canal during the evolution of secretory structures.     

鼻咽癌原代培养细胞分泌性蛋白图谱的初步研究

目的:建立细胞分泌性蛋白的蛋白质组学研究方法,在此基础上初步建立鼻咽癌细胞分泌蛋白图谱。方法:通过组织块法进行鼻咽癌细胞原代培养,收集细胞上清,超滤法脱盐并浓缩上清蛋白质,双向凝胶电泳技术建立细胞分泌性蛋白图谱。结果:鼻咽癌细胞原代培养取得成功,并初步建立了鼻咽癌细胞分泌性蛋白的双向凝胶电泳图谱。结论:建立了细胞分泌性蛋白的蛋白质组学研究方法,开展了鼻咽癌细胞分泌组学研究,为阐述鼻咽癌癌变机制提供了依据,也为后续研究打下了坚实的实验基础。     

圈养马麝非繁殖季节胆量水平及与麝香分泌和繁殖成效的关系

2017年7月1日至8月31日,采用焦点取样和连续记录法,对甘肃兴隆山自然保护区马麝保育中心29头圈养马麝进行了行为取样,记录其行为发生持续时间及发生位点,根据动物在各位点对人为胁迫的应激程度定义其胆量水平,结合个体在各位点所占时间比例确定马麝个体的胆量值,分析性别、年龄等因素对其胆量的影响及胆量与麝香分泌和繁殖成效的关系.结果表明: 上等体况马麝胆量(1.731±0.347)显著大于下等体况(0.915±0.789);雄麝胆量(1.035±0.120)显著小于雌麝(1.901±0.391);亚成体马麝组的胆量(1.450±0.463)有高于成体组(1.093±0.321)和老龄组(1.430±0.189)的趋势,但差异未达显著水平.区分性别后,年龄组对马麝的胆量值仍无显著影响.独居马麝胆量(0.853±0.326)小于群居马麝(1.397±0.179),但差异不显著,群居个体胆量随密度增加而趋于降低.雄麝胆量与其麝香分泌呈负相关;雌麝胆量与年均产仔数略呈正相关,与空怀率呈显著负相关,即雌麝胆量越高,其空怀率越低.研究结果可为预测圈养马麝的麝香分泌及繁殖成效提供参考,也可为圈养动物个体胆量研究提供思路.     

毕赤酵母液滴微流控高通量筛选方法的建立与应用

巴斯德毕赤酵母是当前应用最为方便和广泛的外源蛋白表达系统之一,为了进一步提高其表达外源蛋白的能力,文中建立了基于液滴微流控的毕赤酵母高通量筛选方法,并以木聚糖酶融合荧光蛋白为例,筛选获得木聚糖酶表达和分泌能力提高的突变株。通过PCR扩增得到木聚糖酶xyn5基因和绿色荧光蛋白gfp基因融合片段,并克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中构建出木聚糖酶融合绿色荧光蛋白的质粒pPIC9K-xyn5-gfp,电转化至毕赤酵母GS115中得到表达木聚糖酶和绿色荧光蛋白的毕赤酵母SG菌株。该菌株经过常压室温等离子体诱变后进行单细胞液滴包埋,液滴培养24h后进行微流控筛选,获得高表达木聚糖酶的突变菌株,进而用于下一轮的诱变突变库构建和筛选。以此类推,经过5轮液滴微流控筛选,获得一株高产菌株SG-m5,其木聚糖酶活为149.17U/mg,较出发菌株提升300%,分泌外源蛋白的能力较出发菌株提高160%。文中建立的毕赤酵母单细胞液滴微流控高通量筛选方法能达到每小时10万菌株的筛选通量,筛选百万级别的菌株库仅需10h,消耗荧光试剂体积100μL,对比传统的微孔板筛选方法降低试剂成本近百万倍,为高效、低成本筛选获得表达和分泌外源蛋白能力提高的毕赤酵母提供了一条新途径。     

人分泌型磷脂酶A2-IIA的功能性动力学特征研究

目的 人分泌型磷脂酶A₂-IIA（secretory phospholipase A₂ group IIA,sPLA₂-IIA）在调节细胞脂质代谢和信号传导中具有重要作用,参与了多种急、慢性炎症反应。研究其动力学和变构与功能的关系具有重要意义。方法 利用弹性网络模型（elastic network model,ENM）、微扰响应扫描（perturbation-response scanning,PRS）和蛋白质结构网络（protein structure network,PSN）方法对来自人sPLA₂-IIA的31个分子的结构动力学和变构效应进行分析,并探索其动力学共性和特异性与功能的关系。结果 结果表明,对酶的催化和结构稳定起关键作用的催化残基和参与二硫键形成的半胱氨酸残基具有低运动性,这是对酶共有功能的要求;而涉及与钙离子或膜结合的5个结构区域具有高运动性,它们体现了酶成员的特异性。另外,高运动性区域在PRS分析中显示出对外界微扰响应的高敏感性,表明其在变构调节中起重要作用,而低敏感性残基则在维持结构稳定方面发挥了重要作用。残基运动相关性分析发现,人sPLA₂分子催化位点周围的强相关运动有利于酶催化功能的发挥。结论 本研究有助于深入理解人sPLA₂-IIA成员分子的动力学及功能性变构机制,可为药物设计和准确设计具有精细调节活性的蛋白质提供指导。