同位素标记相对和绝对定量蛋白组技术研究进展

近年来定量蛋白组学技术迅速发展,目前常用的有双向荧光差异凝胶电泳、同位素亲和标记、15N同位素标记、同位素标记相对和绝对定量和细胞培养条件下稳定同位素标记技术等。同位素标记相对和绝对定量技术以其高通量、高灵敏度、高重复性、高动态检测限和能对各种复杂样品进行相对和绝对定量研究等优势而备受研究者青睐,目前已发展到在同一实验中分析8组样品,增加了实验设计的灵活性。我们就同位素标记相对和绝对定量技术在定量蛋白组史中的地位作用、研究策略,以及在病毒致病机制研究和医药临床相关问题中的应用做简要综述。     

橄榄ISSR和RAPD遗传多样性分析和核心种质构建

为揭示中国橄榄(Canarium album)种质资源的遗传多样性,采用ISSR和RAPD标记对橄榄主要分布区的86份种质资源进行遗传多样性分析并构建核心种质.结果表明,基于UPGMA遗传相似系数,86份种质资源可分为3个大类;基于STRUCTURE模型聚类,可分为4个类群,这基本符合橄榄的地域性分布规律.采用ISSR...     

高山林线急尖长苞冷杉不同器官的稳定碳同位素组成分布特征

通过分析青藏高原东南部色季拉山林线物种急尖长苞冷杉不同年龄叶片、嫩枝、枝条、树干及根系的稳定碳同位素比值（6BC）及其空间分布特征,研究了植物光合作用后稳定碳同位素分馏及其影响因素．结果表明：植物不同器官δ^13C值差异显著（P〈0．001）,为树干（-24．19‰）〉枝条（-24．56‰）〉根部（-25．05‰）〉嫩枝（-25．12‰）〉叶片（-27．25‰）,说明从光合作用器官到非光合作用器官有明显的碳同位素分馏,且非光合作用器官之间也存在差异．随着急尖长苞冷杉叶片或嫩枝年龄的增加,叶片δ^13C值降低,而嫩枝δ^13C值升高（P〈0．01）．冠层上部叶片δ^13C值明显高于冠层下部（P〈0．01）,嫩枝δ^13C值则无显著性差异（P〉0．05）．远离树干2．5m的枝条δ^13C值有明显的高度变化（P〈0．01）,而离树干较近（1．5或0．5m）的枝条及树干在不同高度之间无差异（P〉0．05）．在同一冠层高度,随着与树干距离加大,枝条δ^13C值降低,且在中部和下部枝条尤为明显．说明林线地区冷杉光合作用后存在明显的碳同位素分馏;特定冠层高度树干与枝条生长所需的碳并不是全部来源于同高度的叶片光合作用合成的碳．     

聚乙二醇定点修饰集成干扰素突变体Ⅱ

目的：用聚乙二醇（PEG）修饰集成干扰素突变体Ⅱ（IFN-Con-m2,IIFNm2）,通过纯化获得新型修饰分子并对该分子进行抗胰蛋白酶水解稳定性及初步药代动力学研究。 方法：将mPEG20000定点偶联到IIFNm2的第86位Cys残基上,修饰后的产物经CM层析后,以SDS-PAGE考察其纯度,用WISH-VSV系统进行生物活性测定;在0.1%胰蛋白酶条件下考察体外抗酶解稳定性;并以SD大鼠进行初步药代动力学研究,绘制血药浓度-时间曲线。采用3P87软件进行数据拟合,分析药物动力学参数。 结果：干扰素修饰率约为50%,且绝大多数以单修饰体（mono-PEG- IIFNm2）形式存在;提纯后mono-PEG-IIFNm2 的纯度大于98%,比活性约为修饰前IIFNm2的1%。抗胰蛋白酶水解试验表明：30min后,IIFNm2抗病毒活性残留为8%,mono-PEG-IIFNm2为41%。初步药代动力学研究显示：IIFNm的消除半衰期为(1.57±0.34)h,mono-PEG-IIFNm2为(18.0±4.0)h。 结论：成功地偶联了PEG和IIFNm2,建立了mono-PEG-IIFNm2的纯化工艺,PEG修饰能增加IIFNm2的体外抗胰蛋白酶水解稳定性,并显著延长体内半衰期。     

济南市城市绿地可达性分析

以济南市1989、1996和2004年SPOT遥感卫星影像数据解译的城市绿地分类图、道路图和水系图为基础数据资料,在遥感(RS)和地理信息系统(GIS)技术支持下,运用景观可达性的概念与原理,采用费用加权距离方法,对济南市整体绿地系统和公园与广场绿地可达性的时空动态变化及其原因进行了分析。研究结果表明:1)济南市城市绿地的可达性不断提高与改善;2)济南市城市绿地可达性的空间格局变化明显,但仍不均衡、不太合理;3)城市绿地面积和斑块数量的不断增加、绿地分布格局的日益均衡和道路网的日臻完善是可达性不断提高的主要原因;4)城市绿地可达性分析是衡量城市绿地服务功能社会公平性的有力手段,充分体现城市建设“以人为本”的理念,是目前生态城市评价指标体系的必要补充。因此,城市绿地可达性分析结果可为合理调整与设计城市绿地系统提供科学依据。     

