甲基营养菌MB200中mutS的缺失及高浓度甲醇和甲醛诱变

【背景】甲基营养菌(Methylobacterium)是一类能够以单碳或非C-C键低碳化合物(如甲烷、甲醇、甲醛等)为底物生长,并可生产多种代谢产物如氨基酸、工业酶和辅助因子、多羟基烷酸酯(polyhydroxyalkanoates,PHA)、多糖和类胡萝卜素等的革兰氏阴性细菌。【目的】通过突变甲基营养菌MB200的mutS基因,在胁迫条件下定向诱导,以获得可以耐受高浓度甲醇和甲醛的生产菌株。【方法】利用三亲本结合构建mutS基因缺失的高突变菌株MB200sTB,逐步提升培养液中甲醇、甲醛的浓度进行定向诱导突变,对获得的高耐受性突变株进行回补,分析菌株的生长情况。【结果】构建了mutS基因的缺失突变体MB200sTB,并且得到了高耐受甲醇和甲醛的菌株MB200sHBc和MB200sHBq。MB200sHBc与野生株MB200相比其甲醇耐受性得到了极显著的提高,甲醇耐受浓度从8g/L提升到44g/L,但生长量不受影响。MB200sHBq在以甲醛为0.45g/L的碳源条件下,生长量相较于野生型MB200提高了1.69倍。【结论】通过定向诱导缺失mutS基因的突变体,可获得具有生产应用潜力的...     

人膜联蛋白A5:从生物标志物到药物候选物

人膜联蛋白A5 (human annexin A5, hAnxA5)是人体中一种重要的功能蛋白质分子,广泛存在于人体的细胞和体液中。hAnxA5作为具有特定结构、隶属于一个复杂成员膜联蛋白家族的一个成员分子,其生化特性也是非常独特的。它以钙离子依赖方式,可逆、特异性、高效地结合磷脂酰丝氨酸分子;并基于此特性发挥重要生物学功能,在诸多人体生理、病理现象中发挥重要作用。本文就hAnxA5的结构特点、生化特性、作用机制、影响效应以及在生物医学领域中的重要应用进行了较为系统的归纳与总结。游离态hAnxA5以单体形式存在,发挥生物学活性时通常形成聚合体形式。hAnxA5影响了人体的血管血栓疾病、自身免疫性疾病、肿瘤疾病、肺纤维化及肺损伤、非酒精性脂肪性肝炎等病理现象的发生与发展;hAnxA5作为疾病生物标志物,也应用在肿瘤、神经退行性疾病、心力衰竭、急性肾损伤和哮喘等疾病的研究中;作为新型药物候选物,hAnxA5及其衍生物被多次设计、运用于多类疾病的治疗探索,尤其在血管血栓类疾病的治疗探索上。对于hAnxA5的研究,仍存在某些空白与不足。对其研究的深入,不仅将拓展对于hAnxA5结构与功能关系的认识,而且将促进其在相关生物医学领域的应用。     

针刺足阳明胃经经穴治疗腰椎间盘突出症的临床研究

摘要 目的：探讨针刺足阳明胃经经穴治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法：选取2019 年3 月至 2019 年 12月北京中医药大学东直门医院针灸科门诊收治的腰椎间盘突出症患者 60例,随机分为对照组与观察组,每组30例。对照组采用常规针刺法治疗,取肾俞、大肠俞、腰夹脊穴、阿是穴(均为双侧),观察组采用针刺足阳明胃经经穴治疗,取滑肉门、天枢、太乙、气冲、髀关、足三里、公孙、冲阳(均为双侧)。两组针刺手法均平补平泻,每次留针15分钟,每周扎2次,4次为1个疗程,共治疗3个疗程。考察临床疗效,治疗前以及全部疗程结束后对比两组患者的日本骨科协会评估治疗分数(JOA)、Oswestry功能障碍指数问卷表（ODI）评分,分别在治疗前、每次疗程结束后测评视觉模拟评分(VAS)。结果：治疗后,观察组愈显率为83.33%,对照组愈显率为60.00%,观察组愈显率高于对照组(P＜0.05),观察组JOA评分、ODI评分优于对照组(P＜0.05)。观察组第1疗程结束后的VAS评分略高于对照组,但是无统计学差异(P>0.05),第3疗程结束后的VAS评分低于对照组(P＜0.05)。结论：针刺足阳明胃经经穴治疗腰椎间盘突出症的临床疗效优于常规针刺法,尤其在改善腰椎功能、减少疼痛等方面的效果更佳。     

