导入Ghabpl基因对烟草叶细胞发育的影响

将棉花生长素结合蛋白基因cDNA与CaMV35S启动子和NOS终止子融合,构建了一个新的表达载体pGABPl—121,采用农杆菌介导法转化烟草,经过分化、筛选和再生,得到了具有卡那霉素抗性的植株。抗性植株经PCR及Southern杂交检测,证明外源目的基因已经整合到烟草基因组中。扫描电镜观察发现转基因烟草与对照相比叶细胞增大,结果表明,棉花生长素结合蛋白基因的表达影响了烟草叶细胞的发育。     

人工合成启动子SAR在拟南芥中的表达分析

利用植物防御基因中的病原诱导响应元件和最小35S启动子(-62～+1),人工合成了启动子SAP,并以GUS基因为报告基因,在转基因拟南芥中分析了合成启动子的表达特性.通过对转基因拟南芥GUS组织染色的分析表明:SAR启动子在子叶、毛刺、根茎交接处和根系中优势表达,在老叶中的表达量高于幼叶,说明SAR启动子具有组织和发育表达特异性.     

清栓酶伍用低分子右旋糖酐治疗下肢血栓性静脉炎12例的（摘要）

清栓酶伍用低分子右旋糖酐治疗下肢血栓性静脉炎１２例的（摘要）廊坊市香河县五百户镇卫生院石文,张秀春,高云,马士英本文报告应用蝮蛇抗栓酶伍用低分子右旋糖酐治疗下肢血栓性静脉炎１２例,其中男４例,女８例,年龄２２～７３岁。病程１周～３５年,左下肢６例,右...     

感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建及评价

为了研究香蕉束顶病毒与香蕉寄主致病的互作分子机制,本文报道利用Make Your Own“Mate＆Plate^TM”Library System试剂盒成功构建感染BBTV香蕉叶片的cDNA文库。通过改良CTAB法提取感染BBTV香蕉叶片的总RNA,采用SMART法反转录合成双链cDNA,经SfiI酶切并去除短片段之后,与经同样酶切的pGADT7-SfiI载体连接,利用电转法将重组载体转化到大肠杆菌宿主细胞中,获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒。结果得到库容量大于2.0×10⁶的初级文库,检测表明文库cDNA插入片段长度主要分布在700~2 000 bp,文库重组率为87.5％。结果表明,该文库质量较好,可用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验,本研究为开展病毒与寄主互作的研究奠定基础。     

本生烟eIF4Es基因克隆及其酵母双杂交诱饵载体构建

由木薯褐色条斑病毒(Cassava brown steak virus, CBSV)和乌干达木薯褐色条斑病毒(Uganda Cassava brown steak virus, UCBSV)引起的木薯褐色条斑病毒病,是危害木薯的主要病害之一。目前尚无有效防治方法,并且特别是缺乏CBSV/UCBSV抗性育种材料。真核翻译起始因子4E (eukaryotie translation initiation factor4E, eIF4E)不仅参与蛋白质的翻译起始,并且Potyviruses的复制和翻译也依赖于eIF4E与病毒基因组连接蛋白(virus genome linked protein, VPg)的相互作用,目前发现的植物隐性抗病基因大部分都是eIF4E家族的等位基因。本研究利用生物信息学方法和RT-PCR技术获得本生烟(Nicotiana benthamiana) eIF4E家族的8个基因,聚类分析显示它们分别编码eIF4E、eIF4E的异构体和类似帽结合的蛋白。为筛选与CBSV/UCBSV相互作用的本生烟eIF4E家族蛋白,本研究进一步构建了这8个基因的Lex A-酵母双杂交系统的诱饵载体,并导入酵母细胞EGY48 (p8op-LacZ)进行细胞毒性和自激活检测。结果显示导入重组质粒的EGY48 (p8op-LacZ)酵母细胞在SD/-His/-Ura缺陷型培养基上生长良好,在SD/-Trp/-Ura缺陷型平板上不生长,并且在SD/Gal/Raf/-His/-Ura/X-Gal培养基上不显蓝色,说明重组质粒表达产物不仅对该酵母细胞无毒性,而且对下游报告基因无自激活作用,可用于该系统的互作蛋白筛选研究。本研究为利用酵母双杂交系统发现与CBSV/UCBSV相互作用的本生烟eIF4E基因,探索通过基因编辑与CBSV/UCBSV互作的寄主因子进行抗CBSV/UCBSV分子育种提供科学依据。     

