大疣蛛毒素-Ⅵ的分离纯化及部分生物学活性鉴定

从雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)粗毒中,结合阳离子交换和反相高效液相色谱分离到一种多肽神经毒素,命名为大疣蛛毒素-VI(Raventoxin-VI).经MALDI-TOF质谱分析,它的分子量为(5 371.6±0.5) Da.利用Edman降解气相蛋白质测序仪测得其氨基酸序列是NH2-NIIKGRVVKLCGGCAQKCCDREPRCDPCRTCVENVGT-GGGYLSSNKKCNGS-COOH,其中8个Cys形成4对二硫键.Raventoxin-Ⅵ能阻断小鼠膈神经膈肌标本神经肌肉接头传递,脑室注射能使小鼠瘫软.从一级结构上没有发现与该毒素有较高相似性的其他蜘蛛毒素.     

海南捕鸟蛛毒素-I(HNTX-I)的~1H-NMR信号归属和二级结构分析(英文)

海南捕鸟蛛毒素-I(HNTX-I)是从海南捕鸟蛛(Ornithoctonus hainana)的粗毒中纯化的一种新型神经毒素。应用二维1H-NMR.技术研究HNTX-I的溶液结构特点,通过分析水和重水中的DOF-COSY、TOCSY和NOESY谱,识别出HNTX-I全部33个氨基酸残基自旋体系;通过NOESY谱中的dαN、dβN、dNN和Dαδ联系完成了序列专一的谱峰归属,从而确认了HNTX-I所有的主链质子和大于96％的侧链质子的化学位移。并通过分析3JNH-CaH耦合常数、序列间的NOE联系以及慢氢交换质子等,确定HNTX-I的二级结构主要是由三股反平行的β-折迭组成(Lys7-Cys9,Tyr20-Asn23和Trp28-Val31),这些结构特点与已经探明结构的其它蜘蛛毒素的基本相同。这些结果为完全解析HNTX-I的溶液三维结构奠定了基础。     

β-鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化*

用反相高效液相色谱,以0.02mol/L醋酸铵-乙腈为流动相的梯度洗脱模式,在295nm吸收值的条件下,灰花纹鹅膏菌Amanitafuliginea的肽类毒素可以被成功的分离和纯化。单个肽类毒素的鉴定是用反相高效液相色谱和质谱同时进行。用这一方法可从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出β-鹅膏毒肽(β-amanitin),产量可达到:1158靏/g(干重),产品纯度达98%以上,回收率为95.3%。β-鹅膏毒肽的分子量为919.3Da。这个方法可用于其它鹅膏菌肽类毒素的分离纯化。     

间斑寇蛛的生态学观察与实验

报道间斑寇蛛首次在南方大批量人工养殖成功所获得的行为生态学资料:养殖方法、捕食与食谱、活动规律、蜕皮与体色的关系;温度和湿度对间斑寇蛛活动能力、成活率、蜕皮率的影响;温度和食物对其若蛛生长发育的交互影响作用。间斑寇蛛生长发育的适宜温区是20～30℃,RH55%～75%;最适合温度为25℃,RH65%,苍蝇为较理想的食物。结合野外进行了种群密度的调查、初步分析了其种群分布与栖境生物群落的关系。     

家蚕神经肽基因的筛查及成熟肽的预测

神经肽（neuropeptide）是家蚕Bombyx mori体内重要的调控物质。为了充分理解神经肽对家蚕发育的调控, 扩充家蚕神经肽的数量, 本研究利用BLAST的tblastn程序结合OpenOffice软件的查找程序, 基于其他昆虫和无脊椎动物神经肽的同源性和保守的结构特点, 在家蚕基因、理论蛋白质数据库及NCBI中进行全面而系统的基因筛查; 并利用各种在线工具对所筛查到基因和理论蛋白质的结构和成熟肽进行预测分析。结果共获得allatostatin-A （AST-A）, allatostatin-B （AST-B）, allatostatin-C （AST-C）, allatropin (AT), ecdysis-triggering hormone （ETH）, crustacean cardioactive peptide (CCAP)和FMRFamide等31个神经肽基因家族, 包括37个神经肽基因亚家族, 共计44个神经肽基因; 预测出193个成熟的神经肽, 其中73个根据家族同源性预测在C末端发生酰胺化, 而6个被预测在N末端发生了环化, 9个被预测酪氨酸发生了硫酸化。大部分成熟神经肽都具有明显的家族结构特征, 但proctolin, CCAP及CAPA-PK成熟肽结构上与其他昆虫相比有所扩展。结果提示, 家蚕神经和内分泌细胞产生了几乎在所有昆虫中具有的神经肽前体; 进化过程中大部分成熟神经肽的氨基酸序列在种间产生了差异, 但家族特征性基序高度保守。本研究为神经肽功能研究以及神经肽对家蚕发育尤其是蛹期发育调控的研究奠定了基础。     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体A1Y-HWTX-Ⅰ的固相合成和生物学活性测定

用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证明 ,合成的 A1 Y- HWTX- 在含有谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠后显示出与天然 HWTX- 完全相同的生物学活性 ,提示 Y替代 HWTX- 的 A1后并不明显影响 HWTX- 的活性部位和空间构象 ;A1与 HWTX- 生物学活性无关 .此外 ,将 Y引入 HWTX- 分子有助于利用碘标记方法研究 HWTX- 的作用机制     

豆科植物籽实中的昆虫消化道α－淀粉酶抑制剂的研究（Ⅱ）

对５个不同品种菜豆（ＰｈａｓｅｏｌｕｓｖｕｌｇａｌｒｉｕｓＬ．）中的蜚蠊（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ）消化道α－淀粉酶抑制剂作了比较研究．发现它们都能在酸性ｐＨ条件下有效地发挥抑制作用,且最适抑制ｐＨ均在５．５０左右;但它们的热稳定性、最大抑制活性及发挥最大抑制活性所需的预温时间等不尽相同。     

发刊词

人类即将跨入21世纪。如果说“21世纪是生命科学的世纪”这句话以前还是一个飘渺的预言,那么今年——1997年,以震撼全社会的克隆羊“多利”的诞生为代表的一系列生命科学上的重大突破,已经使人们真切地感觉到了生命科学世纪匆匆前来的脚步。生命科学研究将是人类下一个世纪的主     

Solid-phase synthesis of huwentoxin-I and its structure and bioactivity analysis

Huwentoxin-I, a neurotoxic peptide from the spider Selenocosmia huwena, was synthesized by sol-id-phase method with Fluorenylmethoxycarbonyl amino acid pentafluorophenyl esters (Fmoc-AA-OPfp). The carboxyl and the hydroxy groups were protected by tBu; the side chains of Lys and His were protected by Roc; the guanidine group of Arg was protected by Mtr and the mercaptan group of Cys was protected by Trt. The solid-phase carrier was ethylene diamine-polyethylene-polystyrene (DEA-PEG-PS) resin. The synthetic peptide was cleaved from the resin and deprotected by a 90% TFA solution containing 5% thioanisole, 3% ethanedithiol and 2% anisole. The product was reduced with DTT and then incubated with GSSG and GSH to form the correct disulfide bond linkages. The syn-thetic peptide was purified by HPLC and then characterized by amino acid composition and sequence analysis, peptide mapping and NMR. The biological activity of the synthetic product was tested by electrophysiological method using the isolated mouse ph