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为了研究膜联蛋白A2(ANXA2)基因表达水平与人肝癌细胞生物学行为之间的关系,采用已优化转染条件的磷酸钙法将针对ANXA2的siRNA重组质粒导入人肝癌细胞SMMC-7721并观察对靶基因表达及细胞生物学行为的影响。以半定量RT-PCR和Western blotting检测转染后不同时间(24 h、48 h、72 h和96 h)ANXA2 mRNA及蛋白表达变化;以MTT法、Hoechast33258染色及体外损伤修复实验等分析抑制ANXA2表达后对SMMC-7721细胞生物学行为的影响。结果显示:所设计的四条siRNA序列均不同程度抑制了ANXA2 的表达(p<0.05),且呈时间依赖性;细胞生长能力及运动能力被显著抑制(p<0.05),其抑制效应与ANXA2 表达敲低程度呈正相关。结论:ANXA2的高表达水平与肝癌细胞的凋亡、生长及运动能力密切相关,以RNAi方法抑制该基因的表达可以有效地抑制肝癌细胞的恶性生物学行为。上述结果为肝癌的实验性基因治疗研究提供了新的思路和对策。 相似文献
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DNA甲基化抑制鼻咽癌细胞系膜联蛋白A1基因表达 总被引:2,自引:0,他引:2
为了研究不同分化程度和转移潜能鼻咽癌(NPC)细胞系膜联蛋白A1(ANXA1)mRNA和蛋白质表达情况及其与基因甲基化的关系.培养NPC细胞系CNE1、CNE2、5-8F、6-10B和永生化非癌性人鼻咽黏膜上皮细胞NP69细胞用于实验,用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测ANXA1基因甲基化状态,同时利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ANXA1基因的mRNA表达水平.然后用不同浓度的5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对NPC细胞进行去甲基化处理,MSP和RT-PCR方法检测处理组和对照组细胞ANXA1基因甲基化状况和mRNA表达水平,并用Western-blotting方法检测ANXA1基因蛋白质表达水平.结果发现,NP69细胞ANXA1基因无甲基化,4株NPC细胞系ANXA1基因都存在不同程度的甲基化,甲基化程度与细胞的分化程度和转移潜能相关.NPC细胞ANXA1基因mRNA表达水平降低,低于NP69细胞,其降低的程度与基因的甲基化程度相关.5-aza-2dC能够剂量依赖性地引起ANXA1基因去甲基化,经去甲基化处理后,NPC细胞系ANXA1基因的mRNA和蛋白质的表达水平相应提高.研究证明,NPC细胞系ANXA1基因的mRNA和蛋白质表达水平出现下调,甲基化是导致表达下调的主要原因,5-aza-2dC去甲基化处理能够恢复ANXA1基因的表达水平. 相似文献
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摘要 目的:探讨血清膜联蛋白(ANX)A2、ANXA3与转移性结直肠癌(mCRC)患者化疗疗效的关系。方法:选取2019年1月~2020年10月徐州医科大学附属医院收治的90例mCRC患者,根据mFOLFOX6化疗联合西妥昔单抗治疗后的疗效分为未缓解组和缓解组。采用酶联免疫吸附法检测血清ANXA2、ANXA3水平。分别采用单因素、多因素Logistic回归分析和受试者工作特征(ROC)曲线分析mCRC患者化疗未缓解的影响因素和血清ANXA2、ANXA3对mCRC患者化疗未缓解的预测价值。结果:90例mCRC患者客观缓解率为58.89%(53/90)。单因素分析显示,两组年龄、回盲部肿瘤、TNM分期、Zubrod-东部肿瘤协助组-世界卫生组织(ZPS)评分、治疗目标、ANXA2、ANXA3组间比较存在统计学差异(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,回盲部肿瘤、TNM分期Ⅳ期、ZPS评分1~2分和ANXA2、ANXA3升高为mCRC患者化疗未缓解的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清ANXA2预测mCRC患者化疗未缓解的曲线下面积(AUC)为0.787,ANXA3预测mCRC患者化疗未缓解的AUC为0.791,血清ANXA2、ANXA3联合预测为0.904,二者联合预测的AUC最大(P<0.05)。结论:血清ANXA2、ANXA3水平升高为mCRC患者化疗未缓解的独立危险因素,可影响mCRC患者的化疗疗效,二者联合预测mCRC患者化疗未缓解的价值较高。 相似文献
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我们利用基因工程的方法在大肠杆菌中制备了生物素化的膜联蛋白V。为此,我们构建了膜联蛋白V与乙酰C0A羧化产生物素受体肽DCP87的融合基因,并在大肠力中进行了表达。表达产物经HPLC检测,我们发现大约有60%的融合表达产物在大肠杆菌内进行了生物素化。生物素化的膜联蛋白V经抗生物素蛋白亲和层析化后用于吗啡诱导的下丘脑神经元细胞的凋亡检测,取得了理想的结果。 相似文献
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目的:探讨AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:用免疫组化SP法分别检测AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在60例大肠癌组织中的表达。结果:(1)AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌组织中的阳性表达率分别为65%(39/60)和60%(36/60);(2)AnnexinⅡ和AnnexinⅣ阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期比较,差异具有显著性(P〈0.05):(3)大肠癌组织中AnnexinⅡ和AnnexinⅣ的表达一致率为68.33%(41/60),存在显著相关性(P〈0.01);(4)大肠癌不同临床时期(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)AnnexinⅡ和AnnexinⅣ阳性表达比较,差异具有显著性(P〈0.01)。结论:AnrlexinⅡ和AnnexinⅣ与大肠癌的临床分期和预后有关。 相似文献
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膜联蛋白是一类同源的水溶性多功能蛋白,可以在依赖和不依赖Ca2+的环境下与内膜和质膜结合或形成跨膜结构,存在于部分原核生物以及全部的真核生物中,在大多数高等生物中以多基因家族形式存在。植物膜联蛋白在结构上通常只有第1和第4个重复单元是保守的;在功能上可以与细胞骨架结合,具有过氧化物酶活性、核酸水解酶活性和离子通道功能,参与响应盐、干旱、高低温、重金属、损伤等非生物胁迫以及真菌、病虫害等生物胁迫。膜联蛋白基因在植物体的大部分器官及整个生育期均有表达,并且表达量随着植株发育和内外环境的改变而变化,在植物的抗逆性反应中起重要作用。该文对近年来国内外有关植物膜联蛋白的结构和功能,尤其是其在植物逆境生理方面的相关研究进行综述,以期为植物膜联蛋白的深入研究和植物抗逆研究提供思路。 相似文献
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目的:构建人膜联蛋白Ⅴ的原核载体并诱导其表达.方法:以IPTG诱导His融合人膜联蛋白Ⅴ的表达,并应用Ni-NTASuperflow纯化.结果:PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白Ⅴ基因编码序列一致.在IPTG诱导下,重组大肠杆菌DH5α高效表达分子量约36 kDa的目的产物.结论:人膜联蛋白Ⅴ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a( )上,并在大肠杆菌DH5α中表达. 相似文献
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