Tn5介导的致病性副溶血弧菌溶血能力差异突变株表型分析

【目的】构建致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)突变体库,分析溶血能力差异突变株表型特征,为深入挖掘和认识tdh的调控机制提供研究基础。【方法】利用双亲本接合法,将Mini-Tn5-Km2片段随机插入致病性Vp (ATCC 33846)基因组,并以含有卡那霉素(Km)和氨苄青霉素(Amp)的TCBS选择性培养基进行突变株(KmRAmpS)筛选;结合PCR方法对突变菌株进行Km基因筛查,构建在不同基因位点随机插入突变的Vp突变体库。以我妻氏血平板筛选溶血表型变化菌株,并对其生长曲线、菌膜形成能力和运动能力进行测定。【结果】采用双亲本接合法,成功建立包含490株Vp突变株的突变体库,并获得5株溶血表型变化稳定的菌株(2株为溶血能力上调,3株为下调)。5株突变株在生长速率、菌膜形成能力及运动能力方面与亲本株有显著性差异。其中,2株溶血能力上调菌株及1株溶血能力下调菌株在运动能力、生长速率和菌膜形成能力方面较亲本株显著降低(P<0.05);另2株溶血能力下调菌株菌膜形成能力较亲本株显著提高(P<0.05)。【结论】Tn5转座子可用于建立Vp突变体库;Vp溶血能力与其表型特征具有相关性;研究所获得的5株溶血表型突变株为进一步探讨Vp tdh的调控机制奠定基础。     

云南禄丰川街盆地早侏罗世早期分化蜥脚型类恐龙新材料研究*

目前中国早期分化的蜥脚型类恐龙化石主要发现于云南省禄丰市早侏罗世地层。本文描述的是一件产自禄丰川街盆地禄丰组的早期分化蜥脚型类恐龙新材料, 包括较完整的颈椎、背椎以及破碎的肩胛骨、耻骨和脚趾骨骼。本文对其进行了详细的骨骼形态学描述, 并与其他早期分化蜥脚型类进行了对比。结果表明, 在禄丰组发现的所有早期分化蜥脚型类中, 该标本与禄丰龙(Lufengosaurus)在形态上相似程度较高。系统发育分析结果显示, 该标本与Coloradisaurus和Glacialisaurus构成一个多分支, 该分支又和禄丰龙一起被归入大椎龙科。由于颈椎和背椎的椎体与椎弓未完全愈合, 推测该标本的个体发育阶段为幼年—亚成年。该标本的发现提高了大椎龙科在亚洲的属种分异度, 进一步扩充了对禄丰早侏罗世恐龙动物群的认识。     

黄连素降糖调脂机制的研究

目的 旨在研究黄连素对KKAy小鼠体重、血糖、血脂、胰岛素等相关代谢指标的影响,且应用基因芯片探讨黄连素降血糖、调血脂的机制.方法 选用KKAy小鼠16只,随机分为黄连素组(给予每日250 mg/kg的黄连素粉末悬浊液)和对照组(给予等体积生理盐水),均连续灌胃4周.每周末测定小鼠空腹血糖(FBG)和体重.3周末进行口服糖耐量(OGTT)实验.4周末测定小鼠FBG、血脂和空腹胰岛素(FINS)水平.取小鼠骨骼肌组织进行RT-PCR基因芯片实验.结果黄连素组小鼠FBG、OGTT曲线下面积(AUC)、TC、TG、FINS和HOMA-IR值均比对照组显著降低(P<0.05或P<0.01).基因芯片显示黄连素组GLUT4、MAPK8、MAPK14、PPARα、UCP2上调,PPARγ、PGC、CEBP、resistin、HNF4α下调.结论 黄连素不仅能有效降低KKAy小鼠FBG,改善胰岛素敏感性,还能调节脂代谢.黄连素可能是通过AMPK-p38 MAPK-GLUT4通路调节KKAy小鼠血糖.PPARα上调参与黄连素对KKAy小鼠血脂的调节.     

人乳头瘤病毒阴性宫颈癌患者阴道菌群多样性CSCD

目的 通过研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)阴性宫颈癌患者的阴道菌群多样性,探索HPV阴性宫颈癌与阴道菌群的关系。方法 选择38例HPV阴性(HPV_negative)宫颈癌患者、38例HPV阳性(HPV_positive)宫颈癌患者和34例正常对照(Normal_contorl)者的阴道分泌物,采用16S rDNA高通量扩增测序技术检测阴道菌群,并进行生物信息学分析,获得各组对象菌群构成及丰度信息,分析组间差异性。结果 110例阴道分泌物样本共中检测出743个可操作分类单位(operational taxonomic units,OTUs)。各组菌群丰度排名前5位的门类为厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、梭菌门(Fusobacteria)。Alpha多样性分析显示单个样本间差异无统计学意义(均P>0.05)。Beta多样性分析显示组间菌群差异有统计学意义(MRPP分析:加权P=0.022,非加权P=0.001)。LEfSe分析显示在不同分组中有显著作用的微生物类群有43种,其中Normal_contorl有15种,HPV_negative有23种,HPV_positive有5种。组间秩和分析显示对组间划分产生显著性影响的物种有49个(均P<0.05),其中属水平有28个(均P<0.05)。宫颈癌患者伯克霍尔德菌属丰度(HPV_negative:13.852%、HPV_positive:8.886%)高于正常对照组(0.058%)。正常对照组乳杆菌属丰度(44.326%)高于宫颈癌组(HPV_negative:14.778%、HPV_positive:19.735%)。结论 HPV阴性宫颈癌患者阴道菌群的多样性相对于健康女性阴道菌群更为复杂,其中乳杆菌属丰度下降,厌氧菌减少,需氧菌增加。相对于HPV阳性宫颈癌患者,HPV阴性宫颈癌患者阴道菌群多样性增加,乳杆菌丰度下降。HPV阴性宫颈癌患者阴道菌群多样性更为复杂,其与宫颈癌发生发展的关系有待深入研究。     

