未经休眠处理的体细胞用于异种核移植

自“多莉”诞生以来,在全世界掀起了一场体细胞克隆的浪潮,许多体细胞克隆动物,如小鼠、山羊、牛、猪等纷纷问世。围绕体细胞克隆的供体细胞周期问题,学术界存在两种不同的观点,一是Wilmut等认为体细胞必须经过休眠处理,使细胞停滞在G0/G1期,或者采用以G0/G1期为主的活体细胞作为供体,这是克隆成功的关键,这一方面的报道已有很多。第二是Cibelli等认为不必对细胞作     

雌激素受体信号通路新进展

雌激素通过直接与两类核内雌激素受体ERα和ERβ结合,活化靶基因的转录,这是经典的雌激素受体信号转导途径。近来发现,雌激素受体还能够通过依赖或不依赖雌激素的方式与胞内一些信号通路对话,使自身被磷酸化而活化;雌激素受体还能与其它转录因子相互作用,调节自身或者其它转录因子的活化功能,参与ER阳性细胞的增殖调节。此外,雌激素能通过细胞膜上的雌激素受体进行信号转导,引起靶细胞的快速反应及活化靶基因转录,参与骨和心血管保护。     

富含脯氨酸小蛋白-2在小鼠子宫中的表达及调节

富含脯氨酸小蛋白(Sprrs)参与构建复层扁平上皮的角化细胞壳（CE）,它们在子宫单层上皮中的作用还不清楚.采用RNA印迹和半定量RT-PCR方法,研究了Sprr2在小鼠动情周期和妊娠子宫中的表达及其激素调控.实验结果发现:Sprr2在动情前期和动情期表达上调,而动情后期和间情期表达下调.在妊娠初期表达迅速下调,直至临产期表达重新受到诱导并在产后达到高峰.鉴于其在不同生殖阶段子宫中独特的表达模式和在复层上皮中保护性的功能,推测Sprr2与子宫对交配和分娩所产生的应激反应有关.     

用少量样本进行抑制性消减杂交

利用根据cap-finder方法建立的全长cDNA合成技术,扩增获得了恒河猴着床点子宫内膜组织表达mRNA的双链cDNA,通过抑制性消减杂交,成功地构建了恒河猴着床点消减文库.随机挑选文库中的阳性克隆,经点杂交证明27％为着床点差异表达的克隆.由此表明抑制性消减杂交结合cap-finder扩增全长cDNA的方法,可以有效地从少量而珍贵的样本中获得高质量的消减文库.     

人绒毛膜促性腺激素β亚基DNA疫苗的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)除了在正常的妊娠滋养层细胞中分泌外,在许多肿瘤细胞也大量分泌,是防治hCGβ依赖型癌症的有效目标分子之一.通过RT-PCR方法克隆全长的hCGβ基因,成功构建了PCR3.1-hCGβ DNA疫苗,其能够在HeLa细胞中高效表达hCGβ蛋白,表达的hCGβ蛋白主要存在于细胞内.将20 μg PCR3.1-hCGβ质粒DNA通过普鲁卡因盐酸盐(bupivacaine-HCl)药物诱导后接种小鼠肌肉,小鼠能够吸收质粒DNA,并表达编码的hCGβ蛋白抗原,表达的hCGβ被小鼠的免疫系统识别,同时激发hCGβ抗原特异性的体液免疫和细胞免疫反应,抗体滴度最高可超过1∶8000,并且这两种类型的免疫应答均能够在体外作用于HeLa细胞, 诱导其发生细胞凋亡,表明PCR3.1-hCGβ DNA疫苗激发的免疫反应在体外具有抗肿瘤作用.     

肿瘤基因疫苗的研究进展

基因疫苗技术自从20世纪90年代问世以来被迅速应用到传染病、免疫缺陷、肿瘤等重大疾病的预防和治疗的研究中,有一部分已经进入临床试验阶段.肿瘤基因疫苗可以打破免疫耐受,增强免疫原性,诱导机体产生针对肿瘤的体液和细胞反应,既有预防又有治疗肿瘤的作用.能够防治肿瘤的基因疫苗发展迅猛,主要包括与肿瘤相关抗原（TAAs）有关的全长、表位、独特型（Id）和融合DNA疫苗,能够自主复制的RNA疫苗,与树突细胞（DCs）相关的肿瘤基因疫苗等.肿瘤基因疫苗的分子作用机制及其存在的弊端也日益成为关注的问题.     

卵裂球电脉冲融合制作昆明小鼠四倍体胚胎

为制作四倍体小鼠胚胎 ,用 4种脉冲电压强度 (6 0 0、 80 0、 10 0 0和 12 0 0V/cm )和 3种脉冲宽度(10、 30和 5 0 μs)组合 ,对 2 -细胞昆明小鼠胚胎做了融合实验。 6 0 0V/cm× 5 0 μs和 12 0 0V/cm× 30 μs两种组合融合率最高 ,分别为 91 6 %和 93 0 % ;而 6 0 0V/cm× 10 μs和 12 0 0V/cm× 5 0 μs时均显著低于其他各种组合 ,融合率分别为 5 8 9%和 6 0 2 %。以上结果表明 ,一定的脉冲电压强度是胚胎融合的必要条件 ,而脉冲宽度是影响胚胎融合及其后期发育的关键因素。激光共聚焦显微镜对融合后两细胞核的观察暗示 ,细胞核的迁移、靠近和融合是自发过程     

恒河猴胚胎浅表型植入机理的探讨

为揭示恒河猴胚胎浅表型植入的分子机理,实验采用免疫组化和原位杂交的方法研究了粘附侵润相关分子在妊娠恒河猴母胎界面的表达模式,发现层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在滋养层细胞柱的远端开始表达;整合素α1β1从柱的近端到远端表达逐渐升高,但在滋养层细胞鞘中上述分子的表达均降低;大量侵润母体血管的滋养层细胞高水平表达上述分子。此外,植入早期上皮斑和蜕膜基质细胞高表达MMPs组织抑制因子-2(TIMP-2)。结果提示,滋养层细胞鞘中α1β1、LN、MMP-2表达水平的降低及上皮斑、蜕膜和滋养层细胞中TIMP-2的高表达可能是导致浅表型植入形成的分子基础。     

转化生长因子-β信号传导的Smad通路

转化生长因子-β(TGF-b)的信号传导主要通过激活Smad通路实现, Smads复合物与靶基因启动子结合完成对基因转录的调控作用. 多种转录共激活因子和转录共抑制因子与Smads直接结合, 从而协同参与Smads与基因启动子的结合以及对基因转录的调控. 泛素-蛋白水解酶复合体通路(UPP)对Smads的降解是Smad通路的终止机制. TGF- β也能激活MAPK通路等其他信号通路. Smad通路和其他信号通路之间的对话构成了TGF-β信号传导的复杂调节网络.