环境条件对丙酮酸分批发酵的影响

考察了搅拌转速、pH和温度对丙酮酸分批发酵的影响。高转速（500r／min）下,丙酮酸产率较高（71％）,但葡萄糖消耗速度较慢（1．23g／（L·h））;低转速（300r／min）下,细胞消耗葡萄糖的速度加快（1．95g/（L·h））,而丙酮酸产率（0．48％）却明显下降。将搅拌转速恒定在400r／min可在一定程度上获得较高的丙酮酸产率（0．62％）和葡萄糖消耗速度（1．66g／（L·h））。CaCO3调节pH时,较多碳流从丙酮酸节点转向α-酮戊二酸节点和细胞生长,最终丙酮酸产量比NaOH调节pH时的发酵结果低38．7％;NH3·H2O调节pH时最终细胞浓度和丙酮酸产量仅为NaOH调节时的77．8％和90．9％。pH5．5时最利于丙酮酸的合成。较高的发酵温度加速T.glabrata积累丙酮酸,但同时会导致α-酮戊二酸的提前积累;而较低的温度下甘油和α-酮戊二酸积累较少,丙酮酸发酵的最适温度为28～30℃。     

甲酸乙酯及甲酸对离体玉米象乙酰胆碱酯酶及酯酶活性的影响

研究甲酸乙酯和甲酸对离体玉米象Sitophilus zeamais（Motschulsky）酯酶和乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制作用,结果表明甲酸乙酯对离体的玉米象酯酶和AChE没有抑制作用,并且甲酸对玉米象酯酶和AChE的抑制中浓度远远高于甲酸乙酯对玉米象的致死中浓度,说明甲酸对玉米象这两种酶的抑制作用不是甲酸乙酯杀虫的主要机理。     

原生质体诱变选育ε-聚赖氨酸高产菌株

以白色链霉菌UN2-71为出发菌株,对其原生质体进行硫酸二乙酯(DES)诱变,选育ε-聚赖氨酸高产菌株。经过试管初筛和摇瓶复筛,得到1株稳定性好的菌株D3-32,摇瓶产量达到1.56g/L,比出发菌株提高49.43%。采用2.3L发酵罐进行发酵试验,控制pH分两阶段培养后,ε-聚赖氨酸最高产量达到4.59g/L,比出发菌株提高了2.65倍。     

过量表达Bacillus subtilis磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶对大肠杆菌产琥珀酸的影响

在大肠杆菌厌氧混合酸发酵途径中,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PPC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶(PCK)皆可催化由磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)到草酰乙酸(OAA)的反应。鉴于经由PCK催化的反应伴有ATP的生成,理论上更有利于菌体生长和产酸,本研究以大肠杆菌W3110(△pfl,△ldh)为出发菌株,利用λ-Red同源重组系统构建了其ppc缺陷菌株并在此基础上过量表达了Bacillus subtilispck基因。初步的厌氧发酵实验表明:过量表达pck可在一定程度上恢复初始菌株厌氧代谢葡萄糖的能力。其中又以ppc缺陷株更为明显,其耗糖能力和产酸能力分别为对照菌株的4.2和15.3倍。     

低盐度可诱导鲈鱼胞浆型PEPCK基因表达

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸,是糖异生途径的第1个限速酶.本研究用SMARTRACE技术从鲈鱼肝脏中分离克隆了PEPCK基因的全长cDNA序列.该基因全长2215bp,包含1个123bp的5′非翻译区和217bp的3′非翻译区,开放阅读框为1875bp,编码1个由624个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论分子量为69.1kD,等电点为5.87.氨基酸序列分析表明,与其它动物的胞浆型PEPCK相似性很高,与黑鲷为94.2%,与大西洋鲑为86.4%,与人为75.9%,而与该鱼线粒体型PEPCK氨基酸同源性只有70.6%.系统发育分析显示,该蛋白首先与其它动物的cPEPCK聚成一支,然后再与鱼类的mPEPCK成簇,认为该PEPCK属于胞浆型.同时用RT-PCR分析了PEPCK基因在10个组织中的表达,结果表明只有在肝脏、消化道和肾脏有较高的表达.将鲈鱼从盐度为25的海水转入盐度为12的海水48h后,肝脏和肾脏的PEPCK基因表达有增加.实验结果表明,本实验克隆的为鲈鱼胞浆型PEPCK,低盐度可诱导其表达.     

