基于IRES序列的多基因共表达载体构建

目的:构建一个IRES序列介导的多基因共表达载体,实现两个目的基因和筛选标记基因共用一个启动子高效表达,提高多基因稳定共表达细胞株的筛选效率。方法:以实验室前期构建的载体pLV-MCS-Puro为骨架,设计并全基因合成双基因克隆表达元件,连接到骨架载体,构建多基因共表达载体pLV-2MCS-Puro,以DsRed2和EGFP荧光蛋白基因验证该载体用于多基因稳定共表达细胞株筛选的效率。结果:成功构建了pLV-2MCS-Puro载体以及DsRed2和EGFP共表达重组质粒pLV-DsRed2-EGFP-Puro。瞬时转染实验证明该载体能介导多基因共表达。抗性筛选获得了MDCK和HeLa两种细胞的多基因稳定共表达细胞池。细胞池涂片荧光显微镜观察和计数表明抗性细胞池DsRed2和EGFP双阳率接近100%。基因组和转录水平PCR及蛋白质免疫印迹实验表明,DsRed2和EGFP稳定整合到抗性细胞基因组,并且两种蛋白质表达水平较为一致。结论:成功构建了多基因共表达载体pLV-2MCS-Puro,实现了两个目的基因和抗性基因串联共表达,并且具有高效的多基因稳定共表达细胞株筛选效率。该载体在研究蛋白质相互作用及工程细胞构建等方面具有一定的应用前景。     

延迟结扎脐带对母儿围产期结局的影响

目的:比较不同时间延迟结扎脐带对母体产后出血及新生儿一周内的贫血率和黄疸发生率的影响。方法:收集我院2016年02月~2016年12月共663例正常单胎顺产产妇并进行随机分组,其中A组138例10 s内立即结扎脐带、B组128例延迟至30 s结扎脐带、C组133例延迟至1 min结扎脐带、D组117例延迟至脐动脉停止搏动时结扎脐带和E组147例延迟至胎盘娩出后结扎脐带,比较以上五组新生儿贫血和黄疸发生率及产妇产后出血情况。结果:五组新生儿脐带血、1-2 d足跟血的贫血发生率比较差异具有统计学意义(P=0.015,P=0.046),均以D组最低。五组新生儿6-8 d足跟血的贫血发生率比较以D组贫血发生率最低,但差异无统计学意义(P=0.778)。五组新生儿出生后1-2 d、6-8 d的黄疸发生率比较差异均无统计学意义(P=0.093,P=0.335)。五组产妇的产后出血量比较差异具有统计学意义(P=0.017),以D组效果最好。结论:延迟结扎脐带在降低新生儿贫血发生率的同时并没有增加新生儿的黄疸发生率,并且降低了产妇产后出血量,尤其是当脐动脉停止搏动后结扎脐带可显著减少新生儿贫血的发生率以及产妇的产后出血量。     

ING4和HIF-1α在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨人口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中生长抑制因子4(ING4)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其临床意义。方法:选择我院确诊的口腔鳞癌患者共计65例,均经过手术治疗,术前未行放化疗,切除标本经过石蜡包埋切片,同时选取20例正常口腔黏膜作为对照。采用免疫组化S-P法检测人口腔鳞状细胞癌和正常口腔黏膜组织中ING4和HIF-1α的表达,并分析其与OSCC患者临床病理特征的相关性及人口腔鳞状细胞癌组织中ING4和HIF-1α表达的相关性。结果:OSCC组织中ING4的阳性表达率为41.5%(27/65),显著低于正常口腔黏膜组织(P0.05);OSCC组织中HIF-1α的阳性表达率为64.6%(42/65),显著高于正常口腔黏膜组织(P0.05)。ING4和HIF-1α的表达与OSCC的病理分级、TNM分期和是否有淋巴结转移显著相关(P0.05);OSCC组织中,ING4的表达与HIF-1α的表达呈显著负相关(P0.05)。结论:口腔鳞状细胞癌组织中ING4的表达下调,HIF-1α的表达上调,二者可能通过负向调控作用在口腔鳞状细胞癌的发生、发展、侵袭和转移中发挥着重要作用。     

关于小兴安岭东段沼泽形成问题

冷湿的气候和岛状多年冻土,以及低缓的地貌是本区沼泽形成的主要因素。沼泽形成的时代新,发育阶段全,类型复杂。上游形成时间较早,始于中全新世前期,中、下游形成时间较晚,始于晚全新世。中全新世为沼泽化和沼泽形成时期,晚全新世为沼泽扩展 时期,至今仍发育有富营养沼泽、中营养沼泽和贫营养沼泽。     

奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG16的表达及其结构功能预测

[目的]为了获得奶牛妊娠相关糖蛋白16(bovin pregnancy associated glycoproteins 16,BoPAG16),并对该蛋白进行结构和功能分析。[方法]从荷斯坦奶牛胎盘子叶中扩增BoPAG16基因,并用构建真核表达载体pcDNA3.1-Flag-BoPAG16,转染至293F细胞中,用SDS-PAGE和Western Blotting检测表达效果,用Flag-tag亲和层析柱纯化蛋白,并对BoPAG16基因编码的蛋白进行结构和功能预测分析。[结果]BoPAG16基因在293F细胞中成功表达,大小为56 kDa,纯化后纯度达到92%。预测BoPAG16蛋白N端15个氨基酸为信号肽,6个糖基化位点和13个B细胞抗原表位。[结论]成功表达并纯化奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG16,BoPAG16蛋白有6个糖基化位点和13个B细胞抗原表位。     

2000—2019年长江流域植被覆盖时空演化及其驱动因素

长江流域作为中国重要的生态屏障，科学认识长江流域植被覆盖时空变化及其驱动因素，对有效开展长江流域生态工程建设具有重要的指导意义与应用价值。基于2000—2019年间MODIS-NDVI与相关气象等数据，采用Theil-Sen median趋势分析、Mann-Kendall检验、变异系数、偏相关分析、残差分析等方法，研究了近20年来长江流域植被覆盖的时空分布与变化特征，并探究了研究区植被覆盖的驱动因素。结果表明：(1)时间变化上，长江流域生长季NDVI呈现波动增长趋势，显著改善面积大于退化面积；(2)空间分布上，流域植被覆盖空间分布格局大致呈现为“中部高，东西低”,生长季NDVI多年均值为0.6164,呈较高植被覆盖状态；(3)变化趋势上，植被增长区域大于减少区域，具体表现为“中部强于东部、东部强于西部”;(4)变化稳定性上，流域植被变异系数介于0.0104—1.3199之间，呈现出“中间低，东西高，东西部局部区域高低波动并存，地域性差异明显”的空间变化稳定性特征；(5)影响因素上，流域植被覆盖变化受气温和降水的共同影响，大部分区域生长季NDVI变化以气候驱动为主，局部区域表现自然因素叠...     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在微生物鉴定中的研究进展

与传统的微生物鉴定技术相比，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是一种准确、可靠和快速的鉴定和分型的技术。本文通过检索近年来国内外相关研究论文，总结最新的研究进展，发现MALDI-TOF MS在临床病原微生物、食源性微生物以及环境微生物等鉴定中有较大的优势，加快了微生物鉴定的进程，同时探索该技术在新领域的最新进展和面临的挑战，以期为我国基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术的发展提供参考。     

聚合物纳米颗粒对动脉粥样硬化病变的影响及相关机理研究进展

聚合物纳米颗粒通常指基于疏水性聚合物的纳米粒子,由于其良好的生物相容性、高效的长循环特性以及优于其他纳米颗粒物的代谢排出方式等,在纳米医学领域中得到了广泛关注。现有研究证明聚合物纳米颗粒在心血管疾病,尤其是在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的诊断、治疗中具有独特的优点,已经成功地由基础研究向临床应用转化。但是聚合物纳米颗粒引起的炎症反应诱导泡沫细胞形成、巨噬细胞自噬,以及心血管系统疾病力学微环境改变引起的聚合物纳米颗粒富集等,都可能最终诱导AS的发生发展。在此,本文综述了近年来聚合物纳米颗粒在诊断、治疗AS疾病中的应用及其与AS病变的关系和机理,为后续研究利用聚合物纳米颗粒开发新型纳米药物治疗AS提供理论依据。     

微管蛋白亲和力调节激酶4作为药物靶点的研究进展

微管蛋白亲和力调节激酶4（microtubule affinity-regulating kinase，MARK4）是丝氨酸/苏氨酸激酶家族重要成员之一，主要功能是磷酸化微管结合蛋白（microtubule associated protein，MAP），进而导致MAP从微管中分离，从而改变细胞形状，促进细胞分裂，调控细胞周期等。研究表明，MARK4与微管束形成、神经系统发育和程序性细胞死亡等密切相关，并且参与多种疾病的发生，比如阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）、代谢紊乱、癌症以及心衰心梗等疾病，因此MARK4被认为是极具潜力的药物靶点。本文综述了MARK4的三维结构、生物学功能以及MARK4介导的相关疾病，并且总结了MARK4抑制剂的研究进展。     

细胞膜仿生修饰纳米粒肿瘤治疗的研究进展

大量研究证明,细胞膜仿生修饰通过将不同细胞膜包被于纳米粒表面,赋予纳米粒新的生物学功能.纳米粒被细胞膜仿生修饰后,获得了细胞膜表面丰富的蛋白质并保留了纳米粒的高载药能力,延长体内循环时间,使纳米粒具有逃避免疫系统,跨越各种生理屏障的能力.本文总结了近年来细胞膜仿生修饰纳米粒用于肿瘤治疗的最新进展,讨论了细胞膜仿生修饰纳...