人外周血淋巴细胞膜电压依赖性钾通道的特性分析

淋巴细胞是直接参与机体免疫的重要效应细胞。淋巴细胞膜上存在多种离子通道 ,其中主要为电压依赖性钾通道。目前 ,对鼠淋巴细胞该通道的研究较深入 ,它可分为ｎ、ｎ’和ｌ型三种亚型 ,但对人外周血淋巴细胞膜上钾通道的研究较少。国内尚未见这方面的报道。本文采用膜片钳技术记录人外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道电流 ,并对其进行特性分析 ,为研究其异常变化与某些疾病的关系提供实验依据。1　材料和方法(1)细胞的分离　取正常人外周静脉血 ,用Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度离心法分离出单个核细胞 ,将其置于塑料平皿内 ,37℃孵育 2ｈ ,取含淋巴细…     

人胰岛素原C肽的合成及专一性抗体制备

利用固相多肽合成中的Boc途径合成了人胰岛素原C肽 ,经TSK柱层析一步纯化 ,产物达HPLC及毛细管电泳均一 ,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值 ,总回收率高达 41 %。为了提高寡肽抗体的专一性 ,我们将丙烯酰化的C肽经催化聚合形成了以聚丙酰为骨架 ,C肽为侧链的聚合体 ,分子量约为 2 5kD。免疫新西兰大白兔 1月 ,获得专一性抗体。用酶联免疫吸附法测得抗血清滴度达 2 .5× 1 0 4 ,与BSA无交叉反应。聚丙酰C肽抗原是制备C肽抗体的一种新的尝试 ,而且也可能成为新的多肽工程疫苗之一 ,为其他传染性疾病多肽疫苗的研究提供新的途径     

内侧隔核注射淀粉样β蛋白损害大鼠的长时程增强和认知行为（英文）

胆碱能神经元的逐渐丢失和进行性认知功能障碍是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要特征。脑内胆碱能神经元集中分布的区域之一是基底前脑的内侧隔核(medial septum,MS),其发出投射纤维至海马。尽管AD患者和动物模型脑内淀粉样β蛋白(amyloidβprotein,Aβ)的神经毒性包括特异性损伤胆碱能神经系统的作用已被广泛报道,但仍不清楚聚集在MS的Aβ是否会影响海马突触可塑性,进而影响学习记忆行为。本研究采用Morris水迷宫、Y型迷宫和在体海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)记录,观察了MS注射Aβ对大鼠海马LTP及认知行为的影响,同时还以能特异性损伤γ氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)能神经元的海人藻酸(kainic acid,KA)作为对照,进行了效应比较。结果显示:(1)MS注射Aβ_(25–35),而非KA,明显损伤了大鼠在经典Morris水迷宫和对位水迷宫中的空间学习记忆能力;(2)MS注射Aβ_(25–35)和KA均损害了大鼠在Y迷宫中的新异环境探索能力;(3)MS注射Aβ_(25–35),而非KA,明显抑制了大鼠海马CA1区在体LTP;(4)Aβ_(25–35)和KA均未影响大鼠在行为学测试中的运动能力和电生理记录中的海马CA1区双脉冲易化(paired-pulse facilitation,PPF)。以上结果表明,MS注射Aβ能够损伤大鼠空间学习记忆能力、学习记忆灵活性和探索行为,并压抑海马LTP。结合以往研究,本研究提示:MS的胆碱能神经元及其海马投射可能是AD病程中受Aβ神经毒性作用损害的主要细胞和组织,选择性损伤MS中的胆碱能神经元会导致AD病程中的海马突触可塑性损伤和认知功能伤害。     

土壤容重对花生根系生长性状和内源激素含量的影响

本文采用柱栽方法,研究了不同土壤容重对花生根系生长性状和内源激素含量的影响。结果表明:在花生苗期,较低的土壤容重利于花生根系生长,根系中生长素(IAA)、赤霉素(GA_3)、细胞分裂素(ZR)含量升高,而脱落酸(ABA)含量下降。适宜的土壤容重(1.2~1.3 g·cm~(-3))下,花生根系保持较高的IAA、GA_3、ZR含量和较低的ABA含量,有利于根系生长和保持较好的根系形态。根系IAA、GA_3、ZR含量与根系干重、总长度、体积和表面积均呈显著或极显著正相关,ABA含量则相反。IAA/ABA、ZR/ABA、GA_3/ABA也与根系干重、总长度、体积和表面积呈显著或极显著正相关。据此可见,土壤容重为1.2~1.3 g·cm~(-3)可维持有利于花生根系生长的内源激素水平。