哺乳动物PUF家族蛋白PUMILIO1的伴侣蛋白研究

目的:探索NIH3T3和DU145细胞中PUM1蛋白的伴侣蛋白。方法:收集NIH3T3和DU145细胞进行免疫沉淀实验,实验组和对照组分别使用抗PUM1抗体和抗Goat-Ig G抗体。通过银染实验观察实验组与对照组是否有差异性条带,通过质谱鉴定和Mascot软件对差异性条带所包含的蛋白进行分析,鉴定PUM1蛋白在细胞中发挥作用时的可能互动蛋白。结果:在NIH3T3和DU145细胞银染实验中,实验组凝胶泳道均在约37 KD处出现差异性条带。对NIH3T3细胞中差异性条带进行质谱分析,通过Mascot软件肽质量指纹谱搜索,将有真实差异的蛋白评分最低阈值设为65,P0.05,结果显示肽段评分最高的蛋白为NDFIP2蛋白。与NCBInr数据库比对,检测到针对NDFIP2的肽段的覆盖率为40%。结论:NDFIP2与哺乳动物PUM1蛋白在细胞内关联,可能是PUF家族蛋白的伴侣蛋白。     

R-spondin2调控Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对骨骼系统的影响

R-spondin2 (Rspo2)是蛋白质家族RSPOs成员之一,其可以通过富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4/5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 4/5,LGR4/5)、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNRF3/RNF43 (zinc and ring finger 3/ring finger protein 43)、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（heparan sulfate proteoglycans,HSPGs）和含GTP酶激活蛋白质1的IQ基序（IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1）来调控Wnt/β连环蛋白（catenin）信号通路,Wnt/β-catenin信号通路是目前研究最广泛且与基础骨生物学直接相关的信号通路,该通路中任何一环节出现问题都可能对骨的调控产生影响。近年来研究发现,Rspo2可以通过Wnt/β-catenin对成骨细胞（osteoblast,OB）、破骨细胞（osteoclast,OC）和软骨细胞产生作用,并参...     

HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

从HIV-1 ⅢB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体.阳性克隆转染E.coli BL21 DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%.包涵体经Triton X-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyl s-200 H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩.经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性.用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选.     

新生儿高胆红素血症与先天性巨细胞病毒感染的相关性研究

目的:探讨新生儿高胆红素血症与巨细胞病毒(HCMV)感染的相关性及临床意义。方法:对170例疑为高胆红素血症新生儿血清标本分别检测HCMV的IgG和IgM及血清总胆红素(TBIL)。排除高胆红素血症新生儿血清标本100例为正常对照。结果:高胆红素血症患者血清HCMV-IgG、IgM阳性率高于正常对照组,两者比较有统计学意义。结论:巨细胞病毒感染与新生儿高胆红素血症相关性大,是引起高胆红素血症的主要病原之一。     

藏红花花瓣和雄蕊挥发油化学成分GC-MS分析及比较

采用水蒸气蒸馏法从藏红花花瓣和雄蕊中提取挥发油,用GC-MS技术结合计算机检索对其二者化学成分进行分离和鉴定,用色谱峰面积归一化法计算各组分的相对含量.花瓣中共鉴定出16种化合物,主要成分为正二十六烷(11.60％)、正十五烷(11.31％)、棕榈酸甲酯(10.82％)、油酸甲酯(10.35％)、2,4-二叔丁基苯酚(9.63％)、亚油酸甲酯(7.18％)、藏红花醛(5.66％);雄蕊中共鉴定出20种化合物,主要成分为油酸甲酯(30.83％)、亚油酸甲酯(24.12％)、环已醇(16.80％)、硬脂酸甲酯(12.88％)、棕榈酸甲酯(8.97％)、花生酸甲酯(1.18％)、苯并噻唑(1.01％).     

