腾冲嗜酸热两面菌S5分子伴侣β亚基的表达、纯化和活性的初步分析

用NdeI和BamHI酶切回收腾冲嗜酸热两面菌S5的分子伴侣β亚基基因片段插入pET-23b的相应位置,并分别在BL21(DE3)和Rosetta-gami~(TM)B(DE3)pLysS中表达。表达的β亚基以可溶的形式存在。β亚基在Rosetta-gami~(TM)B(DE3)pLysS中表达较高,其占菌体总蛋白的16．2%,且以单体和聚体形式同时存在。表达的菌体经超声破碎、70℃热处理后,上清中β亚基蛋白含量达到30%,再经(NH_4)_2SO_4沉淀、Bio-Gel A-1．5m和DEAE-Sepharose CL-6B柱层析,得到在SDS-PAGE呈电泳均一的β亚基,Native-PAGE表明其为聚体,有弱的ATPase活性。     

小溪国家自然保护区环境对生物的影响及生物适应性调查和研究

小溪自然保护区于1982年建立,2001年6月被批准为国家级森林生态自然保护区。主要保护对象为低海拔天然次生林。保护区位于永顺县东南部(东经110′15″、北纬28′45″),为云贵高原向东隆起的古隆块边缘。武陵山脉南支,属新华夏地址构造。它毗邻张家界国家森林公园和猛洞河风景名胜区,总面积24800hm^2。其中核心区6133hm^2,属亚热带低海拔常绿阔叶原始次森林,     

TERRA介导的端粒维持

真核细胞线状染色体末端特殊结构被称为端粒,而端粒维持对于生命体来说具有十分重要的意义,其维持机制也十分复杂.端粒酶可以通过其具有的特殊逆转录酶特性,利用自身的RNA模板(TERC)以及具有催化功能的蛋白质亚基(TERT)延长端粒,维持其长度.本文着重综述端粒TERRA (telomeric repeat-containing RNA)对端粒维持的影响及其作用机制.首先介绍端粒维持与细胞存活老化之间的关系;其次,阐述TERRA的结构及其转录特性,TERRA依赖的DNA∶RNA杂合体和R-loop形成和结构特点,TERRA结合蛋白及其作用;进而讨论依赖于TERRA的端粒维护分子机制以及在生命过程中的意义.     

DNA甲基化作用与鼠肝细胞的老化

本文比较了不同年龄的鼠肝ＤＮＡ甲基化酶活力及ＤＮＡ甲基化水平,发现它们均与鼠龄呈反相关。又以不同年龄的鼠肝ＤＮＡ为模板,检验了其体外转录活力,发现其与鼠龄呈正相关。     

尿毒症维持性血液透析患者衰弱的影响因素分析及其对认知功能和微炎症状态的影响

摘要 目的：探讨尿毒症维持性血液透析（MHD）患者衰弱的影响因素,分析其对认知功能和微炎症状态的影响。方法：回顾性分析2020年4月~2022年7月期间江苏省人民医院收治的105例尿毒症MHD 患者的临床资料,根据衰弱评分将患者分为无衰弱组（n=38）、衰弱前期组（n=34）、衰弱组（n=33）。根据病例资料获取患者的一般资料和实验室资料,对比三组一般资料和实验室资料、认知功能情况;采用多因素Logistic回归分析尿毒症MHD患者衰弱的影响因素。结果：无衰弱组、衰弱前期组、衰弱组的年龄、透析龄、吸烟史、饮酒史、运动情况、合并症、白蛋白（ALB）、血红蛋白（Hb）、前白蛋白（PA）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、25-羟维生素D[25-（OH）D]、甲状旁腺激素（PTH）组间对比有差异（P<0.05）。衰弱组的C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）高于无衰弱组、衰弱前期组,且衰弱前期组高于无衰弱组（P<0.05）。衰弱组的简易精神状态检查量表（MMSE）评分低于无衰弱组、衰弱前期组,且衰弱前期组低于无衰弱组（P<0.05）。衰弱组的认知功能障碍（POCD）发生率高于无衰弱组、衰弱前期组,且衰弱前期组高于无衰弱组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：并发症、ALB偏低、Hb偏低、PA偏低、25-（OH）D偏低、CRP偏高、IL-6偏高、TNF-α偏高、MMSE评分偏低是尿毒症MHD患者衰弱危险因素,而经常运动是其保护因素（P<0.05）。结论：尿毒症MHD患者衰弱的发生率较高,可导致患者认知功能下降,微炎症程度升高,与并发症、ALB、Hb、PA、25-（OH）D、CRP、IL-6、TNF-α、MMSE评分、运动情况等多种因素相关。     