不利用丙酮酸的丙酮酸生产菌的选育

以光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)TP19为出发菌,经过UV和DES复合诱变选育出一株不利用丙酮酸的高产菌(TP204)。其摇瓶发酵产酸量和产酸率分别比原菌增加了26.4%和26.5%。在5 L罐上的产酸量和产酸率分别是70.23 g.L-1和64.6%,比原菌增加了5.7%和5.3%。     

CO2 Exchange and Chlorophyll Fluorescence of Phospho-enolpyruvate Carboxylase Transgenic Rice Pollen Lines

To elucidate the photosynthetic physiological characteristics and the physiological inherited traits of rice （Oryza sativa L.） hybrids and their parents, physiological indices of photosynthetic CO2 exchange and chlorophyll fluorescence parameters were measured in leaves of the maize phosphoenolpyruvate carboxylase （PEPC） transgenic rice as the male parent, sp. japonica rice cv. 9516 as the female parent, and the stable JAAS45 pollen line. The results revealed that the PEPC gene could be stably inherited and trans- ferred from the male parent to the JAAS45 pollen line. Moreover, the JAAS45 pollen line exhibited high levels of PEPC activity, manifesting higher saturated photosynthetic rates, photosynthetic apparent quantum yield （AQY）, photochemical efficiency of photosystem II and photochemical and non-photochemical quenching, which indicated that the JAAS45 pollen line has a high tolerance to photo-inhibition/photooxidation under strong light and high temperature. Furthermore, JAAS45 was confirmed to still be a C3 plant by δ^13C carbon isotope determination and was demonstrated to have a limited photosynthetic C4 microcycle by feeding with exogenous C4 primary products, such as oxaloacetate or malate, or phosphoenolpyruvate. The present study explains the physiological inherited properties of PEPC transgenic rice and provides an expectation for the integration of traditional breeding and biological technology.     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解

以苯甲酰－Ｌ－精氨酸乙酯（ｂｅｎｚｏｙｌ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ,ＢＡＥＥ）为底物,研究了蚯蚓体内纤溶酶原激活剂（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｆｒｏｍＥｉｓｅｎｉａｆｅｔｉｄａ,ｅ－ＰＡ）的酶学性质．酶促反应的最适ｐＨ为８．４,ｅ－ＰＡ降解ＢＡＥＥ的Ｋｍ为１．２４±０．１６×１０－５ｍｏｌ／Ｌ,Ｋｃａｔ为１３．８０±４．０２ｓ－１．测定了构成ｅ－ＰＡ的大,小亚基分别降解ＢＡＥＥ的Ｋｍ和Ｋｃａｔ．结果表明,大亚基的Ｋｍ与全酶的Ｋｍ相差不多,但比小亚基小约１０倍,即对底物的亲和力比小亚基强约一个数量级．大小亚基的Ｋｃａｔ比较接近,分别是全酶的１／６和１／３．研究了８种抑制剂对ｅ－ＰＡ降解ＢＡＥＥ活性的影响,其中ｐｅｐｓｔａｔｉｎ和Ｅ－６４（一种巯基抑制剂）对酶促反应有激活作用,ＴＰＣＫ,ＴＬ－ＣＫ,ＰＭＳＦ,ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ和ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ对其有不同程度的抑制作用,ＥＤＴＡ对ｅ－ＰＡ的活性没有影响．对ｅ－ＰＡ的ＢＡＥＥ活性和ｅ－ＰＡ的纤溶活性之间作了比较．     

露花磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶同功酶及其四级结构

PEPC的多态性在许多植物中都有报告。在CAM植物中,许多实验结果表明PEPC有两种分子量稍有不同的亚基（Hoffner等1989,Nimmo等1986,Muller和 Kludge1983,Muller等1982）。近年来,PEPC的多态性在基因水平也得到证实（Chollet等1996,Gehrig等1995）。冰叶日中花（Mesembtwcmptallinuzn）中,编码两个不同分子量PEPC多肽的基因已被克隆（Chollet等1996）。但这两个亚基究竟是相互结合而成异二聚体,还是以同聚方式各自缔合为两个同聚体酶目前尚有不同观点。有报告在有的CAM植物中,PEPC的聚合度有昼夜的变化,且这种变化引…     

三酮类除草剂微生物降解的研究进展

三酮类除草剂是一类高效、广谱、高选择性的除草剂,能够有效地防除玉米地多种阔叶杂草和禾本科杂草。该类除草剂在土壤、水体中残留,易造成地表和地下水污染。有关研究表明,微生物降解有望成为解决该类除草剂残留的有效措施。本文分析了2种三酮类除草剂带来的生态效应,总结了已报道的微生物降解资源,简述了降解基因/酶的研究进展及可能的降解途径,为深入研究三酮类除草剂的生物降解提供一定的信息支撑。