活性氧参与一氧化氮诱导的神经细胞凋亡

采用激光共聚焦成像技术，用氧化还原敏感的特异性荧光探针(DCFH-DA和DHR123)直接研究了一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰基青霉胺(SNAP)诱导未成熟大鼠小脑颗粒神经元凋亡过程中的细胞胞浆、线粒体中活性氧水平的变化，发现神经细胞经0.5 mmol/L SNAP处理1 h后，细胞胞浆及线粒体中活性氧水平大大增加.一氧化氮清除剂血红蛋白能够有效抑制细胞胞浆、线粒体中活性氧的产生，防止细胞凋亡.外源性谷胱甘肽对细胞也具有良好的保护作用，而当细胞中谷胱甘肽的合成被抑制后，一氧化氮的神经毒性大大增强.实验结果表明一氧化氮通过促进神经细胞产生内源性活性氧而启动细胞凋亡程序，而谷胱甘肽可能是重要的防止一氧化氮引发神经损伤的内源性抗氧化剂.     

巨噬细胞产生NO.和O_2~-自由基的分子机理

建立了用顺磁共振（ＥＳＲ）和化学发光技术测定巨噬细胞产生ＮＯ和氧自由基的方法．捕捉到了巨噬细胞受佛波酯刺激产生的ＮＯ．和Ｏ－２自由基．测定了在不同浓度Ｌ－精氨酸存在时佛波酯刺激后巨噬细胞产生的ＮＯ自由基．研究了巨噬细胞产生的ＮＯ和氧自由基的分子机理．结果表明巨噬细胞不仅产生氧自由基而且产生ＮＯ自由基．ＮＡＤＰＨ氧化酶产生氧自由基的部位位于巨噬细胞膜的外侧．ＮＯ合成酶活化产生ＮＯ自由基比ＮＡＤＰＨ氧化酶活化产生氧自由基晚几分钟．     

银杏叶提取物对自由基所致脑神经细胞损伤的保护作用研究

从细胞分子水平,采用大脑皮层神经细胞分离技术,自旋标记技术,酶学方法及细胞染色技术探讨自由基对神经细胞的损伤及ＥＧｂ保护作用。结果显示,用自由基攻击的细胞其自旋标记膜的序参数Ｓ,旋转相关时间τｃ及膜蛋白巯基的Ｓ／Ｗ比对照组高（Ｐ＜０．０５）,提示：受自由基攻击的细胞膜,其流动性比正常减低,且蛋白质构象发生了改变。加ＥＧｂ保护后,可减少自由基引起的膜流动性及蛋白质构象改变,起到保护神经细胞的作用。经·ＯＨ攻击的神经细胞,其ＬＤＨ活性及死细胞比率都比对照组高,而ＥＧｂ对此有保护作用。本文结果说明一定浓度ＥＧｂ可保护大脑皮层神经细胞免受自由基的损伤。     

用自旋捕集技术研究硒化合物对活性氧自由基的清除…

亚硒酸钠,硒代甲硫氨酸和硒代硫酸软骨素对黄嘌呤氧化酶体系和人多形核白细胞呼吸暴发时产生的阴离子自由基,和Ｆｅｎｔｏｎ反应生成的羟自由基有明显的清除作用,并抑制ＰＭＮ呼吸暴发时对氧的消耗,实验结果说明不同硒化合物不仅能够清除细胞体系产生的活性氧自由基,而且对化学反应生成的活性氧自由基也有清除作用。     

Interaction between fulvic acids of different origins and active oxygen radicals

Using the spin trapping technique, the interaction between fulvic acids (FAs) of different origins and the active oxygen radicals was studied. The active oxygen radicals under study included superoxide anion (O2 · -) produced by xanthine oxidase (XOD) and stimulated polymorphonuclear leukocytes (PMN) of human being and hydroxyl radical ( ·OH) produced from Fenton's reaction. It has been found that the FAs from both Kaschin-Beck disease (KBD) region and non-KBD region can accelerate the production of ·OH and scavenge O2 ·- . FA from peat can scavenge both O2·- and ·OH. The results show that the behavior of KBD and non-KBD FAs differs clearly from peat FA. It has been concluded that the superoxidation damage of KBD induced by FA is mainly due to hydroxyl radical reaction initiated in biological system.     

