小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^-6μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。     

尿酸酶－鲁米诺化学发光传感器

研制了依赖于鲁米诺化学发光反应和固定化尿酸酶柱的测定血清尿酸的生物传感器。其测定血清样品响应时间47s。测定每份样品需时1．5min,样品体积17μl。工作曲线的线性范围1~20mg／dl。批内不精密度3．22％～4.36％,批间6.18%～7．8%。测定值回收率为93％～109％。与医院常规酶试剂盘方法比较相关系数r=0.9909。固定化尿酸酶柱室温使用,4℃冰箱保存,连续使用5个半月测定样品2000次以上,仍保持原酶柱活力的94%。     

探针检测:大海捞针

使DNA探针技术商品化不能顺利进行的主要障碍,在于需为检测探针发展一系列简单、安全和灵敏的检测技术。小段DNA不发送自己的信号,所以研究工作者设法把信号分子耦联到探针上,而不损伤它们与互补序列杂交的能力。信号分子包括荧光抗体、能使染料改变颜色的酶和化学发光催化剂。     

GICA和CLIA联合检测SARS-CoV-2特异性抗体的检测策略研究

评价胶体金免疫层析法(GICA)与化学发光法(CLIA)联合检测对降低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体假阳性的效果。收集2020年1月22日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的19例SARS-CoV-2确诊患者不同时段的血清33份,55例非SARS-CoV-2、其他病原体感染及自身免疫性疾病患者的血清55份,采用GICA和CLIA分别对血清SARS-CoV-2 IgM、IgG进行检测,并对结果进行分析。GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为100.0%、94.74%,与CLIA(92.86%和100.0%)比较没有差异(P>0.05);GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的特异性分别为70.91%、74.55%,明显低于CLIA的特异性(98.18%和89.09%)(P<0.01);两种方法检测SARS-CoV-2 IgM、IgG结果具有一致性(P<0.001),Kappa值分别为0.434,0.406;ROC曲线分析发现,GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.855、0.846,明显低于CLIA(0.955和0.945)(P<0.05)。两种方法联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为92.86%、94.74%,特异性分别为100.0%、100.0%;ROC曲线分析显示,联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.964、0.974,高于两种方法的单独检测。GICA和CLIA联合检测能有效提高SARS-CoV-2 IgM和IgG的检测特异性,值得临床推广应用。     

化学发光双抗夹心酶免法测定血清Ⅳ型胶原

以免疫家兔制备的抗人Ⅳ型胶原多抗包板,采用改良过碘酸钠法辣根过氧化物酶标记抗人Ⅳ胶原单抗,建立了一种血清Ⅳ型胶原的增强化学发光双抗夹心酶免测定法.实验结果表明方法较为灵敏、准确、稳定、特异,其最低检测限为30 μg/L,平均回收率为94.5％,批内和批间变异系数分别≤6.0％和11.6％.测定60例健康人,其参考值为160 μg/L,与进口的日本试剂盒相关性良好,因此可以作为临床血清Ⅳ型胶原放免测定法的参考替代方法.     

巨噬细胞产生NO.和O_2~-自由基的分子机理

建立了用顺磁共振（ＥＳＲ）和化学发光技术测定巨噬细胞产生ＮＯ和氧自由基的方法．捕捉到了巨噬细胞受佛波酯刺激产生的ＮＯ．和Ｏ－２自由基．测定了在不同浓度Ｌ－精氨酸存在时佛波酯刺激后巨噬细胞产生的ＮＯ自由基．研究了巨噬细胞产生的ＮＯ和氧自由基的分子机理．结果表明巨噬细胞不仅产生氧自由基而且产生ＮＯ自由基．ＮＡＤＰＨ氧化酶产生氧自由基的部位位于巨噬细胞膜的外侧．ＮＯ合成酶活化产生ＮＯ自由基比ＮＡＤＰＨ氧化酶活化产生氧自由基晚几分钟．     

一种定量检测人血清高敏C反应蛋白的化学发光免疫方法

旨在建立一种可定量检测人血清高敏CRP的化学发光检测方法 (High-sensitivity C-reactive protein quantifiable chemiluminescent immunoassay,hs-CRP CLIA)。首先利用亲和层析和离子交换层析技术从肝硬化病人腹水中纯化出高纯度的天然CRP作为免疫原制备了22株CRP单克隆抗体 (单抗),其中13株单抗在磷酸胆碱配体捕获ELISA中呈阳性,然后利用方正滴定法筛选出单抗10C5和10C11建立了hs-CRP CLIA。试剂盒评估结果显示：该方法对血清中干扰物质IgG、血红蛋白、甘油三酯等无非特异性反应;该方法检测灵敏度高,在0.04~20.38 mg/L范围内定量检测人血清CRP标准品呈良好线性关系 (R2＞0.993);该方法准确性高、可重复性好,平均回收率为99％,批内差为4.2％~5.8％,批间差为9.0％~11.5％;该方法与进口商品化高敏CRP ELISA试剂盒平行比较检测90份血清标本,结果显示两者有良好的可比性 (r=0.968)。综上,建立的hs-CRP CLIA是一种准确、可靠、可定量的高灵敏C反应蛋白检测方法,该方法的临床应用,有利于改善我国心脏病风险评估及肠炎性疾病预后判断。     

血清肿瘤标志物CEA、CA199及CA153联合检测对肺癌的诊断价值

目的：评价血清CEA、CA199及CA153联合检测对肺癌诊断及分期的临床价值。方法：用化学发光分析法测定144例不同类型及分期的肺癌患者、92例肺良性疾病患者及76例健康体检者血清CEA、CA199及CA153水平的变化。结果：肺癌组血清CEA、CA199及CA153水平均高于正常对照组及肺良性疾病患者,有显著性差异,且TNM分期越晚,其水平越高;3项肿瘤标志联合检测可提高敏感性及准确性。结论：CEA、CA199及CA153联合检测可以为肺癌的诊断及分期提供有价值的实验室依据。