肉毒毒素体外检测方法的研究进展

肉毒毒素是肉毒梭状芽胞杆菌在生长繁殖过程中产生的一种神经毒素,对人和动物具有强毒性和高致死性,在世界范围内,肉毒中毒的案例时有发生,病情严重者一般2~3 d即可死亡。肉毒毒素产品所用的体内检测方法(小鼠生物法)的结果变异系数大,不利于肉毒毒素产品含量的标准化控制。因而,建立准确且灵敏度高的肉毒毒素体外检测方法,在临床治疗及制品的质量控制方面都具有重要意义,现就常用的肉毒毒素体外检测方法作一阐述。     

不同实验方法检测常用有机溶剂对细菌活性的影响及其安全使用限量

【目的】采用不同实验方法测定常用有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)、丙酮和乙醇对细菌活性的影响,以指导抗菌类药物体外抑菌实验所用溶剂的选择和添加限量。【方法】采用常规体外抑菌实验方法(纸片扩散法、肉汤稀释法),并参照生长曲线法检测有机溶剂DMSO、丙酮和乙醇对大肠杆菌(Escherichia coli)及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用,采用扫描电子显微镜(SEM)观察溶剂作用后的细菌形态变化。【结果】3种溶剂对E.coli和S.aureus抑菌率达到20%时,在肉汤稀释法下,DMSO、丙酮、乙醇的浓度(体积比)分别为1.00%、0.25%、2.00%和1.00%、1.00%、0.50%;在生长曲线法下,溶剂浓度(体积比)分别为0.50%、1.00%、0.50%和1.00%、0.50%、0.50%;而在纸片扩散法下,32%(体积比)DMSO和32%(体积比)乙醇对E.coli产生明显抑菌圈,但3种溶剂对S.aureus均无抑菌圈出现。3种方法比较后得出:当3种溶剂的抑菌率达到20%时,溶剂浓度(体积比)均低于0.5%,对细菌整体生长活性影响较小。SEM结果表明控制溶剂使用限量可有效减少其对E.coli生长过程的影响。【结论】相对于DMSO和丙酮,乙醇对微生物生长繁殖能力的影响更加明显;采用相同浓度有机溶剂时,液态条件下(肉汤稀释法和生长曲线法)微生物受到有机溶剂的影响较大。     

湘江河岸土壤中高产甲壳素脱乙酰酶菌株的筛选及鉴定

【目的】甲壳素脱乙酰酶(CDA)是将天然甲壳素生物转化为可商品化利用的壳聚糖的关键酶。本文旨在从湘江河岸的土壤中筛选可高产CDA的新菌株。【方法】以甲壳素为唯一碳源,利用4'-硝基乙酰苯胺为显色剂,通过变色圈法进行产CDA菌株初筛,产酶活性分析复筛;通过形态学和ITS区序列特征对菌株进行鉴定。【结果】从湘江(长沙段)河岸边的土壤中分离出的117株菌株中筛选到可产CDA的菌株30株,其中4株具有较强产CDA的能力。进一步经发酵产酶分析验证,菌株A1具有较强的产CDA能力,其胞外CDA酶活高达13.21 U/m L。结合形态学和ITS区序列特征,菌株A1初步鉴定为层生镰孢菌。【结论】从湘江河岸边的土壤中筛选到可高产CDA的菌株A1,具有较好的开发应用前景。     

朱砂叶螨成螨在水中的耐受力

【目的】明确朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)在雨水中的耐受能力,为评价雨水对朱砂叶螨的控制作用提供理论依据。【方法】本文通过采用玻片浸渍法和录像技术,对朱砂叶螨沉于水中的沉浮比例、耐受力以及足的摆动频率进行研究。【结果】在棉花叶片上接螨饲养5 d后(92.79%±0.55%)的朱砂叶螨沉于水中的比例极显著高于2 d后(42.72%±2.37%)的;3日龄的雌(297.4±16.1)min、雄(297.7±7.4)min成螨之间在水中存活时间差异不明显。雌雄成螨在水中最短存活时间分别为48 min和45 min;雌雄成螨数量大约在300 min内死亡达到一半,雌雄成螨在水中最长存活时间分别为773 min和856 min;雌雄成螨死亡数在时间上分布不均匀。沉在水中朱砂叶螨雌雄成螨死亡过程中表现为:足的摆动频次由高到低,足的摆动时间也非连续状态。【结论】朱砂叶螨成螨在水中有一定的耐受能力。     

结合反相高效液相色谱和酶联免疫吸附法测定昆虫血淋巴中的蜕皮甾醇激素

【目的】昆虫体内的蜕皮酮和20羟基蜕皮酮(20E)是两种主要的蜕皮甾醇激素,其中蜕皮酮是20E的前体,而20E是有活性的蜕皮甾醇激素。本研究旨在建立一种测定昆虫血淋巴中蜕皮激素高效、稳定、准确的方法。【方法】采集家蚕血淋巴,抽提总蜕皮甾醇激素,利用反相高效液相色谱法(反相HPLC)分离并收集蜕皮酮与20E,进而利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定家蚕血淋巴的总蜕皮甾醇激素、蜕皮酮和20E各自的滴度。【结果】计算出总蜕皮甾醇激素中蜕皮酮与20E的比例,推算出蜕皮酮合成和分泌、以及蜕皮酮转化为20E的能力。【结论】该方法高效、稳定、准确,可广泛应用于昆虫蜕皮甾醇激素滴度的测定。     