狼毒大戟三萜类和酸类化合物的分离鉴定

用溶剂提取和硅胶柱色谱方法,从狼毒大戟中分得两个三萜化合物和一个酸类化合物,经物理常数和色谱分析鉴定为羽扇豆酮、羽扇豆醇乙酯和没食子酸。     

反向PCR方法克隆腾冲嗜酸两面菌的分子伴侣基因

根据已知的Sulfolobus属的分子伴侣基因,设计简并引物,用PCR的方法从腾冲嗜酸两面菌（Acidianus tengchongensis）基因组DNA中分别克隆到了分子伴侣α亚基和β亚基的约500bp的基因片段。以它们为探针进行Southern杂交,确定了合适的限制性内切酶。以确定的限制性内切酶消化的基因组DNA环化物为模板,进行反向PCR反应,引物的延伸方向由已知序列出发沿环化分子向未知区域进行,扩增产物经测序表明为α亚基和β亚基基因。根据所得序列分别设计两对引物进行PCR,测序结果表明得到了α亚基和β亚基的完整基因。     

5－氮－2＇－脱氧胞苷（5－aza－CdR）对HL－60细胞分化和DNA甲基化酶的影响

以５－氮－２＇－脱氧胞苷（５－ａｚａ－ＣｄＲ）为诱导物,在０．５μｍｏｌ／Ｌ的最佳浓度下,可诱导ＨＬ－６０细胞分化达１５％左右。同时,用［￣３Ｈ］－ｍｅｔｈｙｌ－ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ（￣３Ｈ－ＳＡＭ）为底物,通过同位素参入法,测定了不同浓度诱导物对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ甲基化酶活力的影响,发现在最佳诱导物浓度下,可使ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ甲基化酶活力明显下降,此外,也比较了不同分化水平的ＨＬ－６０细胞中具有不同甲基化水平的ＤＮＡ在体外接受甲基的能力,从而证明５－ａｚａ－ＣｄＲ诱导ＨＬ－６０细胞分化与其ＤＮＡ甲基化状态密切相关。     

反向PCR方法克隆腾冲嗜酸两面菌的分子伴侣基因*

根据已知的Sulfolobus属的分子伴侣基因,设计简并引物,用PCR的方法从腾冲嗜酸两面菌(Acidianus tengchongensis)基因组DNA中分别克隆到了分子伴侣α亚基和β亚基的约500bp的基因片段。以它们为探针进行Southern杂交,确定了合适的限制性内切酶。以确定的限制性内切酶消化的基因组DNA环化物为模板,进行反向PCR反应,引物的延伸方向由已知序列出发沿环化分子向未知区域进行,扩增产物经测序表明为α亚基和β亚基基因。根据所得序列分别设计两对引物进行PCR,测序结果     

从基因工程菌分离纯化心钠素

以高效表达的基因工程菌为材料,对以包涵体形式存在的目的产物——心钠素（ＡＮＦ）融合蛋白进行了酶切及分离纯化．先用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和低浓度尿素、盐酸胍洗涤,提高包涵体的纯度．再用高浓度的尿素处理,使蛋白变性溶解,脱氧胆酸钠对蛋白有明显的促溶作用．解决变性蛋白质去除变性剂时的聚合问题．在非变性条件下进行ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＦＰＬＣ系统纯化,得到目的融合蛋白．用凝血酶对融合蛋白作特异性切割,释放出ＡＮＦ小肽,经ＦＰＬＣ分离鉴定,与标准ＡＮＦ有相同的ＴＲ值,说明其纯度已达均一．生物活性检测表明：有明显的放免活性和舒张血管、利尿的生理活性