坡柳(Dodonaea viscosa L.)丛枝植原体新病原的分子鉴定

从四川攀枝花芒果园中表现为丛枝、小叶和黄花等症状的坡柳植株发病样品中,利用植原体16S rDNA基因的通用引物R16m F2/R16m R1和R16F2n/R16R2,对发病植株总DNA进行巢式PCR检测,同时设计植原体抗原膜蛋白基因(AntMP)的保守引物AntMP-F/AntMP-R进行PCR验证。结果显示,坡柳样品巢式PCR的第一轮、第二轮DNA条带大小分别为1 400 bp和1 200 bp左右,经NCBI序列相似性比较均为植原体16S rDNA序列,Gen Bank登录号为KT957205和KT957206;PCR结果显示抗原膜蛋白基因大小约600 bp,与目标基因大小一致。将测得的16S rDNA基因序列与Gen Bank数据库中登录的16SrⅠ~ⅩⅤ组植原体16S rDNA序列进行同源性比对,构建系统进化树,结果显示四川坡柳丛枝植原体(DOVI-SC)属于16SrⅠ组(即翠菊黄花组),与已报道的5个16SrⅠ组(AY101386,AY566302,AY389822,L33760和KP662119)同属一个组。利用植原体亚组分类鉴定软件iPhy Classfier对获得的2条植原体16S rDNA序列进行虚拟RFLP分析,结果显示KT957205,KT957206与16SrⅠ-B亚组洋葱黄化植原体(NC-005303)相似度分为1.0、0.97,归属于16SrⅠ-B亚组。本研究对引起四川坡柳丛枝的植原体病原进行检测,为坡柳植原体病害的早期诊断、快速检测以及预防措施制定提供科学线索。     

表达γ-亚麻酸的无筛选标记转基因大豆的鉴定

对所获得的9株无筛选标记基因的T1代莆豆8008转基因大豆的T2代进行了分析。PCR和Southern杂交检测表明标记基因已不存在于转基因株系中,同时目的基因以纯合或者杂合状态存在于部分株系中,除草剂抗性分析也表明这些转基因株系已不再具有抗除草剂的能力。Northern杂交检测表明Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在转基因株系中可以转录。GC分析表明其中6个转基因植株富含GLA。     

粒细胞集落刺激因子对全身炎症反应综合征中细胞因子的影响

目的:对粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在全身炎症反应综合征及其治疗中的作用和机制进行初步的探究.方法:腹腔注射脂多糖(LPS)建立全身炎症反应综合征的小鼠动物模型后,将BALB/c模型小鼠随机分为生理盐水(NS)、50 μg/m2重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、200 μg/m2rhG-CSF、400 μg/m2 rhG-CSF四组,进行脾淋巴细胞的分离,通过RT-PCR、ELISA等方法检测共刺激分子和炎症相关因子在不同组别中的表达.结果:各RHG-CSF组的炎症相关因子表达有不同程度下调.诱生性共刺激分子(ICOS)表达下调,同时杀伤性T细胞相关抗原-4(CTLA-4)的表达量明显上调.作用最明显的是200μg/m2 rhG-CSF组.结论:rhG-CSF对于全身炎症反应综合征有一定的治疗作用且存在剂量依赖性.     

PD-L1对Jurkat细胞活性及凋亡的影响

目的:探讨PD-L1(Programed Death Ligand-1)表达的调控以及其对Jurkat细胞增殖分化及凋亡的影响.方法:通过IFN-γ在体外诱导Jurkat细胞使PD-L1表达上调,并设计针对PD-L1的siRNA对Jurkat细胞进行转染抑制PD-L1的表达,通过RT-PCR、PCR测定Jurkat细胞分泌IL-2的变化;流式细胞术测定Jurkat细胞的凋亡情况.结果:运用β-actin进行半定量后,根据相应的模板量进行PCR,在设计的3条针对PD-L1的siRNA(siRNA-A,siRNA-B,siRNA-C)中选出一条可以高效抑制PD-L1表达的即siRNA-A,siRNA-A终浓度80nM转染Jurkat细胞24小时后PD-L1的表达明显抑制.使用IFN-γ终浓度2000U/ml作用于Jurkat细胞24小时后PD-L1表达明显增高,通过RT-PCR、PCR观察到PD-L1表达高低与Jurkat细胞分泌IL-2水平呈负相关,流式细胞术显示PD-LI表达增强能降低Jurkat细胞凋亡.结论:体外合成的针对PD-L1基因特异性siRNA,转染Jurkat细胞后可特异性抑制PD-L1的表达.IFN-γ在体外可刺激Jurkat细胞PD-L1表达增高.PD-L1信号在体外对Jurkat细胞分泌IL-2呈负相关,并且PD-L1能抑制Jurkat细胞凋亡.