PINK1/Parkin介导的线粒体自噬

线粒体自噬（mitochondrial autophagy, or mitophagy）指的是细胞通过自吞噬作用,降解与清除受损线粒体或者多余线粒体,其对整个线粒体网络的功能完整性和细胞存活具有重要作用。线粒体自噬过程受多种途径调控,PINK1/Parkin通路是其中的一条,其异常与多种疾病的发生密切相关,如心血管疾病、肿瘤和帕金森病等。在去极化线粒体中,磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)诱导的激酶1（PTEN-induced kinase 1,PINK1）作为受损线粒体的分子传感器,触发线粒体自噬的起始信号,并将Parkin募集至线粒体;Parkin作为线粒体自噬信号的“增强子”,通过对线粒体蛋白质进一步泛素化介导自噬信号的扩大;去泛素化酶和PTEN-long蛋白参与调控该过程,并对维持线粒体稳态具有重要作用。本文主要对PINK1与Parkin蛋白质的分子结构和其介导线粒体自噬发生的分子机制,以及参与调控该途径的关键蛋白质进行综述,为进一步研究以线粒体自噬缺陷为特征的疾病治疗提供理论基础。     

作用于种属差异性表位的细菌α-半乳糖苷酶(EmGalase)的鉴定和研究

对脑膜炎败血伊丽莎白金菌进行糖苷酶功能基因组分析发现,该菌存在一个GH27家族α-半乳糖苷酶基因。克隆该基因并表达蛋白后,利用人工合成的pNP底物研究其酶学性质,发现该酶具有α连接的半乳糖(α-galactose,α-Gal)底物特异性,酶反应pH为3.0~8.0,反应温度为4~45 ℃。用不同寡糖底物进一步确定,该酶能够酶切直链末端α-1,3、1,4、1,6Gal。在猪红细胞上进行的酶切实验显示,该酶能够高效清除存在于猪红细胞表面的末端Gal α 1-3Gal表位。末端α-半乳糖基化修饰在免疫与感染中发挥着重要的生物学作用,作用于种属差异性表位的细菌α-半乳糖苷酶的发现将为该领域的研究提供一个新的工具,为缓解异种输血中的超急性免疫排斥反应提供一种可能。     

紫杉菌属——中国新记录属

报道了口蘑科中国新记录属——紫杉菌属。并基于形态特征及分子系统学方法描述了中国新记录种粗壮紫杉菌,标本采自中国浙江省丽水市。该种的鉴别特征是子实体中型,菌盖浅黄褐色,中央黄褐色至深褐色,具有不连续的褐色锥状鳞片,菌褶直生,菌柄圆柱状,中实,基部略膨大,菌环以下污白色,具近似于盖上的锥状小鳞片,常脱落。菌环膜质,易脱落;担孢子椭圆形至宽椭圆形,表面具疣状纹饰,非淀粉质;褶缘囊状体和侧生囊状体缺失,菌盖鳞片由匍匐或半直立状菌丝组成,末端细胞圆柱状,无球针状囊状体,分支,具硬壳。     

数码摄像机在显微镜教学中的应用

利用数码摄像机将显微镜内的显微图像转变成视频信号,再传输到电视机或电脑中,通过电视机或投影机银幕展示给学生观察,实现非数码显微镜关于显微图像的演示和贮存功能。     

白蜡外齿茎蜂幼虫龄数和龄期测定

为掌握白蜡外齿茎蜂Stenocephus fraxini幼虫的龄数和发育历期,本文测量了幼虫体长、头宽、体宽(胸部第3节)、尾铗长和尾铗基径宽等5项指标.经频次分布和回归分析,结果表明:白蜡外齿茎蜂幼虫可分5龄.头宽和尾铗基径宽均可作为分龄指标.各龄头宽值分别为:0.414±0.002、0.526±0.002、0.713±0.005、1.003±0.006、1.398±0.010 mm;尾铗基径宽值分别为:0.060±0.001、0.095±0.001、0.150±0.002、0.231±0.002、0.344±0.005 mm.1～5龄幼虫平均龄期分别为2.5、3.5、5、8、40 d,整个幼虫历期约50～70 d,平均60 d左右.