钙过负荷和丹参酮对线粒体脂质过氧化的影响

用ＥＳＲ自旋捕集技术捕捉到Ｆｅ２＋启动的心肌线粒体膜脂质过氧化过程中产生的脂类自由基Ｌ·（ａＮ＝１５．６Ｇ,ａＨ＝２．９７Ｇ）。钙过负荷时,钙离子使线粒体产生的脂类自由基增加,当钙浓度为３０μｍｏｌ／Ｌ·ｍｇＰｒ时,产生的脂类自由基约增加３２％。丹参酮可清除Ｆｅ３＋启动的线粒体膜脂质过氧化过程中产生的脂类自由基。当丹参酮浓度为０．８ｍｇ／ｍｇＰｒ时,清除率达到７０％左右。钙过负荷时丹参酮仍能有效清除脂类自由基。另外,还发展了用自旋探针ＣＴＰＯ测量线粒体氧消耗的方法,检测氧消耗所需样品量比Ｃｌａｒｋ电极少几十倍。用此方法测量小鼠心肌线粒体不同状态的氧消耗和呼吸控制率,证明一定浓度的Ｃａ２＋和Ｆｅ２＋影响线粒体的呼吸功能．     

多形核白细胞产生的NO和O2-自由基主要形成 ONOO-

用ESR自旋捕集技术研究了人多形核白细胞(PMN)受促癌剂佛波醇(PMA)刺激产生O₂^-和NO自由基的相互作用.发现加L-精氨酸使在PMA刺激PMN体系中捕捉到的O₂^-明显减少,加N^G-甲基精氨酸(NGMA)使在PMA刺激PMN体系中捕捉的O₂^-明显增加.用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶和光照核黄素体系证明,加L-精氨酸使PMA刺激PMN产生NO^-·自由基与O₂^-结合生成ONOO^-是加入L-精氨酸使PMA刺激PMN体系捕捉的O₂^-减少的主要原因,并且推算了加入不同浓度L-精氨酸PMN产生NO^-·自由基的量.用羟基自由基清除剂和ONOO^-氧化DMPO和DMSO及其对pH的依赖关系,证明了ONOO^-分解并没有直接生成羟基自由基.用依赖鲁咪诺的化学发光法研究了人多形核白细胞受促癌剂PMA刺激产生NO^-·自由基动力学过程.另外,用化学合成的NO^-·自由基和过氧亚硝基在模型体系研究了它们的ESR和化学发光特征.说明PMA刺激PMN生成的NO^-·和O₂^-自由基反应形成的ONOO^-是引起化学发光的主要形式.     

活性氧参与-氧化氮诱导的神经细胞凋亡

采用激光共聚焦成像技术,用氧化还原敏感的特异性荧光探针(DCFH-DA和DHR123)直接研究了一氧 化氮供体S-亚硝基-N-乙酰基青霉胺(SNAP)诱导未成熟大鼠小脑颗粒神经元凋亡过程中的细胞胞浆、线粒体 中活性氧水平的变化,发现神经细胞经0.5mmol/LSNAP处理1h后,细胞胞浆及线粒体中活性氧水平大大增 加.一氧化氮清除剂血红蛋白能够有效抑制细胞胞浆、线粒体中活性氧的产生,防止细胞凋亡.外源性谷胱甘 肽对细胞也具有良好的保护作用,而当细胞中谷胱甘肽的合成被抑制后,一氧化氮的神经毒性大大增强.实验 结果表明一氧化氮通过促进神经细胞产生内源性活性氧而启动细胞凋亡程序,而谷胱甘肽可能是重要的防止一 氧化氮引发神经损伤的内源性抗氧化剂     

不同来源腐植酸与活性氧自由基的相互作用

以ESR波谱仪为工具,利用自旋捕集技术研究不同来源腐植酸与黄嘌呤氧化酶体系和人多形核白细胞(PMN)呼吸暴发产生的超氧阴离子自由基(O₂^-·)及Fenton反应生成的羟自由基(·OH)的相互作用,发现大骨节病病区和非病区的腐植酸对·OH自由基的产生表现促进作用,而对O₂^-·自由基则表现清除作用.而泥炭腐植酸对O₂^-·和·OH均显示清除作用,明显不同于大骨节病病区和非病区腐植酸的行为,认为腐植酸诱导大骨节病的过氧化损伤应主要是通过羟自由基反应而引发的.     

用自旋捕集技术研究硒化合物对活性氧自由基的清除作用

亚硒酸钠,硒代甲硫氨酸和硒代硫酸软骨素对黄嘌呤氧化酶体系和人多形核白细胞（ＰＭＮ）呼吸暴发时产生的超氧阴离子（Ｏ）自由基;和Ｆｅｎｔｏｎ反应生成的羟自由基（·ＯＨ）有明显的清除作用,并抑制ＰＭＮ呼吸暴发时对氧的消耗。实验结果说明不同硒化合物不仅能够清除细胞体系产生的活性氧自由基,而且对化学反应生成的活性氧自由基也有清除作用。