MTA1转基因小鼠的构建及鉴定

目的将人的MTAl外源基因整合到C57BL／6J小鼠中,构建稳定高表达MTAl的小鼠模型。方法通过RT—PCR方法克隆人的MTAl编码序列,将MTAl插入真核表达载体pcDNA3．1构建pcDNA3．1-MTAl载体,回收片段后利用显微注射技术将目的基因片段注入到受精卵的雄原核中,使用MTAl特异性的引物经PCR鉴定出基因型阳性的转基因小鼠,再利用Western—blot及免疫组化方法检测MTAl在转基因小鼠全身级织表达情况。结果成功构建了MTAl转基因注射片段。在320枚显微注射受精卵中挑选出300枚存活卵移植到10只ICR小鼠假孕受体的输卵管中,10只ICR小鼠均怀孕,移植成功率为100％,共生出子代鼠80只,经PCR检测其中共有9只整合了MTAl基因,整合率为11．25％。经PCR鉴定MTAl整合阳性的F1代小鼠,再经Western—blot和免疫组化分析检测MTAl表达水平在脑、肺、肝、肠等组织中表达明显增高,肾、骨骼肌表达无差异。结论成功构建了脑、肝、肺、结肠高表达MTAl的转基因小鼠,为进一步MTAl研究奠定了良好的研究模型。     

钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶的结构和功能

钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase, CASK)属于膜相关鸟苷酸激酶（membrane associated guanylate kinase, MAGUK）家族.CASK具有多个不同蛋白质结合结构域，在细胞膜的特定区域，与其他蛋白质形成多种蛋白质复合体，参与组成细胞骨架.它通过衔接细胞外信号蛋白和细胞内骨架蛋白，协助功能蛋白质的转运和定位，以及细胞内的信号传递.此外CASK还可以进入细胞核影响基因转录调控，以及作用在神经突触膜上参与神经递质的释放.     

银染色测定粘虫核多角体病毒多角体基因序列

LsMNPV DNA用EcoRV酶切进行基因组克降,用AcMNPV的部分多角体基因顺序DNA片段作探针,菌落原位杂交法结合测序筛选到分别含LsMNPV部分多角体基因的重组质粒pLsEV1和pLsPH5。用银染色PCR线性扩增双脱氧法测序,发现LsMNPv的完整基因即位于这两个片段上。LsMNPV多角体基因长741bp,编码区碱基同源性与AcMNPV和MbMNPV分别为80.0％和97.0％,氨基酸同源性分别为89.8和97.5％。氨基酸组成中以谷氨酸(Glu)含量最高,谷氨酰胺和色氨酸含量最低。密码子选用以第三个碱基为嘧啶的密码子频率最高。多角体蛋白N端有一类似信号肽结构的26个氨基酸的疏水区。     

腺病毒介导RA538基因转移及其肿瘤抑制作用

采用同源重组方法构建RA5 3 8cDNA重组体腺病毒 ,通过转导人卵巢癌细胞系SK OV 3和人黑色素瘤细胞系WM 983A ,证实腺病毒可高效转导RA5 3 8基因 ,能显著抑制肿瘤细胞的生长 ,其抑制率分别达 85 %和 73 % ;并显著降低两细胞系的集落形成能力 .对两细胞系的裸鼠皮下移植瘤进行治疗实验结果表明 ,RA5 3 8能明显抑制肿瘤的生长 .流式细胞计数和DNA片段化分析证实 ,RA5 3 8可引起肿瘤细胞G1期阻滞和 /或凋亡 .对c myc蛋白的Westernblot分析发现 ,RA5 3 8有明显下调c myc基因表达的作用 .根据这些结果 ,我们认为RA5 3 8重组体腺病毒有可能成为有应用价值的肿瘤基因治疗药物 .     

利用染色体区段混合BAC探针鉴定食管癌细胞中的染色体畸变

染色体畸变是恶性肿瘤细胞的重要遗传学特征, 文章旨在应用BAC DNA克隆鉴定食管癌细胞中的染色体臂和染色体区段的畸变。针对染色体各区段选取5~10个1 Mb BAC DNA, 分别混合制备成特定染色体区段的BAC DNA混合克隆, 然后将染色体臂上覆盖所有区段的上述混合克隆进一步混合制备成特定染色体臂BAC DNA混合克隆。利用简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(Degenerate oligonucleotide primed PCR, DOP-PCR)标记染色体臂探针, 利用切口平移法(Nick translation)标记染色体区段探针, 并对食管癌细胞中期染色体进行荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)分析。正常人外周血淋巴细胞中期染色体FISH结果显示, 上述方法标记的探针具有较高的特异性。进一步利用染色体臂混合探针, 确定了多个食管癌细胞中的染色体重排所涉及的特定染色体臂; 利用染色体区段混合探针, 鉴定出KYSE140的t(1q;7q)衍生染色体中1q上的断点范围位于1q32-q41。文章成功建立了1 Mb BAC DNA混合克隆探针标记技术, 并鉴定出多个食管癌细胞中的染色体臂和染色体区段畸变, 不仅为利用M-FISH技术鉴定肿瘤细胞中的染色体畸变提供了更为准确的方法, 而且还可能进一步将该法推广应用于恶性血液病的核型分析以及产前诊断。     

血浆蛋白质组——人类蛋白质组计划的“探路者”

概述了血浆蛋白的研究现状、难点和策略.血浆是血液中无形的液体成分,是一种十分复杂和多样化的基质,包含数百万种蛋白质和小分子多肽、盐、类脂、氨基酸和糖等.血浆蛋白参与机体免疫、凝血-抗凝血、物质运输、营养和对生长信号调节等多种重要的生理功能.人体器官的病理变化可导致血浆蛋白在结构和数量上的改变,这种特征性的变化对疾病诊断和疗效监测具有十分重要的意义.然而,迄今为止人类对血浆蛋白的了解还十分有限,只有很少一部分血浆蛋白被用于常规的临床诊断.全面而系统地认识健康和疾病状态下血液循环中血浆蛋白的性质,会极大地加速对具有疾病诊断和治疗监测作用的血浆标志蛋白的研发.国际人类蛋白质组组织于2002年首先选择了血浆蛋白质组作为人类蛋白质组首期执行计划之一,其初期目标是：a.比较各种蛋白质组分析技术平台的优点和局限性;b.用这些技术平台分析人类血浆和血清的参考样本;c.建立人类血浆蛋白质组知识库.     

中心体异常和肿瘤

中心体是紧靠细胞核的小体积细胞器,由中心粒和中心粒外周基质(PCM)组成.中心体的蛋白质组成、形态、大小和位置随细胞周期不断发生变化.中心体复制过程与细胞核内其他事件相耦合,并与DNA复制一样,以半保留方式复制.现已发现了许多中心体蛋白及与中心体复制相关的蛋白激酶,调控着中心体复制的各个步骤.中心体复制还受p53,Rb,p21,Gadd45和Brca1/2等多个负性基因调节,中心体异常与基因组不稳定性存在相关性,并有可能与肿瘤发生过程相关.     

硒蛋白P的研究进展

硒蛋白P最初在血浆中发现,占血浆总硒的60%,在其多肽链中有10个硒半胱氨酸。由10个读码框内的UGA编码,而UGA一般是作为终止密码子起作用,故硒蛋白P的生物合成需要多个特异的因子。如特异的tR-NA,延伸因子和mRNA上的特异的二级结构等。硒蛋白P的功能尚不清,初步的研究结果提示可有转运硒,抗氧化,结构重金属和神经营养等作用。