基于UPLC-QTOFMS正、负离子模式对无偿献血者乙型肝炎表面抗原阳性血清代谢组学的研究

目的:基于超高效液相色谱-单四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOFMS)正、负离子模式探讨无偿献血者中乙型肝炎表面抗原阳性和乙型肝炎表面抗原阴性的血清代谢组学的差异,为乙型肝炎的诊断寻找潜在的血清生物标志物。方法:选取2017年10月~2018年1月在青海省血液中心检测的乙型肝炎表面抗原阳性57例(研究组)与同期无偿献血者乙型肝炎表面抗原阴性63例(对照组),利用UPLC-QTOFMS技术建立两组血清代谢指纹图谱,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)分析两组间有差异的小分子物质,确定与乙型肝炎相关的生物标志物,并分析相关代谢机制。结果:通过变量重要性投影、质谱鉴定和数据库检索筛选出8个潜在的生物标志物,分别为缬氨酸、胆碱、甘氨鹅去氧胆酸、肉毒碱、高丝氨酸、溶血磷脂酰胆碱、血清溶菌酶和花生四烯酸,涉及胆汁酸代谢、氨基酸代谢、磷脂代谢等。结论:无偿献血者中乙型肝炎表面抗原阳性和乙型肝炎表面抗原阴性的血清代谢物存在显著差异,差异代谢物的发现有助于寻找乙型肝炎的潜在生物标志物,为血液安全提供依据。     

紫叶狼尾草的组织培养与快速繁殖

以紫叶狼尾草（Pennisetum setaceum‘Rubrum’）的茎尖或带腋芽的节间为外植体材料,进行了组培快繁技术的实验研究,建立了离体快繁技术体系。结果表明,以MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+IBA 0.5 mg·L^-1为较适宜的外植体诱导丛生芽的培养基;以MS+6-BA 1.5 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+IBA 0.5 mg·L^-1为最佳继代增殖培养基,增殖系数达6.5;以1/2MS+NAA 0.5 mg·L^-1+IBA 0.5 mg·L^-1为最佳生根培养基,生根率100%;将生根组培苗移栽炼苗,30 d后成活率达98%以上。     

圆红冬孢酵母磷酸盐饥饿诱导表达载体的构建

摘要:【目的】建立一种适用于圆红冬孢酵母代谢工程的磷酸盐饥饿诱导表达系统。【方法】对圆红冬孢酵母pho89基因5'侧翼序列进行生物信息学分析,设计相应引物,PCR扩增pho89基因启动子(pPHO89)和hsp70基因终止子(tHSP),利用RF克隆方法置换出发载体上的pPGK组成型启动子和tNOS终止子,以潮霉素磷酸转移酶基因hyg为报告基因,得到响应磷酸盐饥饿诱导的单表达盒载体pZPK-pPHO89-hyg-tHSP,利用ATMT方法转化圆红冬孢酵母,通过转化子潮霉素抗性表型鉴定pPHO89和tHSP的启动子和终止子活 性。在此基础上,构建了适合外源基因表达的双表达盒诱导表达载体pZPK-HYG-pPHO89-MCS-tHSP,并利用该载体构建了苹果酸酶重组表达菌株。【结果】成功构建了响应磷酸盐饥饿的圆红冬孢酵母诱导性表达载体,该载体在圆红冬孢酵母中可表现出启动子和终止子活性。【结论】该启动子受磷酸盐浓度的严谨调节,响应度高,操作简单,无需额外诱导剂,经济便捷,为后续圆红冬孢酵母代谢工程研究提供了基本材料。     

复杂性热性惊厥脑电图特征与癫痫发生的相关性

目的：探讨复杂性热性惊厥脑电图特征与癫痫发生的相关性。方法：2012年3 月到2014 年5 月选择在我院诊治为复杂性热 性惊厥的呼吸道感染患儿86 例作为观察组,同期选择在我院诊治的非热性惊厥的呼吸道感染患儿86 例作为对照组,两组都进 行脑电图监测与认知功能判定,对癫痫发生情况进行判定与分析。结果：观察组的言语智商、行为智商与总智商评分都明显低于 对照组(P<0.05)。观察组的癫痫发生率为9.3 %,脑电图异常率为8.1 %;而对照组的癫痫发生率为1.2 %,脑电图异常率为2.3 %, 对比差异都有统计学意义(P<0.05)。在观察组患儿中,Spearman 相关性分析显示脑电图异常与癫痫发生存在明显正向相关性(r=0. 349,P<0.05)。结论：复杂性热性惊厥伴随有脑电图异常,与癫痫发生存在明显正向相关性,损害患儿的认知功能。     

过氧化氢对内皮祖细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:比较不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对人外周血来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生存能力的改变及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:采用密度梯度离心法和差速贴壁法从人外周静脉血中分离培养内皮祖细胞。选取传代后第3代EPCs作为研究对象,以终浓度分别为50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L、300μmol/L和400μmol/L的过氧化氢处理内皮祖细胞12 h,同时设立正常处理对照组。CCK-8法检测各组内皮祖细胞生存能力的差异;Western blot分析各组内皮祖细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和p53的蛋白表达情况。结果:与对照组相比,在浓度为50μmol/L、100μmol/L和150μmol/L过氧化氢处理组中细胞存活能力逐渐增强,促凋亡蛋白Bax、p53随之下调,抗凋亡蛋白Bcl-2则显著上调;在浓度为200μmol/L、300μmol/L和400μmol/L过氧化氢处理组中细胞生存能力相对于正常对照组逐渐减弱,促凋亡蛋白Bax、p53表达水平逐渐增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降。结论:过氧化氢对内皮祖细胞存活能力和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53表达的影响均呈双相性变化。     

