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[目的]构建基于CRISPR/Cas13a蛋白的SHERLOCK技术平台,并将其应用于肺癌EML4-ALK融合基因的检测。[方法]构建EML4-ALK融合基因的质粒标准品;利用RPA和PCR技术分别扩增目的基因后进行SHERLOCK检测并比对结果,比较基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的灵敏度,评估SHERLOCK检测目的基因及多种非目标基因的特异性。[结果]成功构建EML4-ALK融合基因表达质粒标准品;基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的相对荧光值无显著差异,最低检测下限为10 copies/μL,且在5 min内荧光达到平台期;SHERLOCK技术仅对EML4-ALK融合基因有阳性检测信号,对EML4、ALK、EGFR T790M和EGFR L858R基因无阳性检测信号。[结论]基于SHERLOCK技术的EML4-ALK融合基因检测方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优势,有望为肺癌EML4-ALK融合基因的早期诊断提供重要依据。 相似文献
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迷走神经电刺激(vagus nerve stimulation, VNS)对无法手术的耐药难治性癫痫患者能起到较好的抗癫痫效果,目前已被美国FDA批准用于耐药难治性癫痫的临床辅助性治疗。VNS的抗癫痫作用可长期维持,且治疗效果随刺激时间的延长而增加。有研究发现,VNS在减少癫痫发作的同时,还能改善癫痫患者的情绪状态,提高患者的认知能力。去甲肾上腺素能系统参与突触可塑性调节。本文综述了VNS改善难治性癫痫患者学习记忆能力的研究进展,重点讨论了去甲肾上腺素能系统调控突触可塑性变化的相关信号通路,提出VNS激活去甲肾上腺素能系统从而改善患者学习记忆的潜在可能性,为临床癫痫治疗提供新的靶点和思路。 相似文献
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目的 研究sRAGE、CEA和CA-199在胃癌患者中的表达及对胃癌联合诊断价值。方法 选择广西医科大学第一附属医院2015年4~12月收治首次入院的胃癌患者90例为胃癌组,并选择在同一时间段行健康体检者90例为对照组。采用ELISA方法和电化学发光方法分别检测两组的血清sRAGE、 CEA和CA-199表达水平,并采用ROC曲线分析sRAGE、 CEA和CA-199单独和联合检测对胃癌的诊断价值。结果 胃癌组的血清sRAGE水平显著低于对照组,CEA及CA-199血清学水平显著高于对照组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。sRAGE、 CEA及CA-199单独诊断胃癌的灵敏度为73.33%、32.22%和77.78%,特异度为74.44%、90.00%和95.56%。sRAGE、CEA及CA-199三者联合诊断胃癌的灵敏度为80.00%,特异度为97.78%。结论 sRAGE、CEA和CA-199联合检测对胃癌诊断具有较高的灵敏度和特异度,三者联合诊断能提高胃癌的检出率和诊断正确率。 相似文献
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胆石症(gallstone disease,GSD)是消化外科领域常见的疾病,严重影响机体健康。既往研究发现GSD形成机制可能与饮食习惯、肥胖、遗传因素及基因调控水平、胆汁胆固醇过饱和、胆囊运动障碍和胆汁排出受阻、黏蛋白异常积累和胆汁酸代谢障碍等有关。近年来随着宏基因组鸟枪测序及16S rRNA基因测序等分子生物学技术的广泛应用,大量研究发现消化道微生态(包括口腔微生态、胆道微生态和肠道微生态等)与胆道结石的形成密切相关。本文对消化道微生态与GSD关系的相关研究进行梳理与综述,旨在为GSD的预防、治疗和改善预后提供新的策略。 相似文献
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本研究旨在构建小鼠多重耐药鲍曼不动杆菌肺部感染模型,评估模型小鼠各项炎性指标的变化特征,为研究多重耐药鲍曼不动杆菌的体内致病性提供参考。首先采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测拟建模用鲍曼不动杆菌的毒力基因分布特征,然后通过感染秀丽隐杆线虫筛选建模菌株。结果显示,A5株携带更多的毒力基因,致病性也更强,被选为建模菌株。给小鼠注射环磷酰胺建立免疫抑制,雾化吸入A5株菌液(高、低密度组),监测小鼠状态、肺组织改变、肺组织和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中菌落计数、外周血白细胞和中性粒细胞计数、细胞因子等的变化。结果显示,感染A5株的小鼠较对照组状态更差,肺充血水肿,肺组织和BALF中出现鲍曼不动杆菌增殖。与低密度组相比,高密度组小鼠外周血白细胞和中性粒细胞增加更明显(白细胞F=78.630,P=0.000;中性粒细胞:F=4.762,P=0.053)。与对照组相比,感染A5株的小鼠血清白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平升高并趋于稳定(F=14.382, P=0.001),而肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)水平持续升高(F=4.558,P=0.032),高密度组与低密度组TNF-α变化趋势不完全一致。结果提示,本研究成功构建了小鼠多重耐药鲍曼不动杆菌肺部感染模型,且模型小鼠出现了明显的感染症状,接种菌量与小鼠感染程度呈正相关。 相似文献
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目的 探讨规范统一的饮食在不受饮食因素干扰前提下不同性别和年龄恒河猴肠道菌群的差异。方法 将38只恒河猴按性别和年龄分为6组,规定饮食喂养3个月,收集粪便标本,应用16S rRNA测序和生物信息学分析探讨不同性别和年龄恒河猴肠道菌群的差异。结果 雄性和雌性恒河猴肠道菌群多样性无显著差异,但雌性群体中Epsilonproteobacteria和Helicobacter macacae的丰度显著增加。成年和老年恒河猴肠道菌群的多样性均显著高于幼年,Rikenellaceae、Christensenellaceae和Prevotella的丰度在老年群体中显著增加。结论 恒河猴的肠道菌群受性别和年龄的影响,尤其是与代谢和精神疾病相关的Rikenellaceae、Christensenellaceae和Prevotella在老龄恒河猴肠道菌群丰度更高。这些特定肠道菌群在不同性别和不同生命阶段调节机体生理或行为过程中的功能有待进一步研究。 相似文献
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为研究乳酸链球菌素(nisin,NIS)与美罗培南(meropenem,MEM)联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抑菌作用,本研究通过棋盘法联合抑菌试验计算部分抑菌浓度指数(FICI)来评价联用抑菌效果,使用结晶紫染色法半定量检测药物联用对MRSA菌株生物膜生成的影响,最后通过大蜡螟模型观察药物联用对MRSA感染的大蜡螟存活率的影响。结果显示,在乳酸链球菌素组(NIS)、美罗培南组(MEM)和联用组(MEM+NIS)中,MEM+NIS组对三株MRSA分离株均表现为协同抑菌作用,其FICI值分别为0.375、0.5和0.375;作用6 h时,MEM+NIS组与NIS组均可抑制生物膜生成,但组间无统计学差异(P>0.05);大蜡螟生存模型显示,五天后,三株MRSA菌株感染的大蜡螟幼虫的MEM+NIS组生存率分别为30%、80%、30%,其中Yn2020051和Yn2020078,MEM+NIS组的大蜡螟幼虫存活率均高于NIS组、MEM组和阳性对照组(PC),差异均有统计学意义(P<0.05)。 相似文献