利用Tol2转座子介导的增强子诱捕技术获得血管相关转基因斑马鱼系

心血管系统形成于胚胎发育极早期并为其他器官的发育、维持、修复所必需,血管生长异常可造成多种疾病.然而,由于研究对象所限,胚胎血管的发育机制尚未完全阐明,调控血管发育的基因也所知有限.通过Tol2转座子介导的大规模增强子诱捕筛选到26个血管特异表达绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的转基因斑马鱼系,其中有一些品系在胚胎的某些特异血管结构中表达绿色荧光.通过linker-mediated PCR克隆到22个鱼系中Tol2插入位点附近的斑马鱼基因组序列,其中有17个鱼系的Tol2插入可定位到现有的斑马鱼基因组中的单一位点.通过整体胚胎原位杂交对插入位点附近的基因进行表达谱分析,得到8个表达谱与转基因鱼系一致的基因,涵盖了9个鱼系,其中dusp5基因对应于2个不同的鱼系.这8个基因中包括hhex、ets1a和dusp5等3个功能已知的基因,但是大部分(5个)基因在斑马鱼中尚无功能研究,分别为zvsg1、micall2a、arl8b(1of2)、zgc:73355以及hecw2(1of2).hhex和ets1a基因对血管与血细胞前体的发育具有重要作用,所获得的EGFP报告基因受hhex或ets1a基因增强子控制的转基因斑马鱼(mp378b和mp430c-2)为国际首例,为深入研究这两个基因在血管与血液发育中的作用机制提供了新的机遇.筛选到的功能未知基因可以用来进一步研究其在血管发育中的功能;同时,利用所获得的转基因鱼系,可以实现实时、动态观察成血管细胞的起源、分化与基因表达调控,并可用于高通量小分子药物筛选等重要研究.     

中国科学院实验海洋生物学重点实验室

成立于1987年的中国科学院实验海洋生物学重点实验室是我国较早开展海洋科学方面的重点实验室,也是我国海洋生物技术与开发的重要基地。实验室围绕国家战略需求和国际海洋学科的前沿,瞄准我国海洋生物资源可持续利用的重大基础理论问题,针对制约我国海水增养殖发展和海洋天然产物开发利用的一系列“瓶颈”因素,开展相关的基础研究以及高新技术探索,为我国海洋经济和社会可持续发展提供科学依据和源头创新。     

鲤鱼发育早期HPG轴和GH/IGF轴相关因子的转录起始分析

采用RT-PCR的方法,以不同发育时期的鲤鱼胚胎和幼鱼为材料,研究了与鱼类生殖相关的HPG轴以及与生长相关的GH/IGF轴中GnRH、GtH以及GH、GHR和IGF重要信号分子的转录起始特征.结果显示,sGnRH、cGnRH、GtH-Ⅰβ卢亚基和GHR于鲤鱼胚胎受精后20h开始转录,IGF-1于受精后23h开始转录,GtH-Ⅱβ亚基于受精后26h开始转录,GtH α亚基于受精后46h开始转录,GH于1dph(孵出后第1天)开始转录.其中,GHR和IGF-1均早于GH开始转录,GtH α亚基和β亚基的转录起始时间不同步.研究结果为揭示鲤鱼生殖与生长间的调控机制积累了重要的科学依据.     

生长激素及其基因转移对鱼类生长和

生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压的调节起着重要作用.转生长激素基因鱼表现出明显的快速生长效应.生长激素促进了鲑科鱼类对海水的适应能力.本文对此进行了综述,并讨论了生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压调节作用的生理机制、生长激素与胰岛素样生长因子以及甲状腺激素的关系.     

应用雄性激素诱导异育银鲫性转化的研究

用丙酸睾丸素溶液浸泡行雌核发育的异育银鲫(Allogynogenetic crucian carp)胚胎10～14天,诱导出了11.0％～13.6％的雄性鱼和10.5％～27.3％的兼性鱼。对50日龄的异育银鲫幼鱼投喂甲基睾丸素4个月,再继续饲养182～335天,诱导出了20％以上的雄性鱼。此外,部分实验鱼两侧卵巢的大小出现明显差异。 Abstract：The embryos of allogynogenetic crucian carp were soaked in testosterone propionate for 10～14 days,11.0％～13.6％ fry were induced to be physiological males and 10.5％～27.3％ fry developed into bisexual sterile.The 50-day old fish were fed diet containing methyltestosterone for 4 months and then reared for 182～335 days.More than 20％ fry developed into males.In addition,the ovaries in both sides of some treated fish were significantly different in size.