不同来源RNA聚合酶对霍乱弧菌分型噬菌体VP3启动子的作用

目的:研究不同来源的RNA聚合酶对预测的霍乱弧菌分型噬菌体VP3启动子的作用。方法:以含有预测的VP3启动子区的片段取代质粒pRL-null的T7启动子区,以海肾萤光素酶基因Rluc为报告基因,在霍乱弧菌N16961内检测霍乱弧菌RNA聚合酶对克隆的启动子区的作用;将上述重组质粒和表达VP3 RNA聚合酶的质粒共转化大肠杆菌JM109,检测大肠杆菌和VP3的RNA聚合酶对克隆的启动子区的作用。结果:N16961的RNA聚合酶不能识别并作用于启动子P1、P2、P5、P6、P10和P12,JM109的RNA聚合酶可能识别并作用于启动子P7和P11;只有P2、P7、P8、P9、P13、P16和P17在JM109内可以被克隆表达的VP3 RNA聚合酶识别转录。结论:宿主菌N16961与非宿主菌JM109的RNA聚合酶识别转录VP3启动子的能力不同,可能与噬菌体的宿主特异性有关;VP3的RNA聚合酶对大部分有活性的VP3启动子具有直接启动转录作用,但部分启动子可能需要VP3或宿主蛋白的辅助作用才能表现出更强的活性;VP3启动子对VP3 RNA聚合酶的特异性也不同,P1、P2和P12对VP3的RNA聚合酶具有高度特异性,P7和P11的特异性较弱。     

Ghrelin对缺氧复氧状态下脂肪间充质干细胞保护作用的研究

目的：探讨缺氧复氧损伤环境下Ghrelin对脂肪来源的间充质干细胞（AD-MSCs）的保护作用,以寻求AD-MSCs心肌内移植的有利因素。方法：采用胶原酶消化法分离小鼠AD-MSCs,流式细胞术鉴定其标志。建立缺氧/复氧细胞模型,分3组：①对照组;②缺氧/复氧组（H/R）;③H/R＋Ghrelin（浓度分别为10-9、10-8、10-7mol/L）干预组。MTT法测定各组细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果：流式细胞术结果显示AD-MSCs CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。AD-MSCs MTT分析显示在缺氧环境中,Ghrelin相比于单纯H/R组能够显著促进AD-MSCs的存活与增殖,并抑制其凋亡（P〈0.05）。结论：Ghrelin可以明显提高缺氧复氧环境下AD-MSCs的生存与增殖,抑制缺氧诱导的凋亡发生,有望为心肌梗死的干细胞移植治疗创造新的有利因素。     

替米沙坦改善糖尿病大鼠肾脏功能机制研究

目的研究替米沙坦对糖尿病大鼠24 h尿蛋白、血肌酐、肌酐清除率(Ccr)和血清尿素氮(BUN)等相关代谢指标的影响,且应用基因芯片探讨替米沙坦改善肾功能的机制。方法 30只SD大鼠,其中随机选取10只为正常对照组(给予等体积生理盐水)。选用20只大鼠,采用STZ法制备糖尿病模型,而后将16只造模成功的糖尿病大鼠随机分为替米沙坦治疗组(给予10 mg/kg/d的替米沙坦,n=8)和糖尿病模型组(给予等体积生理盐水,n=8)。三组大鼠均连续灌胃12周。每4周测定大鼠空腹血糖(FBG)和体重。12周末测定大鼠24h尿蛋白、尿肌酐、血肌酐和BUN水平。12周末处死大鼠,取肾脏组织进行基因芯片实验,并运用real time PCR进行验证。结果糖尿病模型组24h尿蛋白(P<0.01)、血肌酐(P<0.05)和BUN(P<0.01)比对照组显著升高,Ccr较对照组显著降低(P<0.05)。替米沙坦能改善糖尿病大鼠24h尿蛋白、血肌酐、Ccr和BUN水平。基因芯片结果显示替米沙坦组较糖尿病模型组有1541个基因发生显著改变,其中554个上调,987个下调。基因富集分析显示这些差异表达基因集中在氧化磷酸化通路和PPAR通路。Real time PCR证实替米沙坦组较糖尿病模型组ATP合成酶β亚基(Atp5b)、细胞色素c氧化酶亚基VIc(Cox6c)和NADH脱氢酶(辅酶Q)铁硫蛋白3(Ndufs3)基因显著下调。结论替米沙坦能有效改善糖尿病大鼠肾脏功能。替米沙坦的肾脏改善作用可能是通过线粒体氧化磷酸化通路和PPAR-γ通路调节。