林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52柱层析、亲和蓝柱层析和琼脂糖凝胶Sepharose6B柱层析的方法,分离纯化了林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组分。以凝胶过滤和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为170000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为42500,表明林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶由四个相同的亚基组成。该酶加氨反应最适pH为9．0,脱氨反应最适pH为9．5,加氨反应和脱氨反应的最适温度均为50℃。加氨反应丙氨酸脱氢酶的表现米氏常数km值为：丙酮酸2．08×10－4mol／L,NH4+2．00×10-2mol／L,NADH2．38×10-5mol／L;脱氨反应的Km为：L-Ala1．43×10-2mol／L;NAD+6．67×10-5mol／L。     

酿酒酵母胞内无机焦磷酸酶的分离纯化及性质

An inorganic pyrophosphatase (EC3.6.1.1) from Saccharomyces cerevisiae was purified to PAGE homogeneity by sonication disruption. (NH4)2SO4 fractionation and DEAE-cellulose colunm chromatography. The optimum pH and temperature of the enzyme were 7.4～7. 8 and 60℃, respectively. The Km was 19.3 mmol / L. The enzyme required Mg2+ as a cofactor for hydrolysis of pyrophosphate and was inhibited by Ca2+, Hg2+, Pb2+, Mn2+.     

蓝细菌Synechococcus sp.PCC7002petH基因的高效表达及其产物的纯化

铁氧还原白－ＮＡＤＰ＾＋氧还酶（ＦＮＲ）是光合电子传递中的关键酶之一。蓝细菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．ＰＣＣ７００２中编码ＦＮＲ的ｐｅｔＨ基因被克隆到表达载体ｐＥＴ－３ｄ上,在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占大肠杆菌总蛋白的５０５％以上。高效表达的产物以可溶性和包含体两种形式存在。可溶性部分具有ＦＮＲ的酶活性,在经过离子交换和凝胶层析后产生了电泳纯的ＦＮＲ。包含体形式的部分经６．７ｍｏ     

纯化膜蛋白质复合体Cytb6f的新方法

建立了纯化光合膜蛋白质复合体Ｃｙｔｂ６ｆ的新方法。与现有方法相比,新方法简单明了,只包括透析离心和用硫酸铵分级沉淀两个步骤,而且适于大批量制备。按此方法从菠菜叶绿体分离纯化的制剂含９．８ｎｍｏｌＣｙｔｆ·ｍｇ－１;ＳＤＳＰＡＧＥ显示４条主要区带及１条低分子量区带,背景干净;Ｃｙｔｂ６（ｂ型血红素）∶Ｃｙｔｆ＝２∶１（ｍｏｌ∶ｍｏｌ）,Ｃｈｌａ∶Ｃｙｔｆ＝１∶１（ｍｏｌ∶ｍｏｌ）;酶活性（ＰＱ２Ｈ２→Ｃｙｔｃ）８０μｍｏｌＣｙｔｃ·ｎｍｏｌＣｙｔｆ－１·ｈ－１左右;产率可达３８％。     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结     

粘虫颗粒体病毒增效因子的分离纯化及其生化性质

粘虫颗粒体病毒经０．０２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ碱溶,先用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤层析柱从病毒蛋白粗提中分离增效因子,然后选用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析柱进一步纯化增效因子,得到少量电泳纯的增效因子蛋白样品。     

重组含有Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因的杆状病毒在昆虫细胞中的表达

用杆状病毒表达系统重组病毒,在昆虫细胞中表达了完整的含有ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因３个外显子开放读码框架的长２．３ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞,用免疫荧光染色,结果表明：４８小时表达重组蛋白,７２小时细胞较完整,免疫荧光染色强阳性,９６小时后细胞出现破碎。我们采集７２小时的组织培养上清和细胞破碎裂解液,分别采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＨＰＬＣ分子筛法,用免疫蛋白印迹法实验证明,表达的蛋白能被抗ＬＭＰ１的单克隆抗体所识别,测定表达蛋白的分子量为６０ｋＤ。经蛋白含量扫描图分析,采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ－７５柱初步纯化表达的ＬＭＰ１蛋白,将后者进行裸鼠体内致瘤实验,未见肿瘤生长。     

宛氏拟青霉菌木聚糖酶的分离纯化

经自然筛选分离得到一株产高木聚糖酶活力的拟青霉属菌,初步鉴定为宛氏拟于霉（ＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｖａｒｉｏｔｉＢａｉｎｉｅｒ）菌。该菌所产的木聚糖粗酶液分别经硫酸铵,乙醇沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０分离纯化后得４个组分,分别称为Ｉ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ。其反应最适温度和ｐＨ分别为Ｉ,ｐＨ４．２,４７℃,Ⅱ,ｐＨ４．２,５２℃,ⅢｐＨ４．０,４７℃,Ⅳ,ｐＨ３．８,４     

吸附树脂AB—8对甘草酸的吸附性能及其在提取纯化中的应用

考察了大孔吸附树脂AB-8对甘草酸的吸附性能和原液浓度pH值、流速、洗脱剂的种类对树脂吸附性能的影响。结果表明,AB-8树脂对甘草酸吸附量高,易于洗脱,分离效果较好,回收率较一般方法高,达70％～80％,纯度达90％以上。     

下游工艺开拓中如何系统地筛选离子交换层析介层

下游层析工艺开拓中,选择层板介质最重要的因素包括纯度、动力载量和凝胶的使用寿命。本文作者示范了介质的动力载量及其回收率的重要区别 。