大肠杆菌表达的单链抗体柱复性的研究

对包含体表达的抗乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的单链抗体(ScFv)纯化复性进行了探索.尝试了利用金属螯合亲和层析和凝胶层析柱进行柱上在位复性的可行性. 对包含体表达的ScFv进行透析复性与柱复性,比较其相对复性率及蛋白质回收率,发现柱上复性效果优于传统的透析复性.抗HBsAg ScFv经凝胶色谱Sephacyl S-200柱复性的相对复性率为98%, 蛋白质回收率为81%.由于将纯化复性同步进行,简化了操作程序,提高了产品的回收率.     

胸苷激酶基因治疗胃癌的体外实验

将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞,随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ, ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体ＬＸｐｓｐ－ＨｙｔＫ．以脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）为介导,将这种质粒与仅含潮霉素Ｂ基因的质粒ＬＸＳＨ 分别转染胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,用６０ Ｕ／ｍ ｌ潮霉素Ｂ进行筛选,得到了可稳定传代的阳性克隆,分别命名为ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 和ＢＧＣ－Ｈｙ．三种细胞的生长曲线无明显差别．用不同浓度的ＧＣＶ 分别作用于ＢＧＣ－ＨｙｔＫ, ＢＧＣ－Ｈｙ 及ＢＧＣ－８２３,０．０２～２００ μｇ／ｍ ｌ 的ＧＣＶ 对ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 细胞有明显的杀伤作用（ＩＣ５０＝ ０．０２ μｇ／ｍ ｌ）,而对另外两种细胞几乎无毒性作用（ＩＣ５０＞ ２００μｇ／ｍ ｌ）．２０ μｇ／ｍ ｌＧＣＶ 作用９６ ｈ 后,仅存在２０％ 的ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 就可使周围的大部分ＨＳＶ－ｔｋ－ 的肿瘤细胞死亡,说明存在较显著的“旁观者效应”     

非洲紫罗兰两侧与辐射对称花中两个CYC类完整基因的分离和序列分析

在已知GCYC基因部分序列基础上, 通过改进的mTAIL-PCR方法克隆非洲紫罗兰Saintpaulia ionantha两侧对称栽培种中CYC类基因的5′未知序列, 并进而从两侧与辐射对称栽培种中分离得到苦苣苔科Gesneriaceae中第一组完整基因: SiCYC1A与SiCYC1B。对以上基因的核酸和氨基酸序列比较发现, SiCYC1A与SiCYC1B序列同源性很高, 均含有完整的功能调控区域(即TCP domain和R domain)并与模式植物金鱼草Antirrhinum majus中CYC基因同源。因此, 这两个基因应具有正常功能, 是功能上互补的冗余基因。令人意外的是在辐射对称花栽培品种中的这两个基因和两侧对称花栽培品种中对应基因的序列完全相同。经过对金鱼草以及相关类群辐射对称花突变体中CYC类基因序列的比较分析, 推论在非洲紫罗兰中, SiCYC1A与SiCYC1B基因可能受上游未知的共同调控因子调控, 该调控因子的改变是导致栽培品种中花对称性发生变化的主要原因。另外, 对改进后的TAIL-PCR(mTAIL-PCR)的方法和过程进行了详细叙述, 并对其技术特征和优势开展了简单的论述。     

EF4影响线粒体氧化磷酸化并调控膀胱癌细胞增殖及迁移

延伸因子4(EF4)是一种非传统的线粒体延伸因子,参与调控线粒体蛋白质合成过程.在本研究中,我们进一步探索了其在膀胱癌中的作用机制.通过检测EF4在膀胱癌及邻近正常组织中的表达,发现EF4在膀胱癌患者肿瘤组织中异常升高,并在T分期较高的肿瘤中高表达.随后,通过在HTB-9和T-24膀胱癌细胞中敲低EF4的表达,进一步探索了EF4在膀胱癌发生及发展中的作用.研究结果表明,通过RNAi敲低EF4表达不仅可以抑制膀胱癌细胞HTB-9和T-24在体外的增殖和集落形成,还显著降低了其迁移能力,这一结果主要归因于下调EF4表达阻碍了线粒体DNA编码的呼吸链复合物亚基的翻译,影响呼吸链复合物的组装,并最终导致线粒体氧化磷酸化功能障碍.以上结果表明EF4通过维持线粒体重要复合物的翻译而影响膀胱癌细胞的细胞增殖迁移及膀胱癌发生发展,并提示EF4可能是治疗膀胱癌的潜在目标分子.     

2型糖尿病患者社区综合干预效果评价

目的:研究社区综合干预措施对2型糖尿病患者的干预效果.方法:80例糖尿病患者随机分为干预组和对照组,干预组在常规药物治疗的基础上采取社区综合干预措施.对照组仅采用常规药物治疗.观察两组患者的体质指数(BMI),腰臀比(WHR),收缩压(systolic blood pressure,SBP),舒张压(diastolic blood pressure,DBP),空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),餐后2h血糖(postprandial 2h blood glucose,P2hBG),糖化血红蛋白(HbAlc),总胆固醇(Total cholesterol,TC)和甘油三酯(Triglyceride,TG)的水平.结果:进行干预后干预组的WHR、FBG、P2hBG、HbAlc、TC和TG等指标均显著的低于对照组,且有统计学意义(P＜0.05).并且干预组在干预后WHR、FBG、P2hBG、HbAlc、TC和TG等指标均显著的低于干预前,且有统计学意义(P＜0.05).结论:通过对2型糖尿病患者进行社区干预,有效控制糖尿病患者的血糖和危险因素,从而提高患者的生活质量.     

秦艽香叶醇-10羟化酶（G 10H）基因的克隆及序列分析

香叶醇-10羟化酶(geraniol 10-hydroxylase, G10H)是中药秦艽中龙胆苦苷等环烯醚萜苷类成分合成途径的限速酶。本研究克隆了秦艽G 10H基因,并对其基因及编码蛋白序列的特征进行了生物信息学分析,结果显示：秦艽G 10H基因包含一个完整的长1491 bp的ORF框,编码496个氨基酸;GmG10H与长春花、川西樟牙菜等植物G10H蛋白具有很高的同源性(逸69%),无跨膜结构域、信号肽等结构,可能定位于细胞质中。定量PCR结果显示,GmG10H主要在秦艽的花和根中进行表达。     

蓖麻提取物的杀虫作用研究进展

随着食品安全和发展低碳农业的需要,植物源农药的研究受到了空前的关注。在众多植物源杀虫剂中,蓖麻(Ricinus communis L.)由于其价廉易得、杀虫谱广、杀虫效果好、使用简单方便等优点,逐渐引起人们的高度重视。本文主要从蓖麻毒素粗提物、蓖麻毒蛋白和蓖麻碱的生物效应进行综述,并对其应用发展前景、使用过程中存在的问题与相应的解决办法进行了讨论。