苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构与功能研究进展

苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）杀虫晶体蛋白的毒性肽由三个典型的结构域组成.结构域Ⅰ位于肽链的N端,为一组由6～7个两亲的α螺旋围绕着一个疏水的α螺旋形成的α螺旋束,参与了细胞膜的穿孔;结构域Ⅱ位于肽链的中间,为三组以“希腊钥匙”（Greek key）拓扑结构连接在一起的反平行的β折叠片层,其顶端的突环参与了毒素与受体蛋白的结合;位于C端的结构域Ⅲ是由两组反平行的β折叠片层组成的夹心结构,以β果酱卷(jelly roll)拓扑结构排列,可能能够防止蛋白酶对毒素分子的过度降解.     

苏云金芽胞杆菌以色列亚种20kDa蛋白质对CytA蛋白溶细胞作用的影响

为了证明苏云金芽胞杆菌以色列亚种２０ｋＤｅ蛋白质对ＣｙｔＡ蛋白溶细胞作用的影响, 根据２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因的核苷酸序列,用ＡＭＰＬＩＦＹ程序设计了一套带有酶切位 点的引物,经ＰＣＲ扩增分别获得了２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因。将其基因与表达载体 ｐＵＨＥ２４连接并转化到大肠杆菌ＸＬＩ和ＤＨＳ 分别获得含２０ｋＤａ蛋白质基因的克隆子 ＬＺ２９;含ｃｙｔＡ基因的克隆子ＬＺｃｙｔＡ和含有二者基因的重组子ＬＺ２０Ａ．在ＩＰＴＧ诱导下,测定 了不同克隆株基因表达产物对大肠杆菌细胞生长的影响。结果表明：ＬＺ２０的细胞生长不受影 响;ＬＺｃｙｔＡ的细胞被杀死;ＬＺ２０Ａ的细胞生长也不受影响。这表明２０ｋＤａ蛋白质基因与ｃｙｔＡ 蛋白基因重组后,２０ｋＤａ蛋白质基因表达产物可保护ＣｙｔＡ蛋白对大肠杆菌的溶细胞作用,而 巳这种作用并不因不同大肠杆菌受体而改变。     

转化cry1C基因对苏云金芽胞杆菌杀虫活性的影响

将含基因cry1C的质粒,通过电脉冲法转入含基因cry1C的质粒,通过电泳冲法转入含基因cry1Ab、cry1Ac和cry2的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽胞杆菌野生菌株YBT－803－1中,得到转化子MBMY－003。PCR和SDS－PAGE分析显示,cry1C可在其中正常复制、表达,但使受体菌部分内源质粒发生丢失。生物测定结果表明,转化子MBMY－003既对甜菜蛾有毒力,LC50值为1．178μL／mL,高于出发菌株YBT－803－1（LC501．879μL／mL）,也对小菜蛾有毒力,LC50值为1．968μL／mL,低于YBKT－803－1（LC501．143μL／mL）。表明cry1C转入后,提高了野生菌株YBT－803－1对甜菜夜蛾的毒力,却降低了对小菜蛾的毒力。