荒漠植物红砂抗旱性与其电学参数关系的研究

为了研究电学参数与红砂(Reaumuria soongorica)抗旱性的关系,以4个地理种源的荒漠植物红砂2年生苗木为材料,测定其茎在不同干旱胁迫处理下的高频电阻(r)、低频电阻(rl)、胞外电阻率(re)、胞内电阻率(ri)、电导(G)和电纳(B)等电学参数以及膜透性(RPP)和渗透调节物质脯氨酸(Pro)含量的变化,分析电学参数与膜透性和脯氨酸含量间的相关性。结果显示,随着干旱胁迫的加剧,4个地理种源红砂茎的膜透性和脯氨酸含量均呈逐渐升高或先升高后降低趋势,不同种源间存在显著差异(P0.05)。红砂茎膜透性的大小在4个种源间表现为:兰州张掖酒泉武威,脯氨酸含量由高到低依次为武威酒泉张掖兰州。4个地理种源红砂茎的高频电阻呈逐渐下降趋势,胞外电阻率、胞内电阻率、电导呈先升高后降低的趋势,而低频电阻则与它们相反,电纳的变化则较为复杂。6个电阻参数在不同种源材料间和不同处理间差异均显著(P0.05)。相关性和通径分析结果表明,胞外电阻率、胞内电阻率、高频电阻和电纳与膜透性的相关性较为明显;胞外电阻率、胞内电阻率、高频电阻和电导与脯氨酸含量的相关性较为显著,其中胞内电阻率对膜透性和脯氨酸含量的影响最大,通径系数绝对值分别高达0.938和0.897。说明电学参数ri可以作为表征红砂抗旱特性的参数,也表明电学方法将是荒漠植物逆境胁迫研究的一种有效方法。     

中国西部3个亚高山森林土壤有机层和矿质层碳储量和生化特性

为了解土壤和植被界面的有机碳库和生化特性,分别将以云杉（Picea purpurea Masters）（SF）、冷杉（Abiesfaxoniana Rehder＆ E．H．Wilson）（FF）和白桦（Betulaplatyphylla Sukaczev）（BF）为优势树种的3个亚高山森林地表有机层（OL）分成新鲜凋落物层（LL）、半分解层（FL）和分解层（HL）,并同步测定了有机层和矿质土壤层（MS）的有机碳（OC）储量、微生物生物量碳（Cmic）、微生物生物量氮（N～）及转化酶、过氧化氢酶、脱氢酶和多酚氧化酶活性。云杉林、冷杉林和白桦林土壤有机层的有机碳储量分别为29．38Mghm^-2±1．28Mghm^-2、22．7Mghm^-2±1．12Mghm^-2和8．63Mghm^-2±0．95Mghm^-2,分别为总有机碳储量的62．2％、53．5％和36．6％。云杉林、冷杉林和白桦林土壤有机层和腐殖质层分别储存了92．8％、99．6％和78．7％的有机碳。所有林型中,HL具有最高的细菌数量、Cmic和Nmic及过氧化氢酶活性,FL具有最高的真菌、放线菌数量及转化酶、脱氢酶和多酚氧化酶活性。微生物数量、微生物生物量和酶活性的垂直分布格局意味着OL是土壤和植被之间最活跃的生态界面之一。     

抗金环蛇毒血清生产工艺的研究

目的研制抗金环蛇毒血清,以解决被金环蛇咬伤后的救治问题。方法以金环蛇毒为免疫原免疫马获得免疫血浆,经盐析制备IgG,IgG再经酶解、疏水柱纯化后得到F(ab′)2活性片段,并以免疫扩散、ELISA测定其抗体特异性,以小鼠试验法测定其中和金环蛇毒能力。结果得到的抗血清F(ab′)2冻干品纯度达90%以上。结论研制出了特异性强、效价高的抗金环蛇毒血清。     

利用生物信息学方法和多抗原表位DNA免疫方法研制有效的抗蛇毒血清

传统的抗蛇毒血清是从全毒免疫的马或绵羊的血清中提取,但目前的免疫方法包括对马或绵羊进行的超免也不能达到对大多数临床上重要的毒素都产生免疫应答的目标。目前利物浦大学的Simon. C. Wagstaff等研究人员开发了一种最新的研制抗蛇毒血清的方法—通过鉴定蛇毒金属蛋白酶(SVMPs,SVMPs主要是产生持续性致死性出血,SVMPs很复杂,它具有多种功能型,能作用于多种底物)中有重要临床意义的7个部分,并将它们改造成单链DNA作为免疫原免疫小鼠产生特异抗体。为研发更合理的抗蛇毒血清制备方法提供了依据。     

仙人掌多糖提取过程中脱蛋白方法的研究

用水提取的仙人掌多糖常含有蛋白质C,实验以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标,选用了Sevag法、三氯乙酸法和酶法对仙人掌多糖提取物进行脱蛋白处理。实验结果表明,酶法、三氯乙酸法和Sevag法的脱蛋白率分别为89.67%、56.20%和45.65%,多糖损失率分别为7.19%、9.49%和13.75%。因此,酶提取法是替代常规方法的一种有效方法。