ESP理论参照下的临床医学英语教学实践探讨

目的:由于传统的英语教学无法满足全球化对于双语医学教育的新要求,ESP特殊用途英语如何在中国医学教育中得以实践并取得有效成果成了医学教育者的新课题。方法:为了解决这一课题,在上海交通大学医学院进行医学双语教学的试点培训,以学士,硕士和博士三种学历组成人数为3-5人的小型试点班级,目的在跟踪不同阶段的医学生在培训期间的专业素质水平与英语水平的成效,并参照语言学家Pauline Robinson的ESP方法论,归纳总结出适应我国不同阶段学生的教学方法。Pauline Robinson的ESP方法分别为:角色扮演和模仿,案例学习法,项目教学法和演讲。结果:培训教师从三组不同学生的实际情况出发,结合上述四种教学方法,经过三个学期的培训分别得出了博士生组的口语能力,硕士生组听力能力以及本科生的写作阅读能力进步比较突出的结果。结论:中国教育体制所导致的被动接受的学习习惯是中国的特殊情况,而角色扮演和模仿,案例学习法,项目教学法和演讲是紧密相扣的四环相连的教学方法,每一种教学方法都是对彼此的补充和丰富,符合我国当代学生的个性特点和医学教育的方向,从而需要更多的医学教育工作者更好地利用四种教学方法以不断提升医学英语教学的教育事业以更好地帮助医学工作者融入国际舞台。     

水中粪大肠菌群测定方法-纸片快速法与多管发酵法的比较

2015年10月国家环境保护部发布了行业标准《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》(HJ755-2015)(以下简称纸片快速法)。之前环境监测部门一直在使用国家环境保护部于2007年3月发布的行业标准《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法(试行)》(HJ/T347-2007)(以下简称多管发酵法)。纸片快速法操作简单快速,在标准中对采样瓶的处理、样品的保存、水样的稀释接种等做出了详细的规定,而多管发酵法中没有相应规定。本文对两个标准的异同点进行比较,提出了将这两种方法的优点应用于实际环境监测工作中。     

益气活血解毒中药联合奥沙利铂对晚期肝癌AFP, VEGF的影响

目的:探讨益气活血解毒中药联合奥沙利铂治疗晚期肝癌的临床疗效。方法:选择在我院接受治疗的晚期肝癌患者56例,随机分为对照组和观察组,每组28例。对照组患者采用奥沙利铂栓塞治疗,观察组患者采用奥沙利铂栓塞联合益气活血解毒中药治疗。观察并比较两组患者治疗前后血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、甲胎蛋白(AFP)、脯氨酸羟化酶2(PHD2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化情况以及临床总有效率。结果:与治疗前相比,两组治疗后患者血清AFP,VEGF,HIF-1α及PHD2水平均降低,差异具有统计学意义(P0.05);与对照组比较,观察组患者治疗后血清AFP,VEGF,HIF-1α及PHD2水平较低,差异具有统计学意义(P0.05);观察组临床总有效率(92.59%)高于对照组(71.43%),差异具有统计学意义(P0.05)。结论:益气活血解毒中药联合奥沙利铂能够降低肝癌晚期患者血清AFP,VEGF,HIF-1α及PHD2水平,提高临床疗效。     

X射线辐照后肝癌细胞HepG2 人宫颈癌基因及其相关基因关系的研究

目的:利用不同剂量X射线对体外培养肝癌细胞HepG2进行照射,研究人宫颈癌基因(HCCR)及其相关基因对于细胞增殖的影响及其可能的分子机制。方法:采用0、1.0、2.0、4.0 Gy的吸收剂量X射线照射细胞,用克隆形成法观察细胞的存活情况;光镜下观察细胞形态变化;同时在辐照24 h后用RT-PCR法检测细胞中HCCR、p53、Bax mRNA的表达情况。结果:1.0、2.0、4.0 Gy吸收剂量时克隆形成率分别为(76.13±3.52)%、(62.22±2.17)%、(25.35±3.10)%,随着辐射剂量的增加细胞存活率显著下降(P0.05)。HCCR mRNA相对表达量分别为0.95±0.04、0.8±0.07、0.45±0.03;p53 mRNA相对表达量分别为1.07±0.22、2.02±0.34、2.90±0.52;Bax mRNA相对表达量分别为1.12±0.11、1.63±0.36、2.48±0.27。较空白对照组,2Gy、4Gy剂量照射组HCCR mRNA相对表达量显著降低(P0.05),而p53、Bax mRNA相对表达量显著增加(P0.05)。结论:X射线照射可下调肝癌细胞HepG2的HCCR-1表达,抑制细胞增殖,作用机制可能与其相关基因p53、Bax表达升高有关。