匙羹藤组织培养条件优化研究

以匙羹藤无菌种子苗为外植体,通过预备实验确定基本培养基后,采用完全实验和正交设计相结合的方法,研究植物生长调节剂两因素配合和多因素组合(NAA、TDZ、2-ip、IAA、6-BA和KT)对匙羹藤芽体诱导及继代培养的影响。结果显示,匙羹藤组织培养最适的基本培养基为N68;N68+NAA0.05mg/L+2-ip0.4mg/L+TDZ0.001mg/L利于芽体增殖,可用于继代培养;N68+NAA0.05mg/L+TDZ0.005mg/L促进植株长根,可用于生根培养。     

转基因斑马鱼分析胰岛β-细胞发育情况

斑马鱼的个体小、高产和体外受精等特点使其已经迅速成为研究脊椎动物器官发育和人类疾病的模式生物之一。我们建立了一个转基因斑马鱼动物模型来研究胰岛β-细胞的发育。首先,构建了斑马鱼胰岛素（Insulin ,INS） 启动子与绿色荧光蛋白(GFP) 组成的表达载体, 命名为INS:GFP。其次,将质粒在斑马鱼1-细胞期注射到细胞质内。最后我们成功获得了生殖系稳定遗传胰岛素转基因斑马鱼,在成鱼和幼鱼期均可以通过GFP标记β-细胞。通过方便的荧光筛选,我们观察到胰岛在受精后18h开始形成,1－5d后由初始的脊索中线两侧向右迁移。从我们构建的胰岛素转基因斑马鱼,可以直观判断胰岛的发育情况,为研究胰岛的发育、损伤和再生提供了一个简便和直观的新型工具。     

烟草花叶病毒对烟草叶片光合特征和POD表达的影响

以烤烟(Nicotiana tabacum L.)品种'中烟5号'为实验材料,对烟草健康株与感染烟草花叶病毒(TMV)株的叶绿素、光合速率、光合速率对光强的响应曲线、光暗反应荧光特征、POD活性及其表达等进行研究,以探讨TMV感染对烟草植株生理生态特征的影响.结果显示:病株的叶绿素a(Chl a)和叶绿素b(Chl b)含量显著低于健康株,但Chl a/Chl b值基本相同;病株暗中初始荧光(F0)、暗中最大荧光(Fm)、暗中可变荧光(Fv)、光下初始荧光(F0′)、光下最大荧光(Fm′)、光下可变荧光(Fv′)、非光化学猝灭系数(NPQ)、PSⅡ捕光效率(Fv′/Fm′)、PSⅡ实际光化学效率(ФPSⅡ)及光饱和点显著低于健康株;净光合速率在光强较大(＞1 500 μmol·m-2·s-1)时病株比健康株低,光强适中(1 500 μmol·m-2·s-1左右)时两者相差不大,光强较弱(＜1 500 μmol·m-2·s-1左右)时病株比健康株高;病株叶片的过氧化物酶(POD)活性显著升高,POD同工酶中一些大分子量蛋白分子表达量加大.研究表明,感染TMV使烟草植株对光抑制更为敏感,叶片的荧光激发能力和热耗散能力下降,PSⅡ反应中心捕光效率和光化学反应效率降低,光合电子传递能力和碳同化能力受到抑制;POD活性提高和表达量增加可能是诱导烟草抗病性的一个关键生理过程.     

广东寒害过程温度动态监测模型水

利用1:250000 DEM数据和气象站气温实时观测数据,在对气象站温度数据进行分布检验并选用普通克里格进行内插的基础上,通过气温直减率、坡地太阳辐射模型以及辐射与温度之间的相关关系,对实际地形下,广东省2008年1月13日-2月13日寒害过程的日平均气温进行了分布式模拟.经检验,模拟结果具有较高的精度.     

广东寒害过程温度动态监测模型

利用1∶250000 DEM数据和气象站气温实时观测数据,在对气象站温度数据进行分布检验并选用普通克里格进行内插的基础上,通过气温直减率、坡地太阳辐射模型以及辐射与温度之间的相关关系,对实际地形下,广东省2008年1月13日—2月13日寒害过程的日平均气温进行了分布式模拟。经检验,模拟结果具有较高的精度。     

hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平.在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段.与表达载体PET-30a连接,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱,收集洗脱峰.对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性.结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%.经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素.Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性.获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料.     

福建维管束植物2个新记录属及6个新记录种

根据野外考察,报道福建2新记录属:莼菜属和牧根草属;6新记录种:莼菜、球果牧根草、岭南山竹子、蔓芒萁、两广黄檀、林猪殃殃.     

不同基础体温的家兔对热原检查结果的影响

对实验中使用的普通级家兔基础体温进行统计,观察不同基础体温家兔注射血液制品后的升温情况。按照中华人民共和国药典(2005)年版三部的热原检查规定进行测定,将实验家兔基础体温38.0℃~39.6℃分为3组:38.0℃~38.5℃为1组;38.6℃~39.0℃为2组;39.1℃~39.6℃为3组。注射制品后,家兔升温≥0.4℃记为升温家兔,统计升温≥0.4℃的家兔升温百分率并对其进行统计学处理。经卡方检验,升温家兔≥0.4℃的百分率1组与2组、1组与3组有显著性差异(p<0.05);2组与3组无显著性差异(p>0.05)。家兔对热原的敏感性随基础体温的高低而有明显的差异,基础体温偏低的家兔对热原更敏感,其升温幅度大于基础体温偏高的家兔。     

氧化硅包裹的磁性纳米粒子纯化质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位.本文采用氧化硅包裹的磁性纳米粒子,平均粒径为20 nm左右,在外加磁场的作用下,从细胞粗提掖中快速分离质粒DNA.用这种方法成功地从大肠杆菌DH5α浓缩和纯化得到了pUC19质粒,该质粒具有生物活性,可直接用于限制性酶切和细胞转化等分子生物学下游操作.     

抗黄曲霉毒素B1单链抗体在大肠杆菌中的表达及优化

摘要：【目的】继杂交瘤技术后,重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体,避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上,分别转入大肠杆菌BL21（DE3）和Origami（DE3）中,通过改变诱导温度和IPTG浓度,比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21（DE3）中,pET22b能产生大量表达scFv-H4,而BL21(DE3) 的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami（DE3）表达的scFv-H4的总量较少,但是具有生物活性的蛋白量较多（35 mg/L培养物）,具有生物活性的蛋白比例也较BL21（DE3）高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响,而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下,pET22b能在Origami（DE3）能较好地表达具有生物活性的scFv-H4,减少包涵